营养性贫血患者MCL-1和BAK蛋白的表达及其临床意义的研究

本研究旨在探讨MCL-1、BAK蛋白与营养性贫血发生发展的关系及其临床意义。采用酶联免疫吸附双抗体夹心法(ELISA)检测66例营养性贫血患者血清中MCL-1、BAK蛋白表达水平。以18例健康体检者为正常对照。结果表明:①营养性贫血组MCL-1蛋白表达水平明显于低正常对照组(P<0.001),BAK蛋白表达水平明显高于正常对照组(P<0.001),不同类型营养性贫血(缺铁性贫血、巨幼细胞性贫血、混合性贫血)各组间MCL-1、BAK蛋白表达水平无明显差异(P>0.05);②营养性贫血组治疗后MCL-1蛋白表达水平明显高于治疗前(P<0.05),BAK蛋白表达水平明显低于治疗前(P<0.05);③营养性贫血患者MCL-1蛋白与BAK蛋白表达水平呈负相关(r=-0.858,P<0.05)。结论:MCL-1和BAK蛋白在营养性贫血的发生发展中均有重要作用,并可作为协助诊断营养性贫血及判断预后的参考指标。

平阳霉素化疗对口腔鳞癌bcl-xl、Bak蛋白表达的影响

目的探讨平阳霉素化疗对口腔鳞癌bcl-xl、Bak蛋白表达的影响,进一步了解平阳霉素用于口腔鳞癌化疗的机制。方法从第四军医大学口腔医学院口腔颌面外科及解放军第150中心医院口腔科接受平阳霉素术前诱导化疗的口腔鳞癌病例中筛选出平阳霉素化疗为初始治疗的患者,有效组和无效组均为20例,用免疫组织化学染色方法检测每位患者用药前后组织标本中bcl-xl、Bak蛋白表达水平。结果有效组平阳霉素化疗后的口腔鳞癌标本中bcl-xl蛋白表达明显降低(P<0.01),而Bak蛋白的表达水平无明显改变(P>0.05)。而无效组bcl-xl、Bak蛋白的表达均无明显变化(P>0.05)。结论有效组中平阳霉素能有效地下调口腔鳞癌bcl-xl蛋白的表达。

凋亡抑制因子NF-кB(p50)在非小细胞型肺癌中的表达及其与Bcl-xl、Bak蛋白表达的关系

为探讨细胞核因子к B的表达在肺癌发生发展中的作用及其与 Bcl-xl、 Bak蛋白表达的相互关系 ,对 8例正常支气管粘膜上皮、9例不典型增生、43例肺癌及 10例淋巴结转移癌石蜡切片组织应用免疫组织化学链霉素抗生素蛋白 -过氧化酶法 (SP法 )检测 NF-к B(p5 0 )、Bcl-xl和 Bak蛋白的表达。结果显示 ,肺癌、淋巴结转移癌中 NF-к B(p5 0 )阳性率分别为 67.44 %和 60 .0 0 % ,显著高于正常支气管粘膜上皮及不典型增生中的阳性率 12 .5 0 %及 11.11% (P均 <0 .0 5 ) ;低分化、中分化肺癌中阳性率分别为 81.2 5 %、77.78% ,较高分化的 2 8.5 7%明显升高 (P均 <0 .0 1)。TNM分期 期病例中 NF-к B(p5 0 )表达阳性率 93 .75 %高于 + 期病例的 5 1.85 % (P<0 .0 1) ,NF-к B(p5 0 )表达与 Bcl-xl蛋白表达呈正相关 (P<0 .0 1)。

