一种激活B95—8细胞增加EBV抗原表达的新方法

为获取良好的免疫原,以制备抗EBV的单克隆抗体,本文研究了用H_2O_2诱导B95—8细胞增加EBV抗原表达的实验方法及结果。实验证实用0.2 mMH_2O_2与B95—8细胞作用30分钟,再培养5天,可诱导大量EBV抗原合成。对所得结果进行统计学处理表明经H_2O_2激活的B95—8细胞,EBV抗原阳性细胞的百分率非常显著地高于未经H_20O_2处理的B95—8细胞(P<0.001)。该结果提示经H_2O_2激活的B95—8细胞可作为一种良好的免疫原,用于诊断NPC或制备抗EBV的特异性抗体。同时,鉴于H_2O_2能诱导EBV基因合成EBV抗原,而这些抗原一旦合成,瘤细胞即死亡,故H_2O_2亦可用于治疗NPC。

蛇炮簕对EB病毒壳抗原在体外细胞表达的抑制作用

目的:观察蛇炮簕对EB病毒壳抗原(EBV-VCA)在体外细胞表达的抑制作用。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法证实蛇炮簕提取液对B95-8细胞无毒性后,采用免疫酶法研究蛇炮簕提取液对B95-8细胞EBV-VCA表达的抑制作用。结果:无毒性浓度的蛇炮簕提取液对正丁酸钠、巴豆油联合激发的EBV-VCA表达有较明显抑制作用,且随浓度增加而抑制作用加强。结论:蛇炮簕有较强的体外抑制鼻咽癌EBV-VCA表达的作用,值得进一步研究。

EBV全基因组基因芯片构建与初步验证

目的:鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)高发于中国南方,是一种恶性度较高的肿瘤,与EB病毒关系非常密切。本研究利用前期已经设计和克隆好的EB病毒(EBV)已知和预计的编码基因作为cDNA探针,用于研制EBV微阵列。利用能高产EBV病毒颗粒的B95-8细胞作为检测对象,观测基因芯片检测的效果,已确定是否将来用于临床检测。方法:87个EBV基因探针通过一对设计于载体多克隆两端的引物进行PCR扩增。产物纯化后,探针被打印在Corning玻片上。通过与Cy3标记的B95-8细胞cDNA进行杂交反应,检测B95-8细胞内EBV基因表达。RT-PCR验证检测。结果:利用构建的EBV芯片,成功地在B95-8细胞中检测到了几乎所有的EBV潜伏基因的表达,随后RT-PCR验证了该结果。结论:我们成功地构建了EBV微阵列,且设计的EBV探针检测是有效的。但EBV微阵列是否可以用于鼻咽癌标本的检测还有待进一步证实。

中国汉族人HLA纯合细胞及狨猴细胞系DP基因结构分析

应用聚合酶链反应、基因克隆和末端终止技术，测定了分属ＤＲ９、ＤＲ１１和ＤＲ１２的６个中国汉族人ＨＬＡ纯合细胞ＤＰＢ１基因第二外显子的核苷酸序列。结果表明，６个纯合细胞分别带有４种等位特异性ＤＰＢ１＊０２０１２、ＤＰＢ１＊０２０２、ＤＰＢ１＊０５０１、ＤＰＢ１＊１３０１，基因结构和白种人相同，因而采用国外参考试剂和探针对中国人标本作ＤＰＢ１基因分型是可行的。同时，首次揭示了狨猴ＤＰＢ１基因第二外显子序列，该序列和人类ＤＰ基因同源性为６９．９％。