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以肿瘤抗原BAP31为靶点的基因疫苗构建及其诱导小鼠免疫反应的研究 被引量:3
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作者 宋朝君 孙元杰 +5 位作者 魏玉英 张赟 欧阳清 陈琨 金伯泉 杨琨 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期547-549,552,共4页
目的:构建重组表达载体P-BAP31和P-L-BAP31基因疫苗并接种小鼠,评价其诱导的体液和细胞免疫应答。方法:利用分子克隆技术,构建重组质粒P-BAP31和P-L-BAP31,同时构建P-BAP31/EGFP和P-L-BAP31/EGFP重组质粒,并将其以脂质体瞬时转染HeLa细... 目的:构建重组表达载体P-BAP31和P-L-BAP31基因疫苗并接种小鼠,评价其诱导的体液和细胞免疫应答。方法:利用分子克隆技术,构建重组质粒P-BAP31和P-L-BAP31,同时构建P-BAP31/EGFP和P-L-BAP31/EGFP重组质粒,并将其以脂质体瞬时转染HeLa细胞,通过荧光显微镜观察目的蛋白的表达;将重组质粒P-BAP31和P-L-BAP31免疫C57BL/6小鼠,采用间接ELISA检测免疫小鼠血清中特异性抗体效价;通过酶联免疫斑点实验(ELISPOT)检测免疫脾细胞在受到BAP31抗原刺激后产生IFN-γ和IL-4细胞因子的频率;通过乳酸脱氢酶(LDH释放)试验检测小鼠特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的应答。结果:酶切及测序结果表明,成功构建了针对BAP31肿瘤抗原的P-BAP31和P-L-BAP31基因疫苗。通过荧光显微镜观察重组质粒转染的HeLa细胞,可见EGFP报告基因表达的绿色荧光。ELISA检测免疫小鼠血清中特异性抗体效价发现,带LAMP组明显高于不带LAMP组(P<0.05),且两者均高于空质粒(P-LAMP)及正常对照(N)组(P<0.01)。ELISPOT检测脾细胞分泌细胞因子IFN-γ和IL-4的频率,带LAMP组与其他组相比显著提高(P<0.01)。LDH释放试验显示,带LAMP组的特异性CTL活性高于不带LAMP组,且均高于对照组(P<0.01)。结论:构建了针对肿瘤抗原BAP31的全长基因疫苗,以其免疫C57BL/6小鼠可诱导特异性体液和细胞免疫反应,其中,P-L-BAP31基因疫苗各项免疫反应均优于P-BAP31。 展开更多
关键词 bap31分子 LAMP分子 基因疫苗 ELISPOT
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miR-451a调控BAP31诱导结直肠癌细胞凋亡 被引量:3
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作者 许可 韩彬 +1 位作者 柏杨 周黎明 《四川生理科学杂志》 2017年第4期171-177,共7页
目的:探讨miR-451a及靶蛋白BAP31在结直肠癌中的作用。方法:体外培养HCT116、SW620、SW480、DLD细胞,以Real-time PCR法检测结直肠癌细胞系中miR-451a和BAP31的相对表达量;通过建立miR-451a不同表达情况的结直肠癌细胞HCT116模型,应用... 目的:探讨miR-451a及靶蛋白BAP31在结直肠癌中的作用。方法:体外培养HCT116、SW620、SW480、DLD细胞,以Real-time PCR法检测结直肠癌细胞系中miR-451a和BAP31的相对表达量;通过建立miR-451a不同表达情况的结直肠癌细胞HCT116模型,应用抑制消减杂交方法建立抑制消减文库,从中筛选miR-451a的调控蛋白,并通过萤光素酶报告基因检测miR-451a的直接调控靶基因;采用MTT法、流式细胞术以及Hoechst染色法评价miR-451a调控的靶蛋白BAP31对结直肠细胞凋亡的调节作用。结果:在抑制杂交消减文库中得到了miR-451a可能调控的相关基因,其中在正向文库中得到BAP31、EEF1A1和CDC20等7个基因,在反向文库中得到DKK1和PSME1等4个基因。在HCT116、HT29、SW480、SW620和DLD结直肠癌细胞中miR-451a的相对表达量是正常结肠上皮细胞NCM460中的0.32、0.44、0.53、0.43和0.73倍,BAP31在DLD、HT29、SW620和HCT116结直肠癌细胞中的表达量是正常结肠上皮细胞NCM460中的1.85、2.84、2.37和3.71倍。双萤光素酶报告基因实验证明,miR-451a可作用于与BAP31开放阅读框上游177的位点,通过miR-451a作用使海肾荧光素酶的活性降低80.3%。在HCT116细胞和SW620细胞中过表达miR-451a后72h抑制率分别为39.50%和39.50%;沉默BAP31后72h抑制率分别为45.32%和53.56%。过表达miR-451a48h后HCT116凋亡增加13.57%,SW620细胞凋亡率增加13.2%;沉默BAP31 48h后HCT116细胞凋亡增加5.62%,SW620细胞凋亡率增加8.68%。结论:miR-451a在结直肠癌细胞中能够直接通过调控BAP31诱导细胞的凋亡从而抑制细胞的增殖。 展开更多
