川芎嗪对宫颈癌Hela细胞磷酸化Bad蛋白和Survivin蛋白表达的影响

目的研究川芎嗪(TMP)对Hela细胞磷酸化Bad(p-Bad)蛋白和Survivin蛋白表达的影响。方法四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测TMP对Hela细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western印迹法检测p-Bad和Survivin蛋白的表达。结果与对照组相比TMP可抑制Hela细胞的增殖(P<0.01);增加Hela细胞的凋亡率(P<0.05,P<0.01);降低p-Bad蛋白和Survivin蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。结论TMP可抑制Hela细胞增殖,诱导Hela细胞凋亡,降低p-Bad蛋白和Survivin蛋白的表达,这可能是TMP诱导Hela细胞凋亡的机制之一。

全脑缺血再灌注后Bad蛋白的表达与细胞凋亡的关系及ERK信号转导途径对其的影响

目的观察全脑缺血再灌注时Bad蛋白的表达和细胞凋亡及ERK信号转导通路对其的影响。方法 90只健康雄性SD大鼠随机分为三组(n=30):假手术组(sham组)、全脑缺血再灌注组(IR组)、抑制剂PD98059干预组+全脑缺血再灌注组(PD组)。采用四血管法建立大鼠全脑缺血再灌注模型,在2,6,12,24,48,72 h各个时间点分别用免疫组化法检测磷酸化ERK和磷酸化Bad蛋白在大鼠海马区的表达,TUNEL染色观察不同时点海马神经元存活和凋亡的变化。结果 TUNEL阳性细胞于IR组再灌注6 h后开始出现,24-48 h达高峰。PD组TUNEL阳性细胞表达各时点均强于IR组,随再灌注时间延长而表达增强,24 h达高峰。sham组各时点未见TUNEL阳性细胞。磷酸化ERK于IR组再灌注2 h后在CA3区可见表达,再灌注6 h后逐渐下降,至再灌注后48 h未见表达。IR组磷酸化ERK表达强于sham组,sham组随再灌注时间延长而表达减弱;PD组各时点磷酸化ERK未见表达。磷酸化Bad蛋白于IR组再灌注后2 h在CA3区可见表达,之后逐渐减弱,再灌注后24 h后未见;PD组各时点磷酸化Bad表达弱于IR组,变化趋势与IR组相同。sham组各时点磷酸化Bad表达明显,无时点变化;二者在CA1区的表达均弱于CA3区。二者的表达下降变化与凋亡发生的高峰时间一致。结论磷酸化ERK和磷酸化Bad在脑缺血再灌注时表达下降且变化一致,提示ERK信号通路可通过抑制Bad的磷酸化抗凋亡形式向去磷酸化促凋亡形式的转变,发挥抗调亡机制,参与脑缺血再灌注时神经细胞的保护。

Bad蛋白对细胞凋亡的调控作用

Bad是Bcl-2家族中与Bcl-2和Bcl-xL相关的促凋亡基因。Bcl-2家族促凋亡蛋白和抗凋亡蛋白通过竞争性相互作用来调控细胞凋亡。Bad在多种细胞中表达,近年研究表明Bad可通过细胞信号转导通路和与caspase家族成员的作用来参与细胞凋亡的全过程。其在脑缺血损伤和肿瘤方面的研究受到重视。

急性一氧化碳中毒大鼠BAD蛋白表达变化的研究

目的:研究急性一氧化碳中毒大鼠迟发性脑病模型中Bad蛋白在大鼠额叶皮质和海马区的表达变化情况。方法:选择取腹腔注射纯CO制备急性一氧化碳中毒与一氧化碳中毒迟发性脑病的大鼠模型。造模后分别于1、3、7、14、21d观察大鼠大脑皮质及海马区细胞的Bad蛋白的表达情况。结果:Bad蛋白表达在第1天表达明显,以后逐渐降低至染毒后21d,但仍高于对照组(p<0.01)。结论:Bad蛋白作为一种促凋亡因子表达活跃,可能是急性一氧化碳中毒迟发性脑病发生的病理机制之一。

