BALB/c被毛突变无毛小鼠T细胞亚群的比例

目的 研究BALB/c被毛突变无毛小鼠脾脏T细胞亚群数目及比例 ,并与BALB/c裸鼠及BALB/c正常小鼠进行比较。方法 应用荧光素标记的单克隆抗体反应及流式细胞仪测定T细胞亚群数目及比例。结果 BALB/c被毛突变无毛小鼠、稀毛小鼠的L3T4+ 、Ly - 2 + T细胞亚群比例分别为 2 3.41± 1.73、6 .4± 1.5 1和 2 6 .6± 2 .79、6 .7± 0 .74,BALB/c正常小鼠的L3T4+ 、Ly - 2 + T细胞亚群比例为 31.5± 3.14、8.6± 1.0 5。结论 不同于BALB/c裸鼠 ,BALB/c被毛突变无毛小鼠、稀毛小鼠由于有胸腺 ,其脾脏L3T4+ 与Ly - 2 + T细胞亚群比例接近于正常BALB/c鼠 ,提示其具有基本正常的细胞免疫功能。

BALB/c突变卷毛小鼠部分生长发育指标初探

目的利用近交培育建立BALB/c突变卷毛小鼠模型,分析突变小鼠与正常小鼠间生长发育和脏器系数的突变差异。方法选择21 d、42 d和63 d三个不同日龄组的BALB/c突变卷毛小鼠和正常BALB/c小鼠各20只,雌雄各半,分别测量体质量、头长、体长、尾长及主要脏器质量,计算头体比、尾体比及脏器系数并进行对比分析。结果 F4代的BALB/c突变卷毛小鼠已完全纯合。21d和42d突变卷毛小鼠头体比和尾体比小于正常小鼠(P<0.05);63d突变卷毛小鼠的体质量、头体比和尾体比均小于正常小鼠(P<0.05)。21d突变卷毛小鼠的心脏、脾脏、卵巢、子宫系数均大于正常小鼠(P<0.05,P<0.01);42d突变卷毛小鼠的心脏和胸腺系数低于正常小鼠,脑和睾丸系数高于正常小鼠(P<0.05,P<0.01);63d突变卷毛小鼠的心脏和子宫系数低于正常小鼠,脑系数高于正常小鼠(P<0.05,P<0.01)。结论 BALB/c突变卷毛小鼠与正常小鼠的外观特征和脏器系数均存在差异,这些突变差异对于研究BALB/c突变卷毛小鼠的生长发育、心血管系统、免疫系统和生殖系统都具有十分重要的意义。

BALB/c突变卷毛小鼠皮肤组织结构的分析

目的探讨BALB/c突变卷毛小鼠的皮肤组织结构与正常BALB/c小鼠之间是否存在突变差异。方法选择10 d、21 d、42 d和63 d四个不同日龄组的BALB/c突变卷毛小鼠和正常BALB/c小鼠每组各10只,观察两组小鼠被毛外观差异情况,取两小块皮肤组织,直接镜检毛囊结构和皮肤组织病理学检测。结果 BALB/c突变卷毛小鼠生长至10 d时被毛弯曲,能够与同日龄的正常小鼠加以鉴别。镜检观察21 d、42 d和63 d的BALB/c突变卷毛小鼠毛囊中毛发根数明显少于正常小鼠,被毛稀疏且毛发卷曲明显。皮肤组织病理学检测结果显示四个不同日龄组的BALB/c突变卷毛小鼠的毛囊数均显著少于正常小鼠。63 d的BALB/c突变卷毛小鼠处于生长期的毛囊中可见毛发弯曲的现象。结论 BALB/c突变卷毛小鼠的毛囊和皮肤组织结构与正常小鼠存在明显差异,说明其皮肤组织结构也发生了改变,这为今后研究突变卷毛小鼠的突变基因和模型应用提供了理论参考。