关键词 结直肠癌 miR-451a bap31 凋亡
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截短型BAP31/GST基因重组质粒的构建及融合蛋白的表达、纯化和鉴定
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作者 李海涛 宋朝君 +7 位作者 孙元杰 魏玉英 李永明 刘飞 刘志佳 张葵 金伯泉 杨琨 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期1-4,共4页
目的构建编码截短型肿瘤抗原BAP31(△BAP31)与GST融合基因的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并对融合蛋白(△BAP31/GST)进行纯化和初步鉴定。方法 PCR扩增编码△BAP31的基因片段,上下游分别引入EcoR I及Xho I酶切位点,亚克隆至含有GST标... 目的构建编码截短型肿瘤抗原BAP31(△BAP31)与GST融合基因的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并对融合蛋白(△BAP31/GST)进行纯化和初步鉴定。方法 PCR扩增编码△BAP31的基因片段,上下游分别引入EcoR I及Xho I酶切位点,亚克隆至含有GST标签的原核表达载体pGEX4T-1中,构建重组表达载体pGEX4T1-△BAP31,将该载体转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达△BAP31/GST,用GST亲和层析分离纯化原核表达的△BAP31/GST,表达产物分别用SDS-PAGE和West-ern blot进行鉴定。结果重组质粒经限制性内切酶EcoR I和Xho I双酶切鉴定和IPTG诱导表达△BAP31/GST的SDS-PAGE分析表明,表达产物的相对分子质量为40 000,与理论值相符,并主要以可溶性蛋白形式存在;经过对融合蛋白表达条件的优化,在IPTG浓度为1 mmol/L,诱导6 h目的蛋白表达量最高;灰度扫描分析发现,融合蛋白表达量占菌体蛋白总量的70.6%,纯化产物的纯度最高可达94.5%,Western blot证实该△BAP31/GST可与抗GST单克隆抗体(mAb)发生特异性结合反应,分子量为△BAP31与GST分子量之和,提示为融合蛋白。结论成功构建了编码△BAP31基因原核表达载体pGEX4T1-△BAP31,利用大肠杆菌表达系统和GST亲和层析,获得了较高纯度的△BAP31/GST融合蛋白,为进一步研究肿瘤抗原BAP31的功能及开发以BAP31作为靶点的肿瘤疫苗提供了试验基础。 展开更多
关键词 截短型bap31(△bap31) GST 融合蛋白 蛋白表达 纯化
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截短型肿瘤抗原BAP31 DNA疫苗的构建及免疫效果分析
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作者 孙元杰 宋朝君 +4 位作者 魏玉英 张贇 金伯泉 杨安钢 杨琨 《第四军医大学学报》 北大核心 2009年第14期1253-1256,共4页
目的:通过LAMP分子的靶向作用,增强截短型BAP31肿瘤抗原(BAP31)的MHC-II提呈,激活更多的特异性CD4+T细胞,最终辅助增加CTL细胞的杀伤活性及特异性抗体产生.方法:构建重组质粒P-△AP31和P-L-△AP31,同时构建重组质粒P-△AP31/EGFP和P-L-... 目的:通过LAMP分子的靶向作用,增强截短型BAP31肿瘤抗原(BAP31)的MHC-II提呈,激活更多的特异性CD4+T细胞,最终辅助增加CTL细胞的杀伤活性及特异性抗体产生.方法:构建重组质粒P-△AP31和P-L-△AP31,同时构建重组质粒P-△AP31/EGFP和P-L-△AP31/EGFP.质粒P-△AP31/EGFP和P-L-△AP31/EGFP瞬时转染Hela细胞,荧光显微镜观察目的蛋白的表达;将重组质粒P-△AP31和P-L-△AP31免疫C57BL/6小鼠,间接ELISA检测免疫小鼠血清中特异性抗体效价;ELISPOT检测免疫脾淋巴细胞分泌细胞因子IFN-γ和IL-4的频率;乳酸脱氢酶释放法检测免疫小鼠特异性CTL反应.结果:经酶切鉴定及序列测定,成功构建截短型肿瘤抗原BAP31的DNA疫苗重组载体;用带EGFP报告基因的重组质粒转染Hela细胞,荧光显微镜观察可见特异性的绿色荧光;ELISA检测免疫小鼠血清,带LAMP组BAP31特异性抗体效价明显高于不带LAMP组(P<0.01),且两者均高于空质粒及正常对照组;ELISPOT检测分泌IFN-γ,IL-4的T细胞频率,带LAMP组明显增高(P<0.01);杀伤试验表明,特异性CTL活性带LAMP组较不带LAMP组显著提高,且均高于对照组(P<0.01).结论:构建的P-△AP31和P-L-△AP31基因疫苗不仅在小鼠体内均可诱导特异性体液和细胞免疫应答,而且P-L-△AP31基因疫苗的免疫效果显著优于P-△AP31,为进一步研制肿瘤治疗性基因疫苗奠定了基础. 展开更多
关键词 bap31分子 LAMP分子 疫苗 DNA 酶联免疫斑点试验