前列腺癌中Bad蛋白的表达及其意义

目的探讨Bad蛋白在前列腺癌中的表达及其临床意义。方法选择前列腺癌和癌旁良性前列腺增生(benign prostate hyperplasia,BPH)各48例及21例前列腺上皮内瘤(prostate intraepithelial neoplasms,PIN),采用免疫组化SP法观察Bad蛋白在前列腺上皮及间质细胞中的表达,采用化学发光法检测血清PSA值,分析Bad蛋白与前列腺癌、PSA值的相关性。结果Bad蛋白在前列腺癌和PIN中的阳性率分别为83.3%、66.7%,高于癌旁BPH的33.3%,差异有统计学意义(P均<0.01);Bad蛋白在前列腺癌和BPH间质细胞中的阳性率分别为52.1%和25.0%,差异有统计学意义(P<0.05);Bad蛋白在Gleason评分≤7和>7的前列腺癌中阳性率分别为66.7%和92.6%,差异有统计学意义(P<0.05);血清PSA值与Bad蛋白表达无相关性(P均>0.05)。结论前列腺癌组织中Bad蛋白高表达,并与Gleason评分有关,提示Bad蛋白在前列腺癌的发生、发展中发挥重要作用。

乳腺浸润性导管癌组织学分级与BAD、p-BAD及p-ERK蛋白的表达

目的:探讨乳腺浸润性导管癌不同组织学分级间BAD及其磷酸化形式p-BAD和上游作用因子ERK的活性形式p-ERK蛋白表达的变化。方法:应用免疫组化SP法检测83例乳腺浸润性导管癌中BAD、p-BAD及p-ERK蛋白表达及应用TUNEL法原位观察不同组织学分级间凋亡指数的差异。结果:组织学分级越高,凋亡指数及BAD、p-BAD及p-ERK蛋白表达均越高,且在高分化与低分化组间差异均具有统计学意义。BAD与凋亡指数存在正相关性(r=1.000,P=0.018),BAD与p-BAD存在正相关性(r=0.999,P=0.031),p-BAD与p-ERK存在正相关性(r=0.997,P=0.040)。结论:BAD、p-BAD及p-ERK在乳腺浸润性导管癌蛋白表达水平呈现出肿瘤分化级别越低而表达越强的特征,这与肿瘤恶性进程中细胞发生凋亡与增殖的变化有关。

可溶性CD44分子对人眼小梁网细胞凋亡调节蛋白bcl-2相关死亡因子bad表达的影响

背景研究表明可溶性CD44分子（sCD44）在原发性开角型青光眼（POAG）患者眼中的质量浓度高于正常人，POAG患者房水中sCD44水平与小梁网细胞凋亡相关蛋白的表达是否有关及其对POAG的共同作用机制至今尚不明确。目的探讨不同质量浓度的sCD44对POAG患者小梁网细胞凋亡调节蛋白bcl-2相关死亡因子bad表达的影响。方法收集POAG患者行小梁切除术中切除的小梁网组织，采用组织块培养法原代培养小梁网细胞，并用免疫细胞化学法对培养细胞进行鉴定，将第3代的小梁网细胞按随机数字表法随机分为6个组，分别在无血清培养基中加入含终质量浓度为0（对照组）、1、5、10、25、50μg／L的sCD44，培养细胞48h。采用细胞计数试剂8（CCK-8）法和ELISA法检测小梁网细胞中凋亡调节蛋白bcl-2相关死亡因子bad蛋白的表达。结果培养的细胞经层黏连蛋白（LM）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）单克隆抗体、纤维连接蛋白（FN）免疫组织化学染色呈阳性反应。CCK-8法检测0、1、5、10、25、50μg／LsCD44作用48h后小梁网细胞吸光度（A450）值分别为：0．2460±0．0019、0．1874±0．0015、0．1570±0．0016、0．1302±0．0019、0．1084±0．0018、0．0940±O．0020，差异有统计学意义（F=14．922，P=0．000），各实验组A450值均低于对照组，差异均有统计学意义（P=0．013、0．008、0．011、0．005、0．004）。ELISA法检测表明，0、1、5、10、25、50p^g／LsCD44作用48h后小梁网细胞中bad蛋白质量浓度分别为（114．8461±2．9560）、（137．8270±2．4259）、（161．4194±3．7381）、（170．9453±3．2006）、（221．2252±4．3738）、（324．6167±4．4220）ng／L，差异有统计学意义（F=16．610，P=0．000），各实验组小梁网细胞中bad蛋白质量浓度均明显高于对照组，差异均有统计学意义（P=0．017、0．013、0．008、0．007、0．006）。结论sCD44在一定质量浓度范围内可促进POAG小梁网细胞的凋亡，并且能上调凋亡调节蛋白bel-2相关死亡因子bad蛋白的表达。