BALB/c突变卷毛小鼠血液学指标的检测分析

目的探讨BALB/c突变卷毛小鼠的血液学指标与正常BALB/c小鼠之间是否存在突变差异。方法选择6周龄的BALB/c突变卷毛小鼠和正常BALB/c小鼠各20只(雌雄各半),使用全自动血细胞分析仪检测8项血液常规指标;使用全自动生化仪检测15项血清电解质及生化指标,并对两组结果进行对比分析。结果 BALB/c突变卷毛小鼠的白细胞、平均血细胞容积、血小板计数和平均血细胞血红蛋白浓度的性别及组间结果与正常小鼠具有显著性差异(P<0.05,P<0.01);BALB/c突变卷毛小鼠Na+、K+和Cl-的性别及组间结果与正常小鼠具有显著性差异(P<0.05,P<0.01);BALB/c突变卷毛小鼠丙氨酸转氨酶、葡萄糖和甘油三酯的性别和组间结果与正常小鼠具有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。结论 BALB/c突变卷毛小鼠和正常BALB/c小鼠的部分血液学指标存在明显差异,这为今后研究和应用BALB/c突变卷毛小鼠模型提供了理论参考。

BALB/c突变无毛小鼠研究概况

BALB/c突变无毛小鼠是军事医学科学院实验动物中心自行培育成功的新的被毛突变小鼠。根据基因的命名原则 ,将本突变无毛小鼠命名为Uncovered ,基因标记为Uncv。该命名得到小鼠标准化遗传命名国际委员会的认可 ,并被收录到小鼠基因数据库中。本文主要介绍该突变无毛小鼠的生物学特性观察、皮肤及被毛的变化。

BALB/c突变卷毛小鼠肝癌移植模型对比分析

目的探讨BALB/c突变卷毛小鼠与正常BALB/c小鼠应用两种肝癌移植方式建立肝癌模型存在的差异。方法将制备好的H22细胞注射于两组小鼠右侧下肢根部皮下,每只注射0.2 mL,7 d后摘取皮下肿瘤。选取皮下肿瘤边缘质地较好的部分,切割成组织微块(直径0.5~1 mm),移植于肝原位,15 d后摘取肝肿瘤。用游标卡尺测量皮下和肝肿瘤长短径计算肿瘤体积,并对两组小鼠的结果进行对比分析。将两组肿瘤组织进行HE染色,光镜下观察其形态学改变。结果卷毛小鼠的皮下移植和原位移植肿瘤不仅体积均显著大于正常小鼠(P<0.05),而且肿瘤大小较均匀,肿瘤更加立体,多呈三维状态。卷毛小鼠肝原位肿瘤与周边的正常肝组织浸润关系更密切。病理结果显示:卷毛小鼠皮下肿瘤与肌肉组织之间没有清晰的界线,侵蚀性较强;卷毛小鼠肝原位肿瘤的视野内肿瘤组织几乎侵蚀了整个肝组织。结论BALB/c突变卷毛小鼠在形成肝癌皮下移植肿瘤和肝原位移植肿瘤的能力显著优于正常BALB/c小鼠,预期为肝癌动物模型各项研究提供优质的动物模型平台。

BALB/c突变卷毛小鼠皮肤创伤愈合对比分析

目的探讨BALB/c突变卷毛小鼠在皮肤损伤自然愈合过程中与对照BALB/c小鼠存在的差异。方法选择6周龄BALB/c突变卷毛小鼠和对照BALB/c小鼠各10只,于小鼠背部做2个直径为0.5cm的圆形皮肤全层创口,备皮肤损伤模型,于损伤后第3,7,10,14天观察皮肤外形愈合情况,测量皮肤损伤面积的变化及计算伤口愈合率;同时于损伤后第3,7,10,14天取损伤部位皮肤连带周围正常皮肤,进行HE染色和天狼猩红染色,以观察皮肤在愈合过程中的形态学变化。结果外观结果显示:突变卷毛小鼠在创后3d和7d的愈合伤口明显愈合较快。愈合率结果显示:卷毛小鼠的皮肤在创后3d、7d的愈合率显著高于对照小鼠的愈合率,具有统计学意义(P<0.05),而在创后10d和14d两组小鼠的愈合率不具有显著差异。病理结果显示:突变卷毛小鼠在创后3d创面胶原纤维明显增多,可见少量炎症细胞浸润,毛细血管扩张充血,创后7d胶原增长迅速,肉芽组织显著增多,可见部分表皮再生生长。天狼猩红染色结果显示:卷毛小鼠在创后3d至14d可以清晰的看到胶原纤维和肉芽组织从底层逐渐顶替修复破损部位,直至表皮和毛囊生长出来。结论BALB/c突变卷毛小鼠皮肤创伤后前期的愈合能力强于对照小鼠,为今后该突变小鼠应用于皮肤创伤愈合模型研究提供了理论参考。