Bak和Bcl-xL蛋白在胰腺癌中表达的临床病理学意义

目的 :观察促进细胞凋亡的Bak蛋白与抑制细胞凋亡的Bcl xL蛋白对胰腺癌发生、进展、转移及预后的影响。方法 :免疫组织化学方法 (SABC法 )检测 10例正常胰腺组织、5 9例胰腺癌及 6 5例胰周淋巴结组织内的Bak和Bcl xL蛋白表达 ;TUNEL法检测胰腺癌组织内的凋亡细胞。结果 :Bak、Bcl xL蛋白在正常胰腺组织表达率分别为 2 / 10 ,4 / 10 ,凋亡率为 2 / 10 ;在胰腺癌组织的表达率分别为 79.7% (47/5 9) ,32 .2 % (19/ 5 9) ;凋亡率为 74 .6 % (44 / 5 9)。Bak蛋白在正常胰腺、高分化胰腺癌、中分化胰腺癌中的表达逐渐增高 ;在转移淋巴结与非转移淋巴结中表达率分别为 86 .4 % (19/ 2 2 ) ,2 3.3% (10 / 4 3) ,二者差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。中、高分化胰腺癌Bak蛋白高表达 ,术后平均生存时间长。结论 :Bak蛋白的表达与细胞凋亡呈正相关趋势 ,Bcl xL则呈负相关趋势。细胞凋亡主要影响胰腺癌的发展、转移及预后。Bak蛋白可作为胰腺癌预后评估的一项指标和一种抗癌基因有望用于胰腺癌治疗。

Bak1腺病毒表达载体的构建及对人成骨肉瘤细胞的影响

目的构建人Bcl2拮抗1(Bak1)基因重组表达腺病毒pAd-Bak1,并感染人成骨肉瘤细胞MG63建立过表达Bak1的细胞模型,检测其对细胞活性的影响。方法利用qPCR扩增Bak1全长cDNA,利用穿梭质粒pENTER构建载有Bak1基因的重组穿梭质粒pENTER-Bak1,通过基因测序鉴定载体序列。将重组载体PmeⅠ线性化、脱磷酸化后,转入含有腺病毒骨架质粒pAd-Amp的感受态BJ5183细胞中进行基因同源重组。将重组腺病毒质粒pAD-Bak1经PacⅠ酶切线性化后,用Lipofectamine 2000脂质体转染到HEK-293细胞中进行包装扩繁,荧光定量PCR法测定病毒滴度。感染MG63细胞,qPCR和Western blot检测Bak1的表达,MTT检测细胞活性。结果测序及酶切验证pENTER-Bak1构建成功。pAD-Bak1感染MG63细胞,qPCR检测到细胞中Bak1基因过表达(与NC对照组和空白对照组相比P<0.01、P<0.01),Western blot检测到细胞中Bak1蛋白过表达。MTT检测显示与NC对照组相比,细胞活性减弱(P<0.05)。结论成功构建了Bak1重组表达腺病毒,验证了其能够感染MG63细胞表达Bak1蛋白,证明了过表达Bak1可以减弱细胞的活性。为进一步研究Bak1的功能奠定了基础。

凋亡相关蛋白Bak和Bcl-xl在皮肤鳞状细胞癌组织中的表达及意义

目的探讨凋亡相关蛋白Bcl—xl和Bak在皮肤鳞状细胞癌组织发生、发展过程中的表达及意义。方法采用免疫组织化学S-P法，检测15例正常皮肤和30例鳞癌组织中Bcl—xl和Bak的表达。结果Bcl—xl在鳞癌组织中的表达（70％）高于在正常皮肤中的表达（13．3％），其差异有统计学意义（P〈0．05）；Bak在鳞癌组织中的表达（66．7％）明显高于正常皮肤（6．7％），其差异有统计学意义（P〈0．05），在中低分化鳞癌组的表达（41．7％）较高分化组（83．3％）明显降低（P〈0．05）。结论Bcl—xl和Bak的异常表达对皮肤鳞癌的发生、发展可能有着一定作用。