急性一氧化碳中毒大鼠脑海马细胞凋亡及BAD蛋白的表达变化

目的研究急性一氧化碳中毒大鼠模型中海马细胞凋亡及BAD 蛋白在海马区的表达变化情况,为进一步预防和治疗一氧化碳中毒迟发性脑病提供理论依据.方法：选择取腹腔注射纯CO 制备急性一氧化碳中毒的大鼠模型.造模后分别于1、3、7、14、21d 处死,每个时间点8 只,对照组暴露于空气.断头取脑组织,采取TUNEL、免疫组化染色结合阳性细胞记数的方法观察大鼠海马区脑细胞凋亡情况及BAD 蛋白的表达的变化.并对所得数据进行统计学分析.结果：急性一氧化碳中毒7 d 大鼠脑海马凋亡细胞明显增加,第21 天达最高.Bad 蛋白表达显示海马区在第1 天表达明显,以后逐渐降低至染毒后21d,但仍高于对照组,与对照组相比差异有统计学意义（p〈0.01）,对照组BAD 蛋白表达无明显变化.结论：Bad 蛋白作为一种促凋亡因子表达活跃,可能是急性一氧化碳中毒迟发性脑病发生的病理机制之一.

尖锐湿疣组织中Bad和增殖细胞核抗原蛋白表达的检测

目的:探讨尖锐湿疣(CA)组织中促凋亡蛋白Bad和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及其可能意义。方法:采用免疫组化SP法分别检测53例CA和28例正常包皮上皮组织中Bad和PCNA蛋白的表达情况。结果:53例CA组织中Bad和PCNA蛋白的阳性表达率分别为69.8%(37/53)和86.8%(46/53),而在正常包皮上皮组织中的阳性表达率均为28.6%(8/28)和39.3%(11/28),CA组织中Bad和PCNA阳性表达强度均在??~???,而包皮上皮组织中Bad和PCNA阳性表达强度均在+~??;CA和正常包皮上皮组织中Bad、PCNA蛋白的表达强度差异有统计学意义(Z_(Bad)=3.805,Z_(PCNA)=5.426,P<0.001)。CA组织中Bad和PCNA蛋白的表达呈正相关(rP=0.134,P=0.325)。结论:Bad和PCNA蛋白的过表达可能对CA的发生和发展有一定的促进作用。

骨形态发生蛋白7通过PI3K/Akt通路可抑制人髓核细胞的凋亡

背景:骨形态发生蛋白7可促进人髓核细胞的细胞外基质合成,减缓椎间盘退变。近年来,有学者提出其可能通过对抗髓核细胞凋亡从而发挥上述作用,但其进一步的分子机制一直未被详细阐明。目的:观察骨形态发生蛋白7对无血清诱导下发生凋亡的人髓核细胞产生的作用及其对PI3K/Akt通路的影响,分析并探讨骨形态发生蛋白7抑制人髓核细胞凋亡的分子机制。方法:通过改良Pfirrmann分级及相关条件选取12例患者获取椎间盘组织,采用酶消化法获取人髓核细胞后分组实验,以含体积分数15%胎牛血清的培养基正常培养的髓核细胞设为空白组;使用无血清培养基培养48 h诱导凋亡作为阳性对照组;在无血清条件下,通过加入不同剂量的骨形态发生蛋白7以及同时添加PI3K/Akt通路拮抗剂LY294002形成处理组和拮抗组。使用流式细胞术检测各组细胞凋亡率;免疫荧光观察p-Akt表达;蛋白印迹法检测Akt,p-Akt,BAD和Caspase 9等通路蛋白的表达变化。结果与结论:无血清凋亡诱导下,流式细胞术结果显示,随着骨形态发生蛋白7处理浓度上升,髓核细胞凋亡率明显下降,加入LY294002共同作用后细胞凋亡率再次升高(P<0.05)。p-Akt免疫荧光和蛋白印迹法检测结果进一步表明,与凋亡阳性对照组相比,加入骨形态发生蛋白7的实验组中,p-Akt表达明显增加,其下游凋亡相关蛋白BAD、Caspase 9蛋白表达减少(P<0.05),而在同时加入Akt通路拮抗剂LY294002后,p-Akt蛋白表达下降而凋亡相关蛋白的表达又恢复到相对较高的水平(P<0.05)。结果证明,骨形态发生蛋白7在无血清诱导的人类髓核细胞凋亡中通过激活PI3K/Akt通路,拮抗了BAD-Caspase 9相关的细胞凋亡过程,抑制了髓核细胞的退变。