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下调BAP31基因表达抑制结直肠癌细胞增殖侵袭及Wnt/β-catenin信号 被引量:2
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作者 李玉山 孙建明 李菊兰 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2019年第22期5602-5605,共4页
目的探讨下调B细胞受体相关蛋白(BAP)31基因表达对结直肠癌细胞增殖侵袭及Wnt/β-catenin信号的影响。方法以正常结肠上皮细胞NCM460为对照细胞,Western印迹检测结直肠癌DLD-1,HT29,SW620和HCT116细胞中BAP31的蛋白表达。设计合成BAP31... 目的探讨下调B细胞受体相关蛋白(BAP)31基因表达对结直肠癌细胞增殖侵袭及Wnt/β-catenin信号的影响。方法以正常结肠上皮细胞NCM460为对照细胞,Western印迹检测结直肠癌DLD-1,HT29,SW620和HCT116细胞中BAP31的蛋白表达。设计合成BAP31的特异性siRNA及阴性对照siRNA,分别命名为si-BAP31组和NC组,参照LipofectamineTM 2000说明转染HCT116细胞,仅加入脂质体的为空白对照组,Western印迹检测BAP31、β-catenin、增殖细胞核抗原(PCNA)和基质金属蛋白酶(MMP)-2的蛋白表达;细胞计数试剂盒(CCK)8检测细胞活力;Transwell小室检测穿膜细胞数。结果结直肠癌DLD-1,HT29,SW620和HCT116细胞中BAP31的表达均显著高于在NCM460细胞表达(P<0.05)。转染si-BAP31的HCT116细胞BAP31表达明显受到抑制,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。与NC组比较,si-BAP31组在24、48和72 h的细胞活力显著降低,在48 h的细胞侵袭能力及β-catenin、PCNA和MMP-2的蛋白表达均显著降低(P<0.05)。结论下调BAP31基因表达可抑制结直肠癌细胞增殖侵袭能力,机制可能与下调Wnt/β-catenin信号通路有关。 展开更多
关键词 结直肠癌 bap31基因 侵袭 Wnt/β-catenin信号
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运动抑制Fis1/Bap31信号通路蛋白表达减少海马神经元凋亡并改善抑郁大鼠活力
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作者 钱博文 钟志廷 +1 位作者 刘春艳 王皓 《皖南医学院学报》 CAS 2022年第1期15-18,共4页
目的:探讨运动对大鼠海马神经元凋亡的影响与改善大鼠抑郁样行为的机制。方法:48只SD大鼠,随机分为对照组、慢性温和不可预测性应激(CUMS)组、运动+CUMS组、运动+CUMS+运动组,每组12只。应激与孤养造模前,各运动组大鼠持续运动锻炼。10... 目的:探讨运动对大鼠海马神经元凋亡的影响与改善大鼠抑郁样行为的机制。方法:48只SD大鼠,随机分为对照组、慢性温和不可预测性应激(CUMS)组、运动+CUMS组、运动+CUMS+运动组,每组12只。应激与孤养造模前,各运动组大鼠持续运动锻炼。10周后,各CUMS组大鼠构建抑郁样行为模型,且运动+CUMS+运动组大鼠持续锻炼,共3周。模型构建后开展行为学测试,取脑组织用于Nissl染色,取海马组织用于Western blot检测。结果:与对照组相比,CUMS组大鼠糖水摄取率降低,旷场实验得分增加且强迫游泳不动时间增多;与CUMS组相比,持续运动增加了大鼠糖水摄取率,降低了旷场实验得分,减少了强迫游泳不动时间。Nissl染色结果显示持续运动逆转了抑郁样行为大鼠海马CA1区尼氏体数量。此外,与对照组相比,CUMS组大鼠海马组织中Fis1、Bap31、Caspase-8蛋白表达增多,且Cleaved-Caspase-3表达增加,Bcl-2/Bax表达比例降低,持续运动则有效地降低了这部分蛋白表达。结论:持续运动可能通过Fis1/Bap31通路调控海马组织神经元凋亡,发挥预防及改善CUMS/孤养诱导的大鼠抑郁样行为的作用。 展开更多
关键词 抑郁症 慢性应激 运动 神经元凋亡 Fis1/bap31通路
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BAP31在结直肠癌中的表达及临床意义 被引量:1
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作者 董令仪 姜可伟 +5 位作者 张彦斌 张辉 禚洪庆 崔志荣 叶颖江 王杉 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第20期1629-1634,共6页
