实验性脑缺血再灌流后Bak和Bad基因在脑内的表达

目的：观察全脑缺血再灌流后Bak和Bad基因在脑内表达的变化规律和意义。方法：采用大鼠4血管结扎全脑缺血30min再灌流模型，用免疫组织化学染色法观察Bak和Bad基因在脑内的表达。结果：全脑缺血再灌流后12h开始在皮质和海马等缺血易损部位：Bak表达降低，24h达最低点；而Bad则表达升高，24h达最高点；表达变化最明显的时间均是24～48h，此时间与脑缺血后脑细胞凋亡发生的高峰时间一致。结论：脑缺血再灌流可以诱导Bak和Bad基因在脑内表达发生变化，这种变化与脑细胞凋亡的发生关系密切。Bak在脑缺血后表达降低说明其在脑内表达可抑制细胞凋亡。

BAD基因在敖汉细毛羊发情不同时期卵巢表达规律及对生殖激素的影响

本实验研究旨在探究BAD基因在敖汉细毛羊中的不同发情时期卵巢中表达量的变化规律以及对生殖激素的影响,为探讨其与绵羊发情的关系奠定基础。首先利用放射免疫方法测定敖汉细毛羊血液中促卵泡激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E_2)和孕激素(P_4)的浓度,然后利用qRT-PCR检测乏情期、发情前期、发情间期和发情期卵巢BAD基因的表达量变化。结果表明:卵巢中BAD基因在发情前期的表达量极显著高于乏情期、发情期和发情间期(P<0.01),在发情期的表达量极显著高于乏情期和发情间期(P<0.01),乏情期和发情间期的表达量基本相同(P>0.05);E_2和LH浓度在BAD基因表达量最高的发情前期维持较高水平,P_4的浓度维持较低水平。综上可知,BAD基因的表达可能促进了E_2和LH浓度升高,抑制了P_4产生,进而影响细毛羊发情,可为绵羊发情的研究提供借鉴。

黄药子及黄药子配伍当归对大鼠肝组织grp78和bad基因表达的影响

目的:研究单用黄药子及黄药子配伍当归对大鼠肝组织grp78和bad基因表达的影响,探讨黄药子引起肝损伤以及配伍当归后其损伤减轻的机制。方法:30只清洁级SD雄性大鼠随机分为黄药子组、黄药子配伍当归组和对照组,每组10只。上述3组大鼠分别给予黄药子提取物混悬液(1mL相当于黄药子0.067g)、黄药子和当归提取物混悬液(1mL相当于黄药子0.067g,当归0.133g)及0.5%羧甲基纤维素钠(CMC)溶液各2mL,灌胃,2次/d,持续14d。末次给药24h后采用实时定量聚合酶链式反应(实时定量PCR)的方法测定各组大鼠肝脏grp78和bad基因的表达。结果:3组大鼠肝脏grp78和bad基因表达通过看家基因gapdh校正后的结果如下:黄药子组grp78和bad基因的2-△△Ct分别为339.9和256.2,黄药子配伍当归组分别为17.0和9.9,对照组均为1.0。与对照组比较,黄药子组grp78和bad基因表达明显上调,差异有统计学意义(P<0.01);而与黄药子组比较黄药子配伍当归组基因表达有显著的下调趋势,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:黄药子可上调大鼠肝脏grp78和bad基因的表达,这可能是黄药子引起肝损伤的机制;当归对黄药子致大鼠肝脏grp78和bad基因表达上调的拮抗作用可能是其减轻黄药子所致肝损害的机制之一。

Bad基因在黄体期绵羊生殖器官中表达的比较研究

以黄体期小尾寒羊和萨福克羊为研究对象,采用免疫组织化学技术,针对Bad基因在母羊生殖器官卵巢,输卵管和子宫中的表达与定位进行初步研究,在卵巢中Bad基因均在多数黄体细胞中表达;在输卵管宫管结合部、峡部和壶腹部的分泌细胞Bad基因均有不同程度的表达,未发现纤毛细胞Bad阳性细胞;子宫内膜腺体小泡表达Bad阳性,子宫内膜子叶、基质的阳性细胞数极少,阳性细胞呈轻度着色,显弱阳性。利用计算机图像分析技术测量小尾寒羊和萨福克羊Bad基因表达的阳性细胞率和平均光密度,Bad基因在这两种绵羊组织中的表达规律大体相似,也存在一些明显的差异:萨福克羊的黄体细胞较小尾寒羊中的细胞凋亡更明显,萨福克羊输卵管伞部和壶腹部上皮Bad阳性细胞率均高于小尾寒羊;小尾寒羊子宫内膜子叶和基质Bad阳性细胞率和平均光密度均显著高于萨福克(P<0.01)。结果表明,小尾寒羊和萨福克羊生殖器官中细胞凋亡的差异与Bad基因表达的差异,可能是造成两者繁殖力高低差异的基础。