Bad在正常人角膜上皮细胞中表达的免疫组化研究

目的 探讨正常人角膜上皮中Bad蛋白的表达状况。方法 用免疫组化的方法(SP)观察8例Bad在正常成人角膜组织中的表达状态。结果 正常人角膜上皮表层细胞、角膜上皮基底细胞,包括角膜缘基底细胞中均有Bad表达,中央及周边部角膜上皮表层细胞Bad表达量无明显区别,角膜上皮表层和基底细胞间的绝大多数有丝分裂后仅部分细胞有Bad表达。结论Bad参与了正常角膜上皮细胞的自我更新过程,可能具有促进角膜上皮细胞凋亡的作用。如能抑制Bad基因的表达可能会在一定程度上延缓角膜上皮的脱落,加速角膜上皮损伤后的修复及维持正常角膜上皮的完整与稳定。

大气细颗粒物对CHO细胞的损伤作用及天然物质的拮抗机制

PM2.5引起的健康危害日益受到广泛关注,但其确切的损伤机理仍不完全清楚,目前也缺乏有效拮抗PM2.5损伤的天然活性物质。因此本文对北京市PM2.5造成CHO细胞的损伤作用及天然物质的拮抗作用进行研究,结果可为PM2.5污染治理和疾病的预防提供科学依据。通过CCK-8法测定细胞存活率;通过流式细胞仪测定细胞凋亡;用荧光探针DCFH-DA法测定ROS;提取细胞内总蛋白并测定其中SOD含量;以及通过Western Blot法分别测定了p-akt/akt、p65及Bad的相对表达量。结果显示：（1）10~40μg·m L-1的PM2.5可明显降低CHO细胞存活率,并呈现极显著的剂量-效应关系（r=-0.964,P〈0.01）;15μg·m L-1PM2.5可以显著增加细胞凋亡、引起细胞内ROS增加、SOD含量下降;p-akt/akt、p65表达量增加说明Akt通路与NF-κB通路均被激活。（2）20μmol·L-1阿魏酸、50μmol·L-1绿原酸和10μmol·L-1荭草素预处理可拮抗PM2.5引起的细胞存活率下降以及细胞凋亡率增加,同时降低细胞内ROS并增加SOD含量,下调p-akt/akt、p65及Bad的相对表达量。其中20μmol·L-1阿魏酸的保护作用最佳。结果说明,PM2.5引起的CHO细胞损伤与细胞凋亡与Akt和NF-κB通路的激活有关;三种天然活性物质具有拮抗PM2.5造成的细胞损伤的能力,其保护机理是通过其降低PM2.5引起的细胞内氧化应激反应,进而降低被PM2.5激活的Akt通路与NF-κB通路和下调Bad蛋白表达量来实现的。

基于PI3K/Akt/Bad信号通路探讨益髓解毒方对血管性痴呆大鼠海马神经元凋亡的影响

目的:探讨益髓解毒方对血管性痴呆(VD)大鼠海马神经元损伤及调控细胞凋亡信号通路磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)关联死亡启动子重组蛋白(Bad)的作用机制。方法:40只SD大鼠分为假手术组、模型组、盐酸多奈哌齐组、益髓解毒方组,每组10只。双侧颈总动脉永久结扎(2-VO)法制备VD动物模型,假手术组和模型组灌胃生理盐水;盐酸多奈哌齐组灌胃盐酸多奈哌齐原药0.52 mg·kg-1;益髓解毒方组灌胃益髓解毒方颗粒(11.11 g·kg-1);1次/d。30 d后,以Morris水迷宫测试大鼠学习、记忆能力;苏木素-伊红(HE)染色观察海马CA1区组织形态结构;透射电镜(TEM)观察大鼠海马CA1区神经元超微结构;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测Akt,Bad mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马组织Akt,磷酸化(p)-Akt,Bad蛋白表达情况。结果:与假手术组比较,模型组大鼠学习、记忆能力下降明显(P<0.05),海马组织病理结构及神经元超微结构病变明显,海马组织Akt mRNA和Akt,p-Akt蛋白表达水平明显下降(P<0.05),Bad mRNA和Bad蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,益髓解毒方组可明显提高大鼠的学习记忆能力,改善海马CA1区神经元细胞及超微结构变化,上调海马组织Akt mRNA和Akt,p-Akt蛋白表达水平,降低Bad mRNA和Bad蛋白表达水平(P<0.05)。结论:益髓解毒方可明显提高VD大鼠学习、记忆能力,改善海马组织及神经元超微结构病理变化,修复神经元受损细胞,这可能与促进Akt磷酸化,激活PI3K/Akt/Bad信号通路,发挥抗细胞凋亡保护神经元有关。