Bak基因过表达诱导肝癌细胞凋亡

目的：本文旨在研究bcl-2基因家族促凋亡蛋白Bak在肝癌细胞凋亡中的作用，同时评价它作为肿瘤治疗的潜在靶基因的可能性。方法：免疫组织化学法研究Bak在HCC组织中的分布，并结合TUNEL染色，分析Bak在肝癌细胞凋亡中潜在的作用。采用MTⅡ调节系统，通过加锌离子(ZnSO4，100μmol/L）诱导Bak基因表达。HCC-9204肝癌细胞系作为靶细胞，获得表达Bak基因的稳定转染子。结果：在HCC组织中，Bak抗原的表达主要位于肝（癌）细胞的胞浆，呈细颗粒状均匀分布，在癌细胞中偶有核内表达。TUNELLI的分析结果显示，低TUNELLI组Bak表达的细胞阳性率显著低于高TUNELLI组的细胞阳性率(P<0.01)。可诱导性Bak基因过表达的HCC9204细胞显示广泛的细胞死亡。TUNEL染色证实细胞核的碎片化，Annexin-V实验证实细胞膜不对称丧失，从而提示这种细胞死亡是凋亡。流式细胞仪显示在诱导后24h，有19.29％的细胞发生凋亡。结论：肝癌细胞的凋亡与bcl2家族促凋亡成员Bak抗原的表达有关；Bak基因显著诱导HCC－9204细胞凋亡。因此Bak基因可能成为肿瘤基因治疗的靶基因。

BAK基因过表达对胃癌细胞的诱导凋亡作用及其分子机制

目的:探讨转染外源性BAK基因及其过表达对胃癌细胞的诱导凋亡作用和分子机制. 方法:构建携带有BAK基因的真核表达载体并转染胃癌MKN-45细胞1-5 d后,RT-PCR和Western Blotting法检测BAK基因表达;细胞计数、MTT比色法检测癌细胞生长活性,流式细胞仪分析细胞周期时相改变,透射电镜、末端TdT酶标记技术检测癌细胞凋亡;比色法检测癌细胞内Caspase-3活性改变. 结果:转染1-5 d后,癌细胞BAK mRNA和蛋白表达水平显著增强(P<0.0 1),癌细胞体外生长抑制11.6-35.3% (P<0.01),增生活性抑制10.2-32.4%(P<0.01),细胞周期出现G0/G1期阻滞,部分癌细胞出现胞体缩小、核固缩等凋亡形态学改变,凋亡率为21.4%(P<0.01);癌细胞Caspase-3活性增强4.45倍(P<0.01). 结论:转染外源性BAK基因使其过表达能激活Caspase- 3,显著诱导胃癌MKN-45细胞凋亡,有望成为胃癌治疗的新途径.

转bak基因协同阿霉素杀伤膀胱癌耐药细胞

目的 :研究转 bak基因与阿霉素 (ADM)联合杀伤膀胱癌耐药细胞的效果 ,并探讨其机制。方法 :利用脂质体将基因 bak导入膀胱癌耐药细胞 ,通过原位杂交法检测 bak m RNA的表达 ,同时加入 ADM,利用 MTT法算出细胞生存率 ,进而推算半数抑制浓度 (IC50 )和抗药指数。用荧光分光光度计检测细胞内 ADM的聚集量。结果 :转基因后 ,细胞内 bak m RNA阳性表达、细胞生存率较单用 ADM明显降低 (P<0 .0 5 ) ,细胞内 ADM聚集量无明显增加 (P >0 .0 5 )。结论 :转 bak基因可以协同 ADM更有效地杀伤膀胱癌耐药细胞 ,但并非通过帮助 ADM进入细胞起作用。

Bak基因对Hela细胞的细胞周期和细胞凋亡的调控作用(英文)

目的研究Bcl 2基因家族促凋亡蛋白Bak在细胞凋亡细胞周期调控中的作用 ,评价它们作为肿瘤治疗的潜在靶基因的可能性。方法采用一种可诱导性表达系统,(MT II调节系统),在外加锌离子(ZnSO4,100μmol/L)的条件下诱导Bak基因表达。以Hela细胞系作为靶细胞 ,获得表达Bak基因的稳定转染子。结果可诱导性Bak基因过表达的Hela细胞出现广泛死亡。TUNEL染色证实细胞核碎片化 ,提示细胞死亡是凋亡。流式细胞仪显示 ,在诱导后24h有19.29 %的细胞发生凋亡且细胞在G1 期明显积聚。结论Bak基因能显著诱导Hela细胞凋亡和细胞周期在G1 期延长。因此 。