凋亡相关基因bcl-2、bad在乳腺癌中的表达及意义

目的:探讨凋亡相关基因bcl-2、bad在乳腺癌组织中的表达及其与患者预后的关系。方法:采用免疫组化方法检测10例正常乳腺组织、10例乳腺纤维瘤组织、40例青年乳腺癌组织、40例老年乳腺癌组织中bcl-2、bad基因的表达,并检测80例乳腺癌组织中ER、PR的表达。结果:bcl-2表达随乳腺癌的组织学分级增加呈递减趋势(P<0.01),青年乳腺癌患者bcl-2表达阳性率显著低于老年乳腺癌患者(P<0.05),bcl-2表达阳性率与腋窝淋巴结转移呈负相关(P<0.05),与ER、PR表达呈正相关(P<0.05)。bad表达随乳腺癌的组织学分级增加也呈递减趋势(P<0.05),青年乳腺癌患者bad表达阳性率显著低于老年乳腺癌患者(P<0.05),bad表达阳性率与腋窝淋巴结转移、ER、PR表达无明显相关(P>0.05)。结论:bcl-2、bad可以作为预测乳腺癌预后的因子。检测乳腺癌组织中bcl-2基因表达水平,特别是联合检测bcl-2、bad以及ER、PR的表达水平,有助于个体化判断乳腺癌患者的预后,并指导治疗。

Bad基因在小尾寒羊输卵管上皮组织的表达

采用免疫组织化学方法检测小尾寒羊输卵管上皮组织中Bad基因的表达水平,利用计算机图像分析技术测量小尾寒羊生殖周期的不同阶段输卵管上皮组织Bad基因表达的平均光密度和平均阳性面积。结果显示,小尾寒羊输卵管伞部、壶腹部和峡部上皮组织中的部分纤毛细胞在卵泡期和黄体期呈阳性,黄体期纤毛细胞较卵泡期表达强。同时期各部位表达强度的差异不明显。黄体期和卵泡期的分泌细胞均呈阳性,同时期不同部位差异不大,但同部位的分泌细胞黄体期比卵泡期表达强。壶腹部和峡部上皮组织阳性细胞的平均光密度值与阳性面积率差异不显著(P>0.05)。输卵管伞部在黄体期和卵泡期与同时期壶腹部和峡部比较,平均光密度和阳性面积率差异显著(P<0.05)。同一部位不同时期平均光密度值和阳性面积率差异显著(P<0.05)。表明Bad基因参与了输卵管上皮组织周期性变化的调控。

凋亡相关基因bcl-2、bax、bad与乳腺癌

目的探讨乳腺癌发生、发展过程中bcl-2、bax及bad基因表达水平变化及与乳腺癌其他生物因素的相关性。方法复习国内、外相关文献并进行综述。结果在从正常乳腺组织到乳腺癌逐渐演化的过程中凋亡抑制基因bcl-2的表达水平变化尚有待进一步研究,而凋亡促进基因bax、bad的表达水平呈递减趋势。bcl-2基因表达水平与乳腺癌中一些公认的正性因子如雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)呈正相关,与其他一些负性因子如p53、表皮生长因子受体、c-erbB-2、腋窝淋巴结转移情况等呈负相关。bax基因的表达水平与乳腺癌ER、PR水平以及p53表达水平等无关。对于bad基因与乳腺癌其他生物因素的相关性尚未见报道。结论乳腺癌中bcl-2基因表达水平的变化对乳腺癌预后以及治疗的作用尚存在争议,bad基因与乳腺癌预后的关系亦不清楚,而bax基因表达水平与乳腺癌的预后呈正相关。对于它们的研究将为我们评价乳腺癌的预后提供新的指标,为乳腺癌的治疗开辟新的思路。

促凋亡基因Bad在肿瘤细胞凋亡中的作用及进展

肿瘤的发生及其生物学特性与肿瘤细胞的过度增殖有关,而且与肿瘤细胞的凋亡减少有关,针对细胞凋亡现象的研究有助于人们揭示肿瘤的生物学特性,进而探求肿瘤诊治的方法。而且对于肿瘤的化疗、放疗和生物治疗都是主要通过诱导凋亡来治疗肿瘤。Bad基因,一种促凋亡基因,

