新城疫热稳定性天然弱毒株B95生物学与免疫学特性初步研究

新城疫病毒Ｂ９５（ＮＤＶ Ｂ９５）是从国外引进的一株热稳定性的天然弱毒株。本项研究证明：本毒株对鸡胚和鸡无毒副作用，ＩＣＰＩ和ＩＶＰＩ值分别为０；该病毒可凝集鸡、鸭、牛、绵羊、鹅、猪、小白鼠和人的红血球，血凝价与Ⅰ系、ＨＢ；和 Ｌａｓｏｔａ相似；将病毒置 ５６℃ ２ｈ，置 ３７℃保存１０ ｄ，仍见有血凝性和对鸡胚感染性；经点眼、饮水、非免疫鸡与免疫鸡同居，均能获得好的免疫效果，并能耐受新城疫强毒株的攻击。

新城疫热稳定性天然弱毒株B95免疫效果的研究

分别用NDV疫苗株和不同稀释度的B95毒株 ,经不同免疫途径进行雏鸡的免疫 ,当雏鸡NDV母源抗体下降到较低水平时 ,B95病毒液 5 0倍稀释组在免疫后 5d即可见抗体滴度上升 ,到达高峰时抗体效价比免疫前上升 4.6个滴度 ,在攻毒试验中 ,除B95 10 0 0 0倍稀释组外 ,其余B95各组在免疫后 15d、30d攻毒保护率均为 5 / 5 ,即全部保护。当在雏鸡母源抗体较高时免疫 ,B95病毒液 5 0倍稀释组抗体达高峰时其效价比对照组高 2 .5个滴度 ,结果表明 ,该组与Clone30疫苗组免疫效果相当 。

新城疫热稳定性天然弱毒B95株核酸疫苗的构建

将含有新城疫热稳定性天然弱毒B95株F基因的重组克隆质粒 pGEM F用NotⅠ单酶切 ,电泳回收纯化目的片段 ,与同样用NotⅠ单酶切并经去磷酸化处理的真核表达载体 pcDNA3.1连接 ,构建了新城疫核酸疫苗 ,并用所构建的新城疫核酸疫苗与载基因阳离子脂质体结合进行了免疫试验 ,通过ELISA、淋巴细胞转化试验检测了核酸疫苗在鸡体内的表达。结果显示 ,表达产物作为抗原物质刺激机体产生了特异性应答反应 ,引起了机体特异性的体液免疫和细胞免疫 ,对新城疫强毒攻击的保护率为 75 %。

时效制度对B95_(ЛЧ)锻件断裂韧性和抗应力腐蚀性能的影响

研究了双级时效工艺和回归再时效(RRA)工艺对B95ЛЧ铝合金锻件的断裂韧性和应力腐蚀性能的影响。测定了9种双级时效工艺和3种RRA工艺状态下的断裂韧度,同时测定了各时效工艺状态下的电导率和强度指标。通过对试样组织性能的分析研究发现:当一级时效条件相同时,随着二级时效温度的升高和时效时间的延长,断裂韧度和抗应力腐蚀性能提高,其中以115℃×7h+185℃×13h为最佳时效工艺。RRA工艺能使合金获得最高的强度,经回归20min的RRA试样的抗应力腐蚀性能也能达到115℃×7h+185℃×13h的水平,但断裂韧度不如采用较高二级时效温度的试样。

一种激活B95—8细胞增加EBV抗原表达的新方法

为获取良好的免疫原,以制备抗EBV的单克隆抗体,本文研究了用H_2O_2诱导B95—8细胞增加EBV抗原表达的实验方法及结果。实验证实用0.2 mMH_2O_2与B95—8细胞作用30分钟,再培养5天,可诱导大量EBV抗原合成。对所得结果进行统计学处理表明经H_2O_2激活的B95—8细胞,EBV抗原阳性细胞的百分率非常显著地高于未经H_20O_2处理的B95—8细胞(P<0.001)。该结果提示经H_2O_2激活的B95—8细胞可作为一种良好的免疫原,用于诊断NPC或制备抗EBV的特异性抗体。同时,鉴于H_2O_2能诱导EBV基因合成EBV抗原,而这些抗原一旦合成,瘤细胞即死亡,故H_2O_2亦可用于治疗NPC。

B95-7P菌株的抑菌效果及生物学效应初探

Ｂ９５－７Ｐ菌株培养液及代谢液对１４种种传和土传病原真菌的抑菌效果明显，且培养液的抑菌效果比代谢液好；室内发芽试验和大田栽培试验表明，Ｂ９５－７Ｐ菌株培养液处理对玉米、小麦、花生和棉花４种作物种子发芽势、发芽率无影响，且能促进玉米。

B95-7p菌株的鉴定

依照伯杰细菌鉴定手册，通过葡萄糖氧化发酵、乙酰甲基甲醇、硝酸盐还原、淀粉水解和需氧性检测等多项生理生化反应，鉴定 Ｂ９５７ｐ 菌株为枯草芽孢杆菌（ Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｉｔｉｌｉｓ）

