A549肺腺癌细胞株BALB/C-nu/nu裸鼠骨转移模型的建立

目的探讨A549肺腺癌细胞株裸鼠骨转移模型建立的可行性.方法选择健康6~8周龄Balb/c-nu/nu裸鼠20只,将20只Balb/c-nu/nu裸鼠采用经皮左心室内注射法,将A549肺腺癌细胞株接种于裸鼠体内,接种后饲养观察Balb/c-nu/nu裸鼠的成瘤情况.结果全部裸鼠均完成经皮心脏肺腺癌细胞的种植,共造模成功12只,占到全部裸鼠的60%.造模成功的裸鼠成瘤天数经SPSS分析,结果符合正态分布,得出裸鼠成瘤天数的均值、标准差、及可信区间.结论通过经皮左心室内注射A549肺腺癌细胞株,建立Balb/c-nu/nu裸鼠肺腺癌骨转移模型,方法可行性强,科学可靠,成膜率高,可用于肺腺癌骨转移发病机制的研究.

淫羊藿素对BALB/c-nu裸鼠前列腺癌组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路及E-钙黏蛋白的影响

目的观察淫羊藿素对雄激素依赖型前列腺癌模型小鼠前列腺癌组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路及E-钙黏蛋白的影响并探讨其机制。方法雄性BALB/c-nu裸鼠40只,随机分为空白对照组、荷瘤组、LY294002组和淫羊藿素组,每组10只,除空白对照组外均采用含有2×107个/mL的人LNCaP前列腺癌细胞悬液前列腺内注射以建立前列腺癌LNCaP荷瘤鼠模型。2周后淫羊藿素组按80 mg/kg剂量尾静脉注射淫羊藿素治疗4周,PI3K/Akt抑制剂组尾静脉注射PI3K/Akt抑制剂LY294002,空白对照组、荷瘤组尾静脉注射等体积生理盐水。治疗结束后取前列腺组织,采用Western blotting检测磷酸化雄激素受体AR(p-AR)、磷酸化蛋白激酶(p-Akt)、雄激素受体剪接变异体7(AR-V7);免疫荧光双重染色(FITCCY3)法检测降钙素(Calcitonin)和钙黏蛋白E(E-cadherin)表达。结果荷瘤组前列腺组织p-AR和p-Akt均高表达,前列腺瘤组织芯片标本中AR-V7和Calctionin阳性率分别为(32.45±2.15)%和(46.31±5.01)%,E-cadherin阳性率(22.93±1.96)%,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。淫羊藿素组前列腺组织p-AR和p-Akt低表达,AR-V7和Calctionin阳性率分别为(17.02±1.23)%和(29.76±2.74)%,E-cadherin阳性率为(86.27±6.75)%,与荷瘤组比较差异有统计学意义(P<0.05)。LY294002组和淫羊藿素组组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论淫羊藿素具有调控P13K/Akt信号通路的作用,主要通过调控p-AR、pAkt、AR-V7和Calctionin水平而影响前列腺癌LNCa P细胞侵袭和转移。

探究三种筑巢材料及放置量对小鼠筑巢与繁育性能的影响

目的探究三种筑巢材料及放置量对小鼠筑巢与繁育性能的影响。方法C57BL/6JGpt(B6)小鼠、BALB/c Nj-Foxn1nu/Gpt(BALB/c-nu)小鼠随机各分为12组,每组36只(雄雌1∶2配繁),分别添加2、4、6、8 g 4种克重的拉菲草、纸棉、擦手纸筑巢材料,合笼后一周进行筑巢评分,每周统计总活产仔数、总离乳数、小鼠离乳体质量,持续统计5个月。结果(1)两种品系小鼠拉菲草组、擦手纸组筑巢评分均显著优于纸棉组(P<0.05),筑巢评分与筑巢材料放置量无显著关联(P>0.05)。(2)两种品系小鼠总活产仔数、总离乳数与筑巢材料种类均无显著关联(P>0.05);B6小鼠6 g擦手纸组总活产仔数、总离乳数显著优于2 g擦手纸组(P<0.05);BALB/c-nu小鼠2 g擦手纸组总活产仔数显著优于6 g擦手纸组(P<0.05),2 g筑巢材料组总离乳数均显著优于8 g筑巢材料组(P<0.05);两种品系小鼠离乳体质量与筑巢材料种类、放置量均无显著关联(P>0.05)。结论两种品系对不同筑巢材料及放置量存在差异。