Bak基因的克隆、测序及表达

Ｂｃｌ－２蛋白家族在细胞编程死亡的调控中起重要的作用。本文报导了Ｂｃｌ－２家族新成员Ｂａｋ的克隆、测序及其在大肠杆菌中的表达过程，为研究细胞编程死亡以及Ｂａｋ在其中的作用机制提供了重要的依据。

大鼠急性脊髓损伤后Bak基因的表达及其意义

目的探讨Bak基因在大鼠急性脊髓损伤(ASCI)中的表达及其意义。方法选取64只SD大鼠随机分为模型及对照两组,每组32只,模型组以改良Allen's法制作SD大鼠急性脊髓损伤动物模型,对照组只行椎板切开不损伤脊髓。分别于伤后3h、1、3、7d时(每个时间点8只)应用改良Tarlov评分法评价其神经功能;然后处死动物,取受损节段脊髓行HE染色及免疫组化染色,观察形态学改变和Bak基因表达的特点;并应用TUNEL方法检测神经细胞凋亡情况。其量的评定借助于麦克奥迪数码医学图像分析系统A(Motic.med6.0)软件,结果分别用累积光密度及细胞凋亡指数来表示。结果对照组大鼠下肢功能均无明显瘫痪,模型组大鼠下肢均出现不同程度功能障碍,对照组各时间点的Tarlov评分均高于实验组(P<0.05)。对照组各时间点脊髓组织未见明显出血、水肿和细胞凋亡坏死,模型组各时间点脊髓组织均有不同程度出血、水肿、细胞凋亡及坏死。对照组未见明显Bak基因表达,模型组各时间点Bak基因表达均明显高于对照组(P<0.05),模型组内Bak基因表达3h点出现,1d增加,3d达高峰,7d明显减少。模型组内细胞凋亡3h点少量出现,1d增加,3d达高峰,7d明显减少。结论脊髓损伤激活Bak基因表达,从而诱导神经细胞凋亡,可能为其病情进展的重要机制之一。

Bak基因研究进展

Bak基因是从EBV传染的人类B细胞文库中克隆获得的一种基因 ,它可以调节细胞凋亡 ,是Bcl-2家族的一员 ,编码区含有Bcl-2高度同源的BH1、BH2及BH3结构域 ,该区是Bak与Bcl-2、Bcl-xl结合形成二聚体调节细胞凋亡的主要结构基础。

PTD4-凋亡素融合蛋白对Hela细胞bak基因表达的影响

目的研究PTD4-凋亡素(apoptin)融合蛋白对Hela细胞bak基因表达的影响。方法原核表达系统表达PTD4-apoptin融合蛋白,使用CCK8试剂盒检测融合蛋白对Hela细胞的抑制作用;PTD4-apoptin融合蛋白作用Hela细胞24 h后,提取细胞总RNA和总蛋白,采用RT-PCR和Western印迹检测bak基因在RNA水平和蛋白水平的表达。结果 PTD4-apoptin融合蛋白诱导Hela细胞bak mRNA和蛋白水平表达量较对照组均显著提高。结论 PTD4-apoptin蛋白可诱导Hela细胞凋亡,与bak基因参与凋亡调控相关。

bak基因过表达对阿霉素杀伤诱导EJ细胞凋亡的增敏作用

目的目的:探讨bak基因过度表达在膀胱癌EJ细胞凋亡途径中的作用以及对阿霉素的可能的增敏作用,并研究其作用机制。方法用脂质体法,膀胱癌细胞中转入bak/pcDNA3的设为实验组,空转pcDNA3的设为对照组,用原位杂交法检测bak在癌细胞中的表达,同时用阿霉素处理后,利用MTT法测出细胞生存率,进而用荧光分光光度计检测细胞内阿霉素的聚集量。比色法检测癌细胞内Caspase-3活性改变。结果脂质体法转基因后,bak的mRNA呈阳性表达,细胞生存率较对照组明显降低(P<0.05),癌细胞Caspase-3活性增强(P<0.05),细胞内阿霉素聚集量无明显增加(P>0.05)。结论bak基因对阿霉素杀伤膀胱癌细胞具有增敏作用,但并非通过帮助阿霉素进入细胞发挥作用,其作用机制与激活Caspase-3有关。