缺氧诱导因子HIF-1α与促凋亡蛋白BAK在胃癌中的表达及意义

目的探讨HIF-1α和BAK蛋白在胃癌中的表达情况,以及二者在胃癌中的相互关系及作用。方法应用免疫组化SABC染色法检测80例胃癌组织和20例正常胃组织中的HIF-1α和BAK蛋白的表达情况。结果胃癌中HIF-lα和BAK蛋白的表达阳性率分别为56.3%(45/80)和67.5%(54/80),而在胃正常组织中分别为5.0%(1/20)和20.0%(4/20),二者在胃癌中的表达显著高于胃正常组织,其差异有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α蛋白表达与胃癌组织的浸润范围、分化程度及淋巴结转移有关(P<0.05),与临床分期、年龄及性别无关(P>0.05);BAK蛋白表达与胃癌浸润及分化程度相关(P<0.05),与淋巴结转移、临床分期、年龄及性别无关(P>0.05)。胃癌组织中HIF-1α与BAK蛋白的阳性表达之间呈正相关(列联系数r=0.056,P<0.05)。结论 HIF-1α与BAK蛋白在胃癌的临床分期及浸润转移中存在关系,这对于研究胃癌的发生和发展,以及对于探索以二者为靶点的抗肿瘤治疗有重要意义。

利用荧光极化技术在均相系统内建立基于Bcl-2/Bak作用模式的高通量药物筛选体系

目的:利用荧光极化原理,在液相系统内建立基于Bcl-2/Bak相互作用模式的高通量药物筛选体系。方法:在液相系统内建立Bcl-2蛋白和多肽的相互作用体系,用光度计检测荧光极化值,分析荧光极化值随蛋白或多肽浓度变化而改变的趋势。结果:对应于Bak蛋白BH3结构域的5FAM标记肽(LP)可与Bcl-2蛋白相互作用,建立了二者相互作用的饱和曲线;非标记竞争性短肽(CP)和LP竞争性地与Bcl-2蛋白结合,而无关肽(NP)则不与Bcl-2相互作用;基于Bcl-2结构筛选到的小分子化合物SC对体系内LP荧光极化值的影响模式与CP相同。结论:在均相系统内初步建立了基于抑制Bcl-2活性进而促进细胞凋亡的药物高通量筛选方法,为实现药物的高通量筛选奠定了基础。

玉竹高异黄酮抑制人肺癌细胞A549增殖的作用及机制

目的:以人肺癌A549细胞为研究对象,探讨玉竹中提取的高异黄酮对A549细胞增殖的抑制作用及其作用机制。方法:从玉竹中提取高异黄酮,作用于肺癌细胞A549;噻唑蓝(MTT)比色法观察高异黄酮12.5,25,50,100 mg·L^(-1)作用于A549细胞6,12,24 h对细胞存活率的影响。通过流式细胞仪检测细胞凋亡及周期变化,并通过蛋白免疫印迹法(Western blot)分析与细胞凋亡相关半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),B细胞淋巴瘤(白血病)-2(Bcl-2),Bcl-2对抗杀伤性蛋白(Bak)和与细胞周期相关的磷酸化周期素依赖激酶2(p-Cdc 2),细胞周期蛋白依赖性激酶2(Cdc 2)及p38蛋白表达。结果:与空白组比较,高异黄酮呈剂量和时间依赖性抑制A549细胞的增殖(P<0.05,P<0.01),高异黄酮对A549细胞处理12 h后,细胞周期阻滞于G2/M期(P<0.05);与空白组比较,25,50,100 mg·L^(-1)高异黄酮可显著促进凋亡蛋白Caspase-3和Bak表达,抑制Bcl-2表达(P<0.01),可显著促进细胞周期蛋白p-Cdc 2和p38表达,抑制Cdc 2表达(P<0.01)。结论:玉竹中提取的高异黄酮对A549细胞增殖具有抑制作用,能使A549细胞阻滞于细胞周期G2/M期,其机制与线粒体介导的细胞凋亡和p38 MAPK通路相关。