新城疫热稳定性天然弱毒株B95免疫学特性的研究

采免疫鸡口腔、泄殖腔分泌物接种鸡胚,测尿囊液中病毒凝集价表明,免疫后2～11天口腔、泄殖腔分泌物中均有B95病毒粒子的存在。同居感染试验表明,免疫后12、16天时两组鸡抗体水平基本相同。B95经不同途径免疫鸡,均能刺激机体产生良好的免疫应答,其中点眼和喷雾免疫效果最好。与Clone30、V4、LaSota疫苗相比较,B95免疫鸡HI抗体产生快、水平高、持续时间长。

B95铝合金在铈盐溶液中形成转化膜的电极反应机理

采用电化学阻抗谱(EIS)研究B95铝合金在10 mmol/L CeCl3溶液中转化膜的形成过程,在建立稀土转化膜成膜过程三阶段机理基础上,采用电化学阻抗谱(EIS)技术研究溶液中氧含量、H2O2、pH值等各种条件变化对转化膜形成过程的影响。结果表明:O2参与的反应不是Ce转化膜形成速度的决定步骤,添加H2O2加快Ce转化膜形成速度,特别是形成过程的第一阶段;微阴极区氧主要按二电子途径还原,使局部pH上升,当pH达到或超过8.05时,Ce(Ⅲ)水合氢氧化物/氧化物开始沉积;Ce(Ⅲ)转化膜达到稳定平衡阶段,部分Ce(OH)3会被氧还原的中间产物H2O2氧化成CeO2;在中性或弱酸性溶液中,提高溶液的pH值对最终成膜有利。

B95п铝合金丝材时效制度研究

通过试验研究确定了B95п丝材用于铆钉时的最佳时效制度,该制度使合金丝材的抗拉强度、剪切强度和铆接性能都满足相应的标准要求。

B95оч铝合金的热变形行为研究

采用Gleeble-1500D热模拟试验机进行高温等温压缩变形试验,研究了B95оч铝合金在变形温度为330～450℃、应变速率为0.001～1.000 s-1条件下的热变形行为,并利用金相显微镜(OM)和透射电子显微电镜(TEM)分析了B95оч铝合金在不同变形条件下的组织特征。研究结果表明:变形温度和应变速率对B95оч铝合金的流变应力大小有着显著的影响,合金的流变应力随变形温度的升高而降低,随应变速率的增加而增大。B95оч铝合金在450℃以下热变形过程中析出大量的第二相粒子,并随着温度的降低数量显著增加。B95оч铝合金热变形后平均亚晶尺寸随Zener-Hollomon参数的升高而减小,即随着变形温度的降低、应变速率的升高而减小。B95оч铝合金热变形的流变应力行为可以用包含Arrhenius项的Zener-Hollomon参数来描述,其变形激活能为124.09 kJ·mol-1。

鸡新城疫病毒B_(95)株免疫研究

本试验采用鸡胚增殖培养鸡新城疫B95 株病毒。经对培养的尿囊液病毒价达EID50 107.75。无菌性检验和安全性检验均符合疫苗要求 ,将其选作试验用疫苗进行了试验。结果表明 ,该苗滴鼻点眼免疫的最小剂量为105.75,拌料免疫最小剂量为106.75。以B95 株疫苗滴鼻点眼免疫的鸡 ,在免疫后5天时就可产生坚强的免疫力 ,免疫期可达4个月。同居接触免疫鸡能获得了良好的免疫效果 ,攻毒总保护率与滴鼻点眼免疫差异不显著。拌料免疫效果良好 ,与NDV滴鼻点眼免疫差异不显著。B95 株苗在0～4℃条件下保存4个月 ,免疫攻毒保护率达80% ;在室温下保存2个月 ,免疫攻毒保护率达100%。

新城疫病毒B_(95)株的RT-PCR检测

根据文献发表的 F基因序列 ,设计了 1对新城疫病毒 B95株的特异引物 NDV- P1 / P2 ,探讨了以其进行 RT- PCR检测的可行性。结果证明 ,用该引物可以扩增出 1条 310 bp的特异核酸带 ,敏感性为 0 .0 0 4 3mg/ L。

鸡新城疫病毒B_(95)株的RT-PCR检测方法研究

本试验设计了一对B95 株的特异引物NDV -P1/P2,探讨了对其进行RT-PCR检测的可行性。结果证明 ,用该引物可以扩增出一条310bp的特异核酸带 ,敏感性为0.0043ng/ul。