BAK基因过表达对膀胱癌细胞的诱导凋亡作用及其分子机制

目的 探讨BAK基因过表达对膀胱癌细胞的诱导凋亡效应及机制。方法 脂质体介导BAK基因转染膀胱癌EJ细胞 1～ 7d后 ,逆转录聚合酶链反应检测BAK基因表达 ,细胞计数法检测癌细胞生长活性 ,DNALadder法、吖啶橙 溴化乙锭荧光染色法及原位末端转移酶标记技术检测癌细胞凋亡 ;免疫组织化学法检测癌细胞Caspase 3、Bcl 2、p5 3表达。 结果 转染 1～ 7d后 ,癌细胞BAK基因表达显著增强 ( P <0 .0 1) ,体外生长抑制 2 0 .6 6 %～ 35 .5 8% ( P <0 .0 1) ;部分癌细胞呈现凋亡形态学变化 ,凋亡率为 18.0 %～ 2 0 .6 % (P <0 .0 1) ;癌细胞Caspase 3表达增强 6 .6倍(P <0 .0 1) ,Bcl 2和 p5 3表达差异无显著性 ( P >0 .0 5 )。结论 BAK基因过表达能显著诱导膀胱癌细胞凋亡 ,其中Caspase 3激活是其作用机制之一。

实验性脑缺血再灌流后Bak和Bad基因在脑内的表达

目的：观察全脑缺血再灌流后Bak和Bad基因在脑内表达的变化规律和意义。方法：采用大鼠4血管结扎全脑缺血30min再灌流模型，用免疫组织化学染色法观察Bak和Bad基因在脑内的表达。结果：全脑缺血再灌流后12h开始在皮质和海马等缺血易损部位：Bak表达降低，24h达最低点；而Bad则表达升高，24h达最高点；表达变化最明显的时间均是24～48h，此时间与脑缺血后脑细胞凋亡发生的高峰时间一致。结论：脑缺血再灌流可以诱导Bak和Bad基因在脑内表达发生变化，这种变化与脑细胞凋亡的发生关系密切。Bak在脑缺血后表达降低说明其在脑内表达可抑制细胞凋亡。

转bak基因促膀胱癌多药耐药细胞凋亡的研究

目的 观察转入bak基因对膀胱癌多药耐药 (MDR)细胞的杀伤效果 ,探讨其可能的机制。 方法 用脂质体将bak基因导入MDR细胞 ,通过原位杂交法检测bakmRNA的表达 ,SABC免疫组化法分析bak和bcl 2的表达。采用细胞计数法检测细胞生长抑制率 ,流式细胞仪检测细胞周期的变化。荧光染色观察细胞形态。 结果 bak基因可成功转入MDR细胞 ,转染第 3天bakmR NA阳性率 64 % ,bak表达阳性率 60 % ,明显高于对照组 ;转染后细胞中bcl 2表达显著减少 ,P <0 .0 5。转染第 4天EJ/bak细胞抑制率 32 % ,显著高于对照组 ,P <0 .0 5。细胞周期分析可见凋亡峰 ,凋亡率 35 %。凋亡细胞在荧光显微镜下形成凋亡小体。 结论 转入bak基因可显著促进MDR细胞的凋亡 ,其作用机制与下调bcl

膀胱移行细胞癌中促凋亡基因bak mRNA的表达及意义

目的 :研究促凋亡基因bak在膀胱移行细胞癌组织中的表达 ,探讨bak基因在膀胱移行细胞癌发生演变过程中的意义。方法 :应用原位分子杂交方法检测 5 2例膀胱移行细胞癌组织中的bakmRNA的分布与表达。结果 :5 2例膀胱移行细胞癌组织中bak基因mRNA表达的阳性率为 5 7.7% ,其阳性率随膀胱癌病理分级、临床分期的上升而降低。结论 :促凋亡基因bak在大多数膀胱移行细胞癌组织中有不同程度的表达 ,bak基因可能参与膀胱移行细胞癌的凋亡调节 ,并与膀胱移行细胞癌组织的分化有关。