DHEA联合γ射线对食管癌EC109细胞移植裸鼠的抑瘤与抗辐射作用

观察DHEA(17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯)联合137Csγ射线辐照对EC109移植小鼠肿瘤的抑制作用及放疗后对荷瘤小鼠造血系统的防护作用。将接种食管癌细胞系EC109的裸鼠按照处理方式的不同分为对照组、单照组、DHEA组和DHEA联合辐照组,给药组连续给药9 d,12 d后分别检测肿瘤抑制率、外周血细胞数、骨髓有核细胞数等指标。结果表明,DHEA组抑瘤率明显高于对照组,DHEA联合辐照组的瘤重分别低于单照组和对照组,具有统计学差异(p<0.01)。DHEA联合辐照组的红细胞、血红蛋白均高于对照组及单照组,差异有统计学意义(p<0.05)。提示DHEA联合γ射线辐照对食管癌移植小鼠肿瘤具有显著的协同抗瘤效果,DHEA对辐照后荷瘤小鼠造血系统具有一定的防护作用。

弥漫性大B细胞淋巴瘤BALB/C-nu/nu裸鼠皮下移植瘤模型的建立

目的探索弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)BALB/C-nu/nu裸鼠皮下移植瘤模型建立的方法。方法将DLBCL细胞株SUDHL-10、OCI-Ly8、OCI-Ly10接种于BALB/C-nu/nu裸鼠腋部皮下,每2~3天观察皮下肿瘤体积变化,并绘制肿瘤生长曲线。在裸鼠濒临死亡或皮下肿瘤长径≥20mm时将裸鼠处死,分离肿瘤组织进行HE染色以及免疫组化染色。结果裸鼠皮下见有肿瘤长出的时间为接种后第10~12天;SUDHL-10、OCI-Ly8、OCI-Ly10细胞接种的成瘤率分别为66.7%(4/6)、100%(6/6)、83.3%(5/6);接种后第42天皮下肿瘤长径最大可达20mm,此时裸鼠逐渐出现濒死状态,SUDHL-10、OCI-Ly8、OCI-Ly10细胞接种的肿瘤体积分别为(2617.66±332.98)mm^3、(2679.66±367.02)mm^3、(2409.60±640.84)mm^3。移植瘤HE染色形态与人DLBCL相符合。免疫组化染色显示,SUDHL-10、OCI-Ly8细胞接种后的肿瘤细胞CD20弥漫阳性、CD10弥漫阳性、Bcl-6阳性;OCI-Ly10细胞接种后的肿瘤细胞CD20部分阳性、CD10弥漫阳性、Bcl-6阴性、多发性骨髓瘤癌基因1阴性。结论成功构建DLBCL细胞BALB/C-nu/nu裸鼠皮下移植瘤模型;其移植瘤细胞与人DLBCL细胞相似,是较理想的研究DLBCL的实验动物模型。

甲型H1N1流感病毒感染不同免疫缺陷小鼠的比较

目的宿主免疫系统的功能状态在病毒的感染中起着至关重要的作用,本实验观察了不同免疫缺陷小鼠感染甲型H1N1流感病毒的差异。方法使用六个品系的近交系小鼠,经乙醚麻醉后进行滴鼻攻毒,分析其在病毒感染后存活率、体重变化和肺组织病理改变的异同。结果感染H1N1病毒的6种小鼠在观察的14 d内,野生型的C57BL/6小鼠感染开始体重缓慢下降,感染后期有所回升,有半数存活;BALB/c小鼠和四种免疫缺陷品系小鼠感染病毒后体重随病情发展快速下降,死亡率均为100%。野生型C57BL/6小鼠感染初期为较弥漫的间质性肺炎,后期病变逐渐局限;BALB/c小鼠和四种免疫缺陷品系小鼠感染病毒后出现弥漫的中重度间质性肺炎,细支气管上皮有变性坏死,但炎症细胞明显少于C57BL/6小鼠。结论在甲型H1N1流感病毒的初次感染中固有免疫和特异性免疫分别在感染的初期和后期起主要作用,宿主免疫系统的功能状态影响着甲型H1N1病毒感染和预后。

17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯联合放、化疗抗肿瘤作用的研究

目的观察17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯(DHEA)联合放、化疗对EC109食管癌移植小鼠的抑制作用及放化疗对荷瘤小鼠造血系统的防护作用。方法每只小鼠右侧腋窝下接种0.1 mL EC109细胞悬液,接种当天计为第1天。在接种后3 d,将30只接种EC109的裸鼠随机分为对照组、照射组、5-Fu组(25 mg/kg)、DHEA组、DHEA联合照射组、DHEA联合5-Fu组,每组5只。DHEA按照7.5 mg/kg剂量腹腔注射给药,0.2 mL/只,1次/d,连续9 d共给药9次。分别于第4天和第8天对照射组及DHEA联合照射组小鼠的肿瘤进行2 Gy局部照射。5-Fu按照25 mg/kg的剂量进行腹腔注射,0.2 mL/只,隔日1次,共给药4次。12 d后分别检测肿瘤抑制率、外周血细胞数、骨髓有核细胞数等指标。结果DHEA、DHEA联合照射组及DHEA联合化疗组瘤重均显著低于对照组[(0.34±0.02)g、(0.30±0.02)g、(0.23±0.02)g比(0.90±0.02)g,P<0.01],DHEA联合照射组瘤重低于单照组[(0.30±0.02)g比(0.70±0.03)g,P<0.05)]。DHEA、DHEA联合照射及DHEA联合化疗组单个核细胞数均高于照射组[(18.3±1.7)×106、(19.3±0.5)×106、(19.2±2.0)×106比(9.4±2.4)×106,P<0.05]。结论 DHEA联合照射或化疗对食管癌移植小鼠具有较好的协同抗瘤效果,DHEA对照射和化疗后荷瘤小鼠造血系统具有一定的防护作用。