新城疫病毒B_(95)株HN蛋白基因的克隆及序列分析

根据 NDV HN蛋白已知基因序列设计一对引物 ,以提取的澳大利亚布里斯班 NDV分离株 B95基因组 RNA为模板 ,利用 RT- PCR技术扩增得到一条约 1.9kb的条带。将扩增产物克隆到 PGEM- T- easy载体中 ,并对重组质粒进行酶切分析、PCR鉴定 ,结果证明我们得到了 HN基因的阳性重组子 ,随后采用 Sanger's双脱氧末端终止法对阳性重组子进行核苷酸序列测定 ,获得该基因全长序列 ,并进行同源性分析。 B95株与其他毒株核苷酸同源性为 95 .1%～ 87% ,氨基酸同源性为96 .1%～ 92 .1%。

几种珍稀灵长类淋巴细胞系的建立和保存

本文介绍用EBV转化建立的滇金丝猴、川金丝猴、白眉长臂猿、黑叶猴、灰叶猴、白臀叶猴、懒猴等珍稀灵长类的淋巴细胞系,并对携带病毒基因的B_(95-8)细胞的染色体作了详细分析。

lncRNA FAM95B1在胶质瘤中的表达及其影响LN382细胞增殖和迁移的可能机制

目的:探讨lncRNA FAM95B1对胶质瘤细胞增殖和迁移能力的影响并探究其相关作用机制。方法:选取2018年1月至2020年8月于合肥市第三人民医院行手术治疗的38例胶质瘤患者的胶质瘤组织及癌旁组织标本,利用qPCR检测胶质瘤组织与4种细胞系中FAM95B1的表达水平,以表达最低的胶质瘤LN382细胞为研究对象,转染空载质粒(对照组)或pcDNA3.1-FAM95B1质粒(实验组)。MTT法和划痕实验检测FAM95B1对LN382细胞增殖和迁移能力的影响。生物信息学分析技术和双荧光素酶基因报告实验预测并验证FAM95B1与miR-26a-5p及PTEN之间的相互作用机制,应用qPCR和WB法检测FAM95B1对miR-26a-5p和PTEN表达的影响。结果:FAM95B1在胶质瘤组织中的表达明显低于癌旁组织(P<0.01)。FAM95B1在多种胶质瘤细胞系中的表达均明显低于正常脑胶质细胞(均P<0.01)。过表达FAM95B1可以下调LN382细胞的增殖(P<0.05)和迁移能力(P<0.01)。FAM95B1能够靶向结合miR-26a-5p(P<0.01),miR-26a-5p能够靶向结合PTEN mRNA(P<0.01)。过表达FAM95B1可下调LN382细胞中miR-26a-5p的表达(P<0.01),促进PTEN mRNA的表达(P<0.01)。结论:在胶质瘤组织和细胞系中异常低表达的FAM95B1通过发挥竞争性内源RNA的功能抑制miR-26a-5p的表达而增强PTEN蛋白表达,抑制胶质瘤细胞系LN382的增殖和迁移。

LncRNA FAM95B1调控胰岛素样生长因子2的表达对宫腔粘连发生的影响

目的探究lncRNA FAM95B1及蛋白编码基因胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor 2,IGF2)对宫腔粘连发生的作用,为宫腔粘连的防治提供新的分子靶点。方法在宫腔粘连组织中采用反转录实时定量聚合酶链反应(reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)方法检测lncRNA FAM95B1的mRNA表达水平,采用Western blotting方法检测IGF2及纤维化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、I型胶原蛋白(collagen type I alpha 1 chain protein,COL1A1)的蛋白表达水平。在经过转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)处理的子宫内膜基质细胞(endometrial stromal cells,ESCs)中,采用RT-qPCR方法检测lncRNA FAM95B1、IGF2、纤维化标志物(α-SMA、COL1A1、Snail)及上皮标志蛋白E-cadherin的mRNA表达水平。在ESCs中,分别下调lncRNA FAM95B1和IGF2基因,验证二者的调控关系;免疫共沉淀实验检测lncRNA FAM95B1与IGF2的结合关系。然后,si-FAM95B1转染入ESCs中并经过TGF-β1处理,进一步探究lncRNA FAM95B1及IGF2在ESCs向成纤维细胞分化的上皮-间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)过程中的作用。结果宫腔粘连组织中lncRNA FAM95B1、IGF2及纤维化标志物α-SMA、COL1A1的表达水平上调;经过TGF-β1处理的ESCs中lncRNA FAM95B1、IGF2、纤维化标志物(α-SMA、COL1A1、Snail)的表达水平上调,上皮标志蛋白E-cadherin的表达水平下调。IGF2随lncRNA FAM95B1的变化而变化,而下调IGF2后,lncRNA FAM95B1的表达无明显变化,lncRNA FAM95B1正向调节IGF2;lncRNA FAM95B1与IGF2在TGF-β1处理的ESCs中结合。si-FAM95B1在ESCs向成纤维细胞分化的EMT过程中抑制IGF2的表达,发挥抗纤维化作用。结论si-FAM95B1可通过下调IGF2的表达抑制宫腔粘连的发生,lncRNA FAM95B1/IGF2轴可能为宫腔粘连的靶向治疗提供新的分子靶点。