喉鳞状细胞癌发生过程中Bak和Bcl-xl基因蛋白的参与 排除与性别和吸烟关系

目的:探讨促凋亡基因Bak和凋亡抑制基因Bcl-xl在喉鳞状细胞癌中的表达,及其与喉癌发生和预后的关系。方法:取哈尔滨医科大学附属二院耳鼻咽喉-头颈外科2000-07/2002-04行手术切除的45块喉原发性喉鳞癌及25块正常喉黏膜石蜡标本。检测标本组织中Bak和Bcl-xl蛋白的表达,采用免疫组织化学染色方法分析患者性别、吸烟情况、临床分期及不同肿瘤病理分级和淋巴结转移与喉癌组织中Bak和Bcl-xl蛋白表达的关系。结果:①正常喉黏膜Bak阳性表达:显著高于原发性喉鳞癌犤92%(23/25),44%(20/45),P<0.01犦。②正常喉黏膜Bcl-xl阳性表达:显著低于原发性喉鳞癌犤16%(4/25),53%(24/45),P<0.01犦。③喉癌组织中Bak和Bcl-xl蛋白的表达:与患者的性别、吸烟情况及临床分期无关(P>0.05),而与肿瘤病理分级和淋巴结转移显著相关(P<0.005,P<0.01)。结论:Bak在喉鳞癌中表达较正常喉黏膜明显减少,其表达下调与喉癌的发生密切相关。肿瘤分化越好,Bcl-xl的表达越强。Bak和Bcl-xl蛋白的表达与肿瘤病理分级和淋巴结转移显著相关,说明Bak蛋白表达对防止癌细胞转移、扩散具有积极意义,可作为对喉鳞癌预后判断的指标。

bak基因干扰在铝致SH—SY5Y细胞凋亡中的作用

目的以铝致神经母细胞瘤细胞（SH—SY5Y）为模型，研究用RNA干扰的方法阻抑bak基因的表达，找到其最优的序列、最适的转染浓度和转染时间，以减少铝引起的神经细胞凋亡。方法将三对bak基因小干扰RNA（siRNA）序列用不同浓度铝染毒细胞，分别测定不同的siRNA序列、不同的转染浓度及不同的转染时间对细胞活力的影响。用荧光染色法计数转染效率，用荧光定量PCR法检测干扰效率，用免疫组织化学染色法测定阻抑Bak蛋白表达效果。最后，用选定的bak siRNAl作用于染铝后的神经瘤细胞，并检测其对细胞的凋亡率及坏死率的影响。结果siRNAI序列为最有效的序列，最适转染浓度为10nmol／L，最适作用时间为转染后24h。siRNA的转染效率〉90％，最大干扰效率为57．76％，并表现了对Bak蛋白表达的明显的阻抑效应。bak siRNAI作用于染铝后的神经瘤细胞，可以明显降低细胞的凋亡率，但对细胞的坏死率的影响并不明显。结论凋亡是铝致SH-SY5Y细胞死亡的重要途径，针对bak基因，用化学法合成siRNA并将其导人神经细胞，可以有效降低bak基因和Bak蛋白的表达，提高细胞活力和降低细胞的凋亡率，为预防及治疗铝诱导的神经细胞凋亡及神经退行性变的发生发展提供理论依据。

新成员Bak基因及Bcl-2家族

Bcl-2蛋白家族在细胞编程死亡的调控中起重要的作用。本文综述了Bcl-2家族新成员Bak的特点及其生物学活性,并就Bak及Bcl-2家族成员对细胞死亡调控机制进行了初步探讨。

沉默Bcl2、Bak1基因表达对成骨肉瘤MG-63细胞增殖及成骨能力的影响

目的探讨沉默Bcl2、Bak1基因表达对成骨肉瘤MG-63细胞增殖及成骨能力的影响。方法收集对数生长期MG-63细胞,随机分为sh Bcl2组、sh Bak1组、共转染组和空白对照组。sh Bcl2组、sh Bak1组、空白对照组分别单独转染sh Bcl2、sh Bak1重组腺病毒和空载腺病毒,共转染组同时转染sh Bcl2及sh Bak1重组腺病毒。转染48 h,采用MTT法检测细胞增殖率,对硝基苯磷酸盐法检测碱性磷酸酶(ALP)活性,Western blotting法检测成骨相关蛋白骨形态发生蛋白4(BMP4)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)、TNF-α表达。结果 sh Bcl2组细胞增殖率、ALP活性及BMP4、OPN、Runx2相对表达量均低于空白对照组,TNF-α相对表达量高于空白对照组(P均<0.01)。sh Bak1组细胞增殖率、ALP活性及BMP4、OPN、Runx2相对表达量均高于空白对照组,TNF-α相对表达量低于空白对照组(P均<0.01)。空白对照组与共转染组细胞增殖率、ALP活性、BMP4、OPN、Runx2、TNF-α相对表达量比较均无统计学差异(P均>0.05)。结论沉默Bcl2基因表达可抑制MG-63细胞增殖及成骨能力,沉默Bak1基因则具有相反的作用;Bcl2与Bak1共同参与MG-63细胞的凋亡及成骨过程。