采用组织芯片技术和免疫组织化学染色法检测B细胞受体相关蛋白31(B cell receptor associated protein31,BAP31)在120例结直肠癌组织及其配对远端正常组织中的表达情况,并分析其与临床病理特征之间的关系.结果显示,BAP31主要定位于胞浆... 采用组织芯片技术和免疫组织化学染色法检测B细胞受体相关蛋白31(B cell receptor associated protein31,BAP31)在120例结直肠癌组织及其配对远端正常组织中的表达情况,并分析其与临床病理特征之间的关系.结果显示,BAP31主要定位于胞浆,正常黏膜上皮呈阴性或弱阳性表达.在结直肠癌组织中阳性表达率为64.17%,明显高于正常黏膜上皮中的6.67%,差异具有统计学意义(P=0.000).BAP31阴性表达与结直肠癌的低分化程度(P=0.001)及远处转移相关(P=0.036).BAP31阴性患者总体生存率明显低于阳性患者(P=0.003).因此,BAP31可能是判断结直肠癌预后的潜在指标,并与肿瘤的侵袭性行为有关. 展开更多
关键词 bap31 结直肠癌 组织芯片 免疫组化
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BAP31 is frequently overexpressed in patients with primary colorectal cancer and correlates with better prognosis 被引量:2
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作者 DONG LingYi JIANG KeWei ZHANG YanBin ZHANG Hui ZHUO HongQing CUI ZhiRong YE YingJiang WANG Shan 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2011年第23期2444-2449,共6页
We previously showed that B cell receptor associated protein 31(BAP31) was significantly upregulated in colorectal cancer compared with normal mucosa epithelia. However, its expression pattern and pathological role in... We previously showed that B cell receptor associated protein 31(BAP31) was significantly upregulated in colorectal cancer compared with normal mucosa epithelia. However, its expression pattern and pathological role in colorectal cancer are not clearly understood. In this study, we investigated whether the expression of BAP31 was associated with the clinicopathological parameters of colorectal cancer. The expression pattern of BAP31 was detected by immunohistochemistry on a tissue microarray in both primary tumor and paired distant normal mucosa samples from 120 consecutive colorectal cancer patients. Furthermore, BAP31 protein expression was also determined in twenty colorectal adenomas and eight liver metastasis samples. There was positive expression of BAP31 in 64.17% of primary tumors and 6.67% in distant normal mucosa (P=0.000). Negative expression of BAP31 was correlated with distant metastasis (P=0.036) and lower tumor differentiation grade (P=0.001). Patients with BAP31-negative expression showed significantly lower overall survival rate (P=0.003) compared to patients with BAP31-positive expression. Our results demonstrate that BAP31 may serve as a candidate prognostic marker in colorectal cancer and negative BAP31 expression may lead to more aggressive invasion of colorectal cancer. 展开更多
关键词 患者 结直肠癌 过度表达 预后 原发性 受体相关蛋白 免疫组化检测 粘膜上皮
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