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抗草胺膦bar基因原核表达和纯化及其免疫反应性分析
1
作者
吕莉琨
苏旭
+3 位作者
王静
李闻
刘洪亮
卢长明
《环境与健康杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第11期989-992,共4页
目的实现抗草胺膦bar基因在原核表达系统中的高效表达及纯化,并分析其免疫反应性。方法将携带bar基因的重组质粒pET28a-bar转化到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,确定最佳诱导表达条件。获得的重组蛋白经镍亲和层析纯化后,免疫BALB/c小鼠...
目的实现抗草胺膦bar基因在原核表达系统中的高效表达及纯化,并分析其免疫反应性。方法将携带bar基因的重组质粒pET28a-bar转化到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,确定最佳诱导表达条件。获得的重组蛋白经镍亲和层析纯化后,免疫BALB/c小鼠,测定抗体效价,以获得的抗BAR的抗血清作为一抗进行Western blot反应,检测蛋白的免疫反应性,分析该原核表达蛋白与转bar基因油菜中蛋白的等同性。结果利用原核表达系统成功实现了BAR重组蛋白的高效表达,其最适表达条件为:0.5 mmol/L异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)、20℃和120 r/min摇床转速诱导过夜。以纯化后的目的蛋白作为抗原免疫小鼠,得到抗BAR的抗血清。以间接ELISA法测定抗血清效价达1∶102 400,将其作为一抗进行Western blot反应,结果显示该抗体与原核表达的重组蛋白及转bar基因油菜中的BAR蛋白均能特异性结合。结论获得了高纯度的BAR重组蛋白,制备了特异性抗BAR多克隆抗体。原核表达的重组蛋白与转bar基因油菜中的BAR蛋白具有相同的免疫反应性,为进行转bar基因产品的食用安全性评价提供实验依据。
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关键词
BAR基因
bar重组蛋白
原核表达
免疫反应性
原文传递
题名
抗草胺膦bar基因原核表达和纯化及其免疫反应性分析
1
作者
吕莉琨
苏旭
王静
李闻
刘洪亮
卢长明
机构
天津市疾病预防控制中心病原生物检测所
天津市疾病预防控制中心卫生检验所
天津市疾病预防控制中心环境与健康所
中国农业科学院油粒作物研究所
出处
《环境与健康杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第11期989-992,共4页
基金
国家"十一五"转基因重大专项(2008ZX08011-005)
文摘
目的实现抗草胺膦bar基因在原核表达系统中的高效表达及纯化,并分析其免疫反应性。方法将携带bar基因的重组质粒pET28a-bar转化到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,确定最佳诱导表达条件。获得的重组蛋白经镍亲和层析纯化后,免疫BALB/c小鼠,测定抗体效价,以获得的抗BAR的抗血清作为一抗进行Western blot反应,检测蛋白的免疫反应性,分析该原核表达蛋白与转bar基因油菜中蛋白的等同性。结果利用原核表达系统成功实现了BAR重组蛋白的高效表达,其最适表达条件为:0.5 mmol/L异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)、20℃和120 r/min摇床转速诱导过夜。以纯化后的目的蛋白作为抗原免疫小鼠,得到抗BAR的抗血清。以间接ELISA法测定抗血清效价达1∶102 400,将其作为一抗进行Western blot反应,结果显示该抗体与原核表达的重组蛋白及转bar基因油菜中的BAR蛋白均能特异性结合。结论获得了高纯度的BAR重组蛋白,制备了特异性抗BAR多克隆抗体。原核表达的重组蛋白与转bar基因油菜中的BAR蛋白具有相同的免疫反应性,为进行转bar基因产品的食用安全性评价提供实验依据。
关键词
BAR基因
bar重组蛋白
原核表达
免疫反应性
Keywords
Bialaphos resistance gene
BAR recombinant protein
Prokaryotic expression
Immunoreactivity
分类号
R117 [医药卫生—公共卫生与预防医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗草胺膦bar基因原核表达和纯化及其免疫反应性分析
吕莉琨
苏旭
王静
李闻
刘洪亮
卢长明
《环境与健康杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
0
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