肾上腺嗜铬细胞瘤凋亡相关基因bak蛋白表达的意义

目的： 探讨凋亡相关基因ｂａｋ 在人肾上腺嗜铬细胞瘤中的表达及其对肿瘤发生的意义． 方法： 应用免疫组织化学的ＳＡＢＣ方法，和兔抗人Ｂａｋ 多克隆抗体，对２３例肾上腺嗜铬细胞瘤（其中良性１８例，恶性５例）和１０例正常肾上腺组织进行了检测． 结果： Ｂａｋ 在正常肾上腺髓质中不表达，而在良恶性嗜铬细胞瘤中表达，阳性率分别为８９％ 和４０％ ． 在良性肿瘤中Ｂａｋ 表达显著强于恶性肿瘤． 结论： Ｂａｋ 不同程度地参与了良恶性嗜铬细胞瘤中的凋亡调控，对良恶性嗜铬细胞瘤鉴别诊断的意义有待深入研究．

Bak在细胞凋亡期间对线粒体形态学的影响

目的:探讨Bak基因在细胞凋亡线粒体信号传导中的作用以及与Bax基因之间的相互关系。方法:应用Bax/Bak双重基因敲除的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)和Hela细胞进行基因重构,细胞按不同基因型(野生型、Bax敲除和Bak敲除、双重基因敲除)分组,并通过共转染方式导入目的基因。细胞凋亡的处理条件:细胞在无葡萄糖缓冲液的培养基中,在含10mmol.L-1叠氮钠或1μmol.L-1十字孢碱(STS)或20μmol.L-1顺铂条件下培养,并诱导细胞凋亡。应用共聚焦显微镜和免疫荧光及免疫印记技术分析细胞凋亡、线粒体碎裂和细胞色素C释放情况,综合评价Bak基因在细胞凋亡和线粒体碎裂中的作用。结果:Hela细胞内线粒体碎裂和细胞色素C释放百分率分别与细胞凋亡有关联(P<0.01);MEF细胞在Bak基因缺失(Bak-/-)时,应用化学诱导剂导致的细胞凋亡率(17.9%)明显低于野生型MEF细胞(71.3%)(P<0.01);且Bax和Bak基因两者协同作用可以增强细胞凋亡发生率;当pEGFP-Bak重新导入Bax-/-/Bak-/-MEF细胞,线粒体破碎百分率从43.7%增加到76.4%,pEGFP-Bak组细胞凋亡率明显高于pEGFP-Bax组(P<0.05);应用不同的化学诱导剂均可以得到同样的结果;且Bcl-2不能够明显阻止Bak诱导的细胞凋亡。结论:Bak基因明确诱导线粒体碎裂和细胞色素C释放,导致细胞凋亡,其诱导细胞凋亡的效果明显大于Bax基因,并且其作用独立于Bax基因功能之外。

吸烟的慢性阻塞性肺病患者外周血中性粒细胞Bak mRNA的表达

目的探讨吸烟的慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)患者外周血Bak基因表达异常及其与COPD发病的关系。方法入选者包括健康对照组(不吸烟者10例、吸烟者14例)和轻中度吸烟COPD患者9例。使用Percoll非连续密度梯度沉降法分离人外周血中性粒细胞,使用Real-time PCR来检测外周血中性粒细胞中BakmRNA的表达水平。结果相对于健康对照组,轻中度COPD患者外周血中性粒细胞中的BakmRNA水平(0.88±0.38)明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);吸烟健康者外周血中性粒细胞中BakmRNA水平(1.23±0.29)低于不吸烟健康者(1.33±0.38),但差异无统计学意义;BakmRNA水平与FEV1/预计值%、FEV1/FVC%均呈正相关,相关系数r分别为0.438 8(P<0.05)和0.432 1(P<0.05)。结论 Bak基因表达异常可能与COPD发病有一定关系。BakmRNA水平与临床肺功能之间有明显相关性,推测可能与COPD的严重程度相关。