鸡传染性法氏囊病活疫苗(B87株)病毒含量细胞间接免疫荧光方法的建立

为测定鸡传染性法氏囊病活疫苗(B87株)的病毒含量,采用Vero细胞建立鸡传染性法氏囊病活疫苗(B87株)病毒含量细胞间接免疫荧光方法,测定细胞半数感染量(TCID50)。通过与传统鸡胚半数致死量(ELD50)方法进行敏感性和相关性比较,间接免疫荧光方法具有更高的敏感性,两种方法的相关系数r为0.823。间接免疫荧光方法的建立为该疫苗的检验提供了一种新途径。

测定鸡传染性法氏囊病活疫苗(B87株)参考品有效期的经典热加速稳定试验

采用热加速稳定性试验,以鸡胚半数致死量测定法对制备的参考疫苗进行病毒含量测定,预期其贮存有效期。根据Arrhenius方程,以不同温度下衰减速率常数K估算较低温度下K值,并计算参考疫苗在-30℃下贮存效力值下降一个滴度所需的时间约为2.4年。

传染性法氏囊病病毒疫苗株B87在DF-1细胞和Vero细胞感染性研究

为比较传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)疫苗株B87对DF-1细胞和Vero细胞易感性,对比了IBDV B87株感染两种细胞后的致细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)、病毒基因组dsRNA、半数组织感染量(median tissue culture infective dose,TCID 50)水平、病毒载量及VP2基因表达水平。结果显示,IBDV B87株感染后,DF-1细胞CPE程度高于Vero细胞;DF-1细胞病毒基因dsRNA荧光密度高于Vero细胞;DF-1细胞病毒载量荧光密度高于Vero细胞,且DF-1细胞中病毒滴度(105.423±0.03296 TCID 50/0.1 mL)极显著高于Vero细胞中病毒滴度(102.592±0.03428 TCID 50/0.1 mL,P<0.01),VP2基因表达量显著高于Vero细胞(P<0.05)。说明IBDV B87株对DF-1细胞的感染性高于Vero细胞。

法氏囊(B_(87)株)活疫苗生产工艺改进试验

分别采用尿囊腔接种法和绒毛尿囊膜接种法将IBDB87株接种鸡胚,并对不同时段收获的胎儿测定ELD50。对比其结果发现,尿囊腔接种也能达到绒毛尿囊膜接种的效果,病毒含量ELD50,且两种接种方法均在66～96h之间出现死亡高峰。经病毒含量测定,该时段死亡≥105.0胎儿较其它时段死亡的胎儿病毒含量高出1.5倍以上,表明尿囊腔接种可以用于IBDB87株种毒的繁殖。

鸡传染性法氏囊疫苗株B87的最佳收获时间和接种浓度

将鸡传染性法氏囊病中等毒力株B87株进行1：10、1：60、1：100及1：1000稀释，分别接种于鸡胚的尿囊腔中，分别于60～72、78～86、96和120h收获死胚，测定收获病毒液的效价。对比试验结果表明，1：60稀释、78～86h收获的死胚，IBDVB87株病毒含量最高。

鸡传染性法氏囊炎(B87株)活疫苗生产中胚液与胎儿的毒价对比试验

采用尿囊腔接种法将IBD B87株接种适宜日龄鸡胚,分别收获规定时间内死亡的胚液及胎儿(将胎儿捣碎),然后分别测定两者的毒价,结果发现胚液的毒价远远低于胎儿的毒价,至少低一个滴度,表明在生产中只收获胎儿而不收获胚液是完全可行的。

鸡传染性法氏囊中等毒力(B87株)种毒繁殖工艺改进的试验报告——采用鸡胚成纤维细胞繁殖种毒的试验方法

本试验采用SPF胚制备CEF,分三组按照一定比例接种IBDV-B87生产种毒,收获感染细胞。计算ELD50,每0.2 mL病毒含量为≥105.89ELD5。对鸡胚的毒力:48～144 h内死亡17/20。剖检:法氏囊病变典型。结果符合中华人民共和国兽用生物制品规程的规定。繁殖的IBDV-B87细胞种毒相比传统的人工气室绒毛尿囊膜接种法制备的种毒,可降低生产成本,提高SPF胚利用率。

传染性法氏囊病活疫苗对重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1)免疫效果的影响

为评价鸡传染性法氏囊病中等毒力活疫苗对重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1)免疫效果的影响,分别对蛋雏鸡和麻花肉雏鸡于14日龄同时接种鸡传染性法氏囊病活疫苗(B87株)和重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1),设空白对照组(均不免疫禽流感和传染性法氏囊病疫苗)和免疫对照组(只免疫重组禽流感病毒灭活疫苗),进行法氏囊病理变化观察和血清H5N1亚型禽流感病毒抗体检测。结果显示,鸡传染性法氏囊病活疫苗均可对蛋雏鸡和麻花肉雏鸡引起法氏囊炎性反应,但对重组禽流感病毒灭活疫苗免疫抗体的产生无显著影响。

传染性法氏囊病毒VP2蛋白的高效表达与免疫原性分析

为了实现传染性法氏囊病毒(IBDV)B87毒株VP2蛋白在大肠杆菌中的高效可溶性表达,将IBDV B87毒株VP2基因插入原核表达载体p ET-28a(+),构建重组质粒p ET28a-VP2,将其转化不同大肠杆菌基因工程菌株,通过IPTG诱导表达VP2外源蛋白。利用鸡传染性法氏囊病抗原快速检测试纸筛选,确定了BL21(DE3)为VP2可溶性蛋白的高效表达菌株。SDS-PAGE、Western blot分析表明,VP2实现了可溶性表达,且可溶性VP2蛋白具有良好的反应原性。将表达的重组蛋白利用琼脂扩散试验(AGP)分析,结果表明,VP2蛋白的AGP效价达到1∶64。将重组蛋白免疫接种SPF鸡,制备的抗血清AGP效价可达1∶16,说明表达的B87毒株VP2蛋白免疫原性良好。