与基底细胞癌细胞凋亡相关的分子生物学研究——促凋亡分子Bad的克隆及其pEGFP-C3真核表达载体的构建

目的:克隆Bcl-2相关凋亡基因Bad并构建其真核表达载体,探讨其对肿瘤细胞凋亡的诱导作用。方法:采用RT-PCR的方法,扩增Bad基因全长片段。通过基因定向克隆,构建Bad基因的真核表达质粒载体。结果:经酶切鉴定、PCR及DNA序列测定鉴定,Bad基因表达质粒pEGFP-C3载体成功构建。结论:成功克隆Bcl-2相关促凋亡基因Bad并构建其真核表达载体pEGFP-C3-Bad,为进一步研究Bad在人肿瘤细胞系中的促凋亡作用奠定了实验基础。

促凋亡分子Bad真核表达载体构建及其在人基底细胞癌细胞中的表达

目的:克隆Bcl-2相关促凋亡基因Bad的全长编码序列,构建Bad基因的真核表达载体并在人基底细胞癌细胞系(A431)中表达,为研究该基因在人基底细胞癌治疗中的作用奠定基础。方法:根据已发表的Bad基因的核苷酸序列设计并合成引物,用Hela细胞抽提的RNA进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),扩增产物用XhoI和EcoRI双酶切后定向克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1-myc中,用限制性内切酶酶切重组质粒pcDNA3.1-myc-Bad并对其DNA测定序列。用脂质体法将pcDNA3.1-myc-Bad导入人基底细胞癌细胞系A431中,G418选择培养,Western blot及SABC-FITC分析鉴定其表达。瞬时转染A431细胞,通过细胞计数和集落形成实验观察其对A431细胞生长的影响。结果:RT-PCR扩增出长500bp的特异性片段,经克隆至pcDNA3.1-myc后酶切鉴定证实,并测序表明序列与GenBank报道完全一致。pcDNA3.1-myc-Bad在A431细胞中有表达并可影响细胞生长,与对照组有明显差异。结论:成功克隆了Bad的编码序列,构建了其真核细胞表达载体pcDNA3.1-myc-Bad,并在瞬时转染肿瘤细胞后观察到细胞生长受抑制。

外伤性眼球萎缩眼视神经组织中bcl-2相关死亡基因bad的表达及其意义

目的 探讨外伤性眼球萎缩眼视神经组织中 bcl- 2相关死亡基因 bad表达情况及其意义。 方法 用免疫组织化学的方法观察 8只正常对照尸体眼、31只外伤性眼球萎缩眼视神经组织中 bad的表达情况。 结果 眼球萎缩眼视神经退行性变表现为视神经髓鞘进行性脱失 ,神经胶质细胞增生补充。bad表达于正常视神经髓鞘组织及眼球萎缩眼视神经残存髓鞘组织 ,束间隔及神经胶质细胞中无 bad表达。眼球萎缩眼残存的视神经组织较正常视神经组织 bad表达量有增高趋势 (P<0 .0 5 ) ;但与眼球萎缩病程长短及导致眼球萎缩的病因之间无直接线性关系 (P>0 .0 5 )。 结论

促凋亡基因(Bad)在卵泡期绵羊生殖器官中的表达

以卵泡期小尾寒羊和萨福克羊为研究对象,采用免疫组织化学技术,对促凋亡基因(Bad)在生殖器官卵巢、输卵管和子宫中的表达与定位进行初步研究。结果表明,在卵巢组织中Bad基因在原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡中呈中度着染,在三级卵泡中呈轻度着染,阳性细胞在卵泡上皮细胞和颗粒细胞中分散分布,呈轻度着染;输卵管上皮分泌细胞和部分纤毛细胞胞质中见Bad基因中等强度表达,输卵管壶腹部上皮中,Bad基因多表达于分泌细胞,纤毛细胞中有部分呈阳性且强度弱,宫管结合部、峡部和壶腹部Bad基因阳性细胞染色强度弱,均呈中度着染;子宫内膜子叶和基质中的阳性细胞数量极少,阳性细胞呈轻度着色。利用计算机图像分析技术测量小尾寒羊和萨福克羊生殖器官各组织细胞中Bad基因表达的阳性细胞率和平均光密度,结果Bad基因在这2品种绵羊组织中的表达规律大体相似,但也存在一些明显的差异:萨福克羊三级卵泡颗粒细胞Bad基因阳性细胞率显著高于小尾寒羊(P<0.01);萨福克羊三级卵泡和成熟卵泡膜细胞Bad基因阳性细胞率和平均光密度均显著高于小尾寒羊(P<0.01);萨福克羊子宫内膜腺体卵泡期Bad基因阳性细胞平均光密度显著高于小尾寒羊(P<0.01);由此表明,小尾寒羊和萨福克羊卵泡期生殖器官中细胞凋亡的差异与Bad基因表达的差异,可能是造成两者繁殖力高低差异的基础。