微卫星DNA标记对BABL/c突变卷毛小鼠遗传特性的分析

目的利用微卫星DNA标记技术对BALB/c突变卷毛小鼠与正常BALB/c小鼠进行遗传检测,旨在分析BALB/c突变卷毛小鼠与正常小鼠之间存在的遗传差异。方法选取38个微卫星DNA位点结合荧光PCR技术和STR扫描基因型来检测BALB/c突变卷毛小鼠、无毛小鼠与正常小鼠三个群体的遗传变异情况。结果 38个微卫星位点在BALB/c突变卷毛小鼠与正常小鼠之间有27个微卫星位点相同,有11个位点存在差异,其突变率为28.9%(11/38);BABL/c突变无毛小鼠与正常小鼠之间有30个位点完全相同,8个位点存在差异,其突变率为21.1%(8/38);而BABL/c突变卷毛小鼠与无毛小鼠间也有12个位点存在差异。结论 BALB/c突变卷毛小鼠的突变率较高,且明显高于无毛小鼠,证明了卷毛小鼠突变与无毛小鼠突变是两个完全不同的突变系,为今后研究和开发应用BALB/c突变卷毛小鼠提供可靠的理论数据。

BABL/c突变卷毛小鼠免疫学特性指标的分析

目的探讨BALB/c突变卷毛小鼠与BALB/c小鼠之间的免疫学指标是否存在差异。方法选择6周龄的BALB/c突变卷毛小鼠和BALB/c小鼠各20只(雌雄各半),分别使用全自动血细胞分析仪检测6项血液免疫细胞指标;使用全自动生化仪检测4项抗体和补体指标;ELISA法检测血清细胞因子TNF-α、IL-2、IL-4水平;并对两组结果进行对比分析。结果两组小鼠NE、NE#和MO的雌性及组间结果相比较具有显著性差异(P<0.05,P<0.01),两组小鼠LY的雌性结果相比较具有显著性差异(P<0.05);两组小鼠IgM的性别及组间结果相比具有显著性差异(P<0.05,P<0.01),两组小鼠的IgG和C3的雄性及组间结果相比较具有显著性差异(P<0.01),两组小鼠IL-4的雌性及组间结果相比较具有显著性差异(P<0.05)。结论 BALB/c突变卷毛小鼠和BALB/c小鼠的血液免疫学指标存在差异,提示突变基因可能对小鼠的免疫系统产生了一定的影响。

BALB/c突变小鼠的血液学和血液生化测定值

测定了ＢＡＬＢ／ｃ突变小鼠３种表现型——全毛、稀毛、无毛小鼠的血液学和血液生化值。结果：①血液学指标，３种表型之间无显著性差异；３种表型的血小板计数和无毛小鼠的血红蛋白含量在性别之间均有极显著性差异。②血液生化指标，无毛小鼠的血糖、白蛋白高于全毛和稀毛小鼠。全毛小鼠的ＴＧ、ＡＳＴ、ＡＬＴ，稀毛小鼠的Ｐ、ＣＨＯ，无毛小鼠的ＴＧ。

小鼠品系、性别和被毛对可视化假病毒感染模型的影响

目的探索小鼠品系、性别和被毛对利用活体成像技术所建立可视化假病毒感染模型的影响。方法将携带Fluc报告基因的马尔堡假病毒(pMARV-Fluc)经腹腔分别感染C57BL/6J小鼠和BALB/c小鼠,利用活体成像技术分析脱毛前后活体化学发光水平的差异。同时,利用埃博拉假病毒(pEBOV-Fluc)经腹腔途径感染不同性别的C57BL/6J小鼠和BALB/c小鼠,并对峰值发光水平和动态变化过程进行比较分析。结果 BALB/c小鼠的白色被毛对发光水平的遮挡比例为32%, C57BL/6J小鼠的黑色被毛对发光水平的遮挡比例达到82%,差异具有统计学意义(P<0.001)。相比雌性动物而言,雄性动物活体发光水平更强且一致性更好(P<0.05)。BALB/c小鼠发光峰值水平显著高于C57BL/6J(P<0.05),并表现出不同的动态变化过程,峰值时间点分别为4 d和6 d。结论小鼠品系、性别和被毛均对假病毒感染模型有影响。