基于冷冻肿瘤组织切片的磷酸化HER2免疫组织化学染色方法探讨

目的探索针对磷酸化人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)免疫组织化学染色实验中冷冻组织切片的最佳固定与保存条件。方法在BALB/c-nu/nu小鼠中建立人源性乳腺癌细胞BT474的皮下移植瘤模型,对比不同的抗原固定条件和存储时间下,免疫组织化学染色观察肿瘤模型中磷酸化HER2的信号变化。结果冰冻切片用体积分数为10%的甲醛溶液固定5 min,可以维持良好的细胞形态。在-20℃的存储条件下,肿瘤组织中磷酸化HER2蛋白在12周内表达稳定。结论冰冻组织切片进行免疫组织化学染色用时短,可以作为常规石蜡切片染色方法的补充或者替代。

艾康片减轻环磷酰胺心脏毒性研究

目的:评价艾康片对环磷酰胺引起的心脏毒性的保护作用。方法:将40只BALB/c-nu小鼠随机分为正常组、模型组及艾康片高、中、低剂量组,每组8只。除正常组外,其余各组腹腔注射环磷酰胺0.3 g/kg制备环磷酰胺心脏毒性模型,每周1次,连续2周。模型制备当天,艾康片高、中、低剂量组按20 mL/(kg·d)的剂量分别灌胃浓度为0.046 g/mL、0.023 g/mL、0.012 g/mL的艾康片溶液,每天1次,连续给药2周;正常组、模型组在相同条件下灌胃等体积蒸馏水。检测各组小鼠血清乳酸脱氢酶(LDH)、羟丁酸脱氢酶(HBDH)、谷草转氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CKMB)含量;计算心脏指数;HE染色观察心脏病理学改变。结果:与正常组比较,模型组小鼠心脏指数及血清LDH、HBDH均升高(P<0.05),心肌细胞肥大、心肌细胞变性、炎症细胞浸润Rank值及个体评分均增加(P<0.01)。与模型组比较,艾康片高、中、低剂量组心脏指数、血清LDH、HBDH均降低(P<0.01);艾康片高剂量组心肌细胞肥大Rank值及个体评分降低(P<0.05);艾康片中剂量组心肌细胞肥大、心肌细胞变性、炎症细胞浸润Rank值及个体评分均降低(P<0.05,P<0.01)。结论:艾康片对环磷酰胺引起的心脏毒性有保护作用。

基于非靶向尿液代谢组学方法的气虚模型评价

目的:通过代谢组学方法,从生物标志物及代谢通路角度,探讨Balb/C-nu小鼠游泳力竭法建立气虚模型的复制情况。方法:将Balb/C-nu小鼠随机分为正常组和气虚组,其中气虚组采用连续15 d尾部固定5%体质量金属游泳至力竭(鼻尖浸水时间>5 s)的方法建立气虚模型。利用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOF/MS)进行尿液代谢组学分析,流动相选择乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)梯度洗脱(0~1 min,5%~8%A;1~4 min,8%~8.5%A;4~5 min,8.5%~12%A;5~10 min,12%~40%A;10~12 min,40%~100%A;12~15 min,100%A),流速0.3 mL·min^(-1),进样量10μL,电喷雾离子源(ESI),正、负离子模式检测,扫描范围为m/z 50~1000。运用主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)、人类代谢组数据库(HMDB)和MSE采集的高碰撞能量离子碎片信息,以及串联质谱法(MS/MS)碎片离子信息等鉴定潜在的生物标志物。采用京都基因和基因组百科全书(KEGG)数据库与MetaboAnalyst 5.0分析生物标志物的相应代谢通路及通路富集。结果:正常组和气虚组小鼠尿液内源性物质明显分离,并有24个具有显著差异的生物标志物。这些生物标志物涉及的代谢通路有三羧酸循环、糖酵解代谢、氨基酸代谢、脂肪酸代谢、嘧啶代谢、类固醇激素生物合成和色氨酸代谢等。其中,与能量相关的代谢通路有三羧酸循环、糖酵解代谢、氨基酸代谢、脂肪酸代谢、嘧啶代谢、类固醇激素生物合成。结论:通过尿液代谢组学考察,结合体征外观,成功评价了Balb/C-nu小鼠游泳力竭法建立的气虚模型,同时验证了气虚与能量代谢途径密切相关。