可降解大豆过敏原蛋白酶的纯化与酶学性质

将前期筛选获得的芽孢杆菌Bacillus sp.BBE201108发酵培养后,以其发酵上清液作为蛋白酶的粗酶液,经硫酸铵分级沉淀、透析除盐、Q FF阴离子交换层析和Superdex 75凝胶过滤层析,蛋白酶的比酶活达到2 575.45 U/mg,纯化倍数为10.55,回收率为6.48%,经SDS-PAGE电泳显示为单一条带,该蛋白酶的表观相对分子质量约为46 000。该酶与大豆分离蛋白在p H8.0,50℃下反应30 min,可有效降解β-伴大豆球蛋白的α亚基和α＇亚基。在p H 7.0-9.0以及30-40℃下的稳定较好;Ca2＋存在的情况下,酶活提高了5%左右,而Mn2＋、Fe2＋和Cu2＋在不同程度上对该蛋白酶有抑制作用;苯甲基磺酰氟（PMSF）对该蛋白酶的抑制作用较为显著。酶学性质分析表明,该蛋白酶的Km为4.19 g/L,Vmax为4.04 g/（L·s）,Kcat为107.73 s-1,Kcat/Km为25.71 L/（g·s）。

降解β-伴大豆球蛋白菌株的筛选及其发酵条件优化

从预制备豆制品的大豆粉浆中筛选菌株,经酪蛋白初筛及大豆分离蛋白复筛并进行SDS-PAGE验证后,得到了一株能够高效降解β-伴大豆球蛋白α亚基、α'亚基和部分β亚基的Bacillus sp.BBE201108菌株。通过单因素碳源、氮源、无机盐及正交实验确定了Bacillus sp.BBE201108的最佳培养基配方为:葡萄糖2%、大豆蛋白胨2%、酵母粉1%、Na2HPO4·12H2O0.4%、KH2PO40.06%,同时,还研究了起始pH值、培养温度对菌株产酶的影响。在最佳培养条件下,蛋白酶活力提高了3倍,最高可达292.74U/mL。