BALB/c小鼠口服幽门螺杆菌裂解物配伍dmLT佐剂诱导黏膜局部及系统性免疫应答

目的观察口服免疫幽门螺杆菌(Hp)裂解物配伍黏膜佐剂双突变大肠埃希菌热不稳定毒素(double mutant heat-labile toxin,dmLT)在BALB/c小鼠中诱导抗Hp免疫保护效果,分析相关免疫应答特点。方法将SS1(Sydney strain 1)株Hp裂解物配伍佐剂dmLT经口服免疫BALB/c小鼠后,进行幽门螺杆菌胃部活菌接种。对照组小鼠给予口服生理盐水,每只200μl。感染后6周检测幽门螺杆菌胃部定植量,采集血清、脾脏、肠系膜淋巴结、小肠、盲肠、粪便等样本进行相关免疫应答分析。结果抗原配伍佐剂免疫组小鼠与对照组相比较胃部幽门螺杆菌定植量降低;血清中检测到比对照组更强的特异性IgG抗体反应,IgG亚型主要以IgG1为主,且IgG1/IgG2a比值显著高于对照组;小肠、盲肠、粪便中均检测到较高的sIgA,小肠中最为显著,而对照组中均未有明显sIgA反应;脾和肠系膜淋巴结中IL-17+CD4+T比例与对照组相比较显著升高。结论口服免疫Hp裂解物配伍佐剂dmLT诱导黏膜局部及系统性免疫应答,增强BALB/c小鼠抗幽门螺杆菌感染,与显著增强的Th17免疫应答,以及Th细胞中Th2的极化相关,该结果为进一步评价dmLT作为黏膜佐剂用于幽门螺杆菌重组蛋白疫苗提供了实验资料。

狂犬病“靶向性”Th表位DNA疫苗的构建与瞬时表达研究

用RT-PCR扩增BALB/c小鼠P31基因,在不影响氨基酸序列前提下,对序列中461nt NcoⅠ酶切位点进行定点突变;采用定向克隆方法将狂犬病病毒核蛋白、糖蛋白及NS蛋白主要Th抗原表位核苷酸序列替换P31序列中CLIP区域,进行新一轮PCR反应获得带有Kozak调控序列的P31-Th分子,以增加目的基因的表达量,并将含有Kozak序列的P31-Th分子克隆入真核表达载体pCI-neo多克隆位点,通过PCR与限制性内切酶酶切方法进行鉴定;最后将各Th表位表达载体转染COS-7细胞,Western-blot检测目的基因的瞬时表达。测序分析结果表明,BALB/c小鼠P31基因CDS区长648bp,编码215个氨基酸,与Gen-Bank中登录的Ii分子(NM_010545)的核苷酸序列、氨基酸序列均存在多个位点差异;定点突变后获得了P31分子突变体,经PCR及限制性内切酶酶切方法证明,成功构建了携带P31-Th分子的真核表达载体;Western-blot分析证实,各P31-Th分子均在COS-7细胞中获得瞬时表达,且表达的目的产物能够与兔抗P31多克隆抗体发生抗原抗体结合反应。结果表明,作者成功构建了狂犬病病毒主要Th抗原表位的"靶向性"核酸疫苗,为开展在小鼠的免疫学试验奠定了基础。

狂犬病“靶向性”中和表位DNA疫苗的构建与瞬时表达

采用RT-PCR获得BALB/c小鼠P41基因,并在不影响氨基酸序列前提下,对序列中461nt NcoⅠ酶切位点进行定点突变;然后采用定向克隆方法将狂犬病病毒糖蛋白主要中和抗原表位核苷酸序列替换P41序列中CLIP区域,进行新一轮PCR反应以获得带有Kozak调控序列的P41-N分子,以增加目的基因的表达量,并将该含有Kozak序列的P41-N分子克隆插入到真核表达载体pCI-neo多克隆位点,通过PCR与限制性内切酶酶切方法进行鉴定;最后将各中和表位表达载体转染COS-7细胞,Western blotting检测目的基因的瞬时表达。测序分析结果显示,BALB/c小鼠P41基因CDS区为840bp,编码279个氨基酸,与GenBank已登录(NM_010545)核苷酸序列、氨基酸序列均存在多个位点差异;定点突变后获得了P41分子突变体,经PCR及限制性内切酶酶切方法证明成功构建了携带P41-N分子的真核表达载体;Western blotting证实各P41-N分子均在COS-7细胞获得瞬时表达,且表达的目的产物能够与兔抗P41多克隆抗体发生抗原抗体结合反应。结果表明,成功构建了狂犬病病毒主要中和抗原表位的"靶向性"核酸疫苗,为开展在小鼠的免疫学试验奠定了基础。