凋亡基因Bcl-2和Bad在急性肺损伤小鼠肺组织中的表达

目的 观察凋亡基因Bcl-2（B-cell leukemia-2,B细胞淋巴瘤/白血病-2）和凋亡基因Bad（bcl-xl/bcl-2-associated death promoter,Bcl-xL/Bcl-2相关死亡启动子）在急性肺损伤（ALI）小鼠肺组织中的表达.方法 在苏州大学附属第一医院中心实验室里,24只BALB/C小鼠随机分为正常生理盐水对照组（n=6）和ALI模型组（n=18）.从尾静脉注射油酸0.9 mL/kg制备ALI模型,以肺部特征性病理改变作为ALI模型成功的主要指标;ALI模型组又按注射油酸后4 h,6 h,8 h三个时间点分为3组,每组6只,分别观察肺组织病理改变,RT-PCR法定量检测肺组织中Bcl-2和Bad的表达.采用SPSS 13.0统计软件行单因素方差分析,P〈0.05为差异有统计学意义.结果 ALI 4 h,6 h,8 h组肺组织中Bcl-2相对值分别为（58.00±5.31）,（42.00±4.30）,（32.51±10.40）,较正常对照组（24.30±1.00）升高（P〈0.05）;Au 4 h,6 h,8 h组肺组织中Bad的相对值分别为（29.32±1.19）,（58.64±4.45）,（95.12±4.34）,较正常对照组（4.01±0.34）升高（P〈0.05）;Au 4 h,6 h,8 h组的肺损伤评分分别为（1.82±0.14）分,（2.52±0.25）分,（3.45±0.29）分）较正常对照组（0.27±0.03）分升高（F值为260.512,P〈0.05）;各组间比较差异亦有统计学意义（P〈0.05）.结论 油酸致小鼠急性肺损伤的加重与肺组织中凋亡基因Bcl-2的表达下调和凋亡基因Bcl-2的表达上调可能有关.

砷及其主要代谢产物对A549细胞凋亡及促凋亡基因Bad和Bik表达的影响

目的探讨砷及其主要代谢产物对人肺腺癌细胞系A549细胞凋亡及促凋亡基因Bad和Bik表达的影响。方法于2020年10月,复苏培养A549细胞,利用细胞计数试剂CCK-8检测细胞活力,确定亚砷酸钠(NaAsO_(2))染毒A549细胞的浓度和时间。研究分为NaAsO_(2)染毒组和代谢产物染毒组:NaAsO_(2)染毒组染毒剂量为0(对照组)、20、40、60μmol/L;代谢产物染毒组包括60μmol/L一甲基胂酸(MMA)染毒组、60μmol/L二甲基胂酸(DMA)染毒组。采用Hoechst33342/碘化丙啶双染法(Ho/PI)观察细胞凋亡情况,采用实时荧光定量聚合酶链式反应法(qRT-PCR)检测染毒后细胞Bad和Bik mRNA表达水平,采用蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测Bad蛋白、磷酸化Bad(P-Bad-S112)蛋白、Bik蛋白、裂解Bik蛋白及下游蛋白多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP1)和细胞色素C(Cyt-C)的相对表达情况,采用分光光度法检测半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)3、6、8、9的活性变化。结果与对照组比较,20、40、60μmol/L NaAsO_(2)染毒组凋亡细胞占比明显增加,差异均有统计学意义(P<0.01)。与对照组比较,2.0、4.0、6.0μmol/LNaASO_(2)染毒组Bad mRNA表达水平、Bik mRNA表达水平升高,Bad蛋白、磷酸化Bad蛋白、Bik蛋白、裂解Bik蛋白、PARP1蛋白、Cyt-C蛋白相对表达量均升高,差异均有统计学意义(P<0.05),Caspase 3、6、8、9活性明显上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,DMA染毒组Bad mRNA表达水平为1.439±0.173,差异有统计学意义(P=0.024),Bik mRNA表达水平差异无统计学意义(P=0.788);MMA染毒组Bad和Bik mRNA表达水平差异无统计学意义(P=0.085、0.063)。与对照组比较,MMA染毒组Bad、Bik、PARP1、Cyt-C蛋白相对表达量(0.696±0.023、0.707±0.014、0.907±0.031、1.032±0.016)差异无统计学意义(P=0.469、0.669、0.859、0.771);DMA染毒组Bad、Bik、PARP1、Cyt-C蛋白相对表达量(0.698±0.030、0.705±0.022、0.908±0.015、1.029±0.010)差异均无统计学意义(P=0.479、0.636、0.803、0.984)。结论NaAsO_(2)可通过引起Bad和Bik蛋白过表达,启动磷酸化Bad的负反馈调节以及Bik的降解,激活下游蛋白PARP1、Cyt-C和Caspase途径,介导A549细胞凋亡。