鸡传染性法氏囊中等毒力(B87株)种毒繁殖工艺改进的试验报告——采用鸡胚成纤维细胞繁殖种毒的试验方法

本试验采用SPF胚制备CEF,分三组按照一定比例接种IBDV-B87生产种毒,收获感染细胞。计算ELD50,每0.2 mL病毒含量为≥105.89ELD5。对鸡胚的毒力:48～144 h内死亡17/20。剖检:法氏囊病变典型。结果符合中华人民共和国兽用生物制品规程的规定。繁殖的IBDV-B87细胞种毒相比传统的人工气室绒毛尿囊膜接种法制备的种毒,可降低生产成本,提高SPF胚利用率。

鸡传染性法氏囊疫苗株B87的最佳收获时间和接种浓度

将鸡传染性法氏囊病中等毒力株B87株进行1：10、1：60、1：100及1：1000稀释，分别接种于鸡胚的尿囊腔中，分别于60～72、78～86、96和120h收获死胚，测定收获病毒液的效价。对比试验结果表明，1：60稀释、78～86h收获的死胚，IBDVB87株病毒含量最高。

传染性法氏囊病毒VP2蛋白的高效表达与免疫原性分析

为了实现传染性法氏囊病毒(IBDV)B87毒株VP2蛋白在大肠杆菌中的高效可溶性表达,将IBDV B87毒株VP2基因插入原核表达载体p ET-28a(+),构建重组质粒p ET28a-VP2,将其转化不同大肠杆菌基因工程菌株,通过IPTG诱导表达VP2外源蛋白。利用鸡传染性法氏囊病抗原快速检测试纸筛选,确定了BL21(DE3)为VP2可溶性蛋白的高效表达菌株。SDS-PAGE、Western blot分析表明,VP2实现了可溶性表达,且可溶性VP2蛋白具有良好的反应原性。将表达的重组蛋白利用琼脂扩散试验(AGP)分析,结果表明,VP2蛋白的AGP效价达到1∶64。将重组蛋白免疫接种SPF鸡,制备的抗血清AGP效价可达1∶16,说明表达的B87毒株VP2蛋白免疫原性良好。