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人B细胞活化相关基因BC-1514全长cDNA的克隆与原核表达
1
作者
芦兴武
殷际义
+1 位作者
李永海
崔莲仙
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第6期604-607,共4页
目的 克隆与B细胞活化相关的新基因及其原核表达。方法 采用差异显示反转录PCR(DDRT PCR)技术对人扁桃体活化和静止B细胞mRNA的差异表达进行分析 ,差异显示的片段经过Northern杂交验证后 ,作为探针进行人活化B细胞cDNA文库的筛选。将...
目的 克隆与B细胞活化相关的新基因及其原核表达。方法 采用差异显示反转录PCR(DDRT PCR)技术对人扁桃体活化和静止B细胞mRNA的差异表达进行分析 ,差异显示的片段经过Northern杂交验证后 ,作为探针进行人活化B细胞cDNA文库的筛选。将所获得的阳性克隆的编码区经PCR扩增后克隆到原核表达载体pGEX 5X 1中 ,重组质粒经酶切、测序鉴定后转化大肠杆菌BL 2 1,以IPTG诱导表达融合蛋白。结果 以在活化B细胞高表达的EST32为探针 ,经 3轮筛选人活化B细胞文库获得一个新的全长为 15 14bp的cDNA克隆 (命名为BC 15 14)。重组的BC 15 14蛋白可在E .coli中以融合蛋白的形式有效表达 ,其表达量约占细菌总蛋白量的 14.3%左右。BC 15 14cDNA的GenBank的登录号为AF30 44 42。结论 获得了 1条新的与B细胞活化相关的cDNA克隆并在E .coliBL 2 1中得到了有效表达。
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关键词
差异显示
B淋巴细胞
原核基因表达
CDNA
克隆
bc-1514
原文传递
题名
人B细胞活化相关基因BC-1514全长cDNA的克隆与原核表达
1
作者
芦兴武
殷际义
李永海
崔莲仙
机构
中国医学科学院中国协和医科大学医学分子生物学国家重点实验室
出处
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第6期604-607,共4页
基金
攀登计划基金资助项目 ( 930 2 110 0 3)
文摘
目的 克隆与B细胞活化相关的新基因及其原核表达。方法 采用差异显示反转录PCR(DDRT PCR)技术对人扁桃体活化和静止B细胞mRNA的差异表达进行分析 ,差异显示的片段经过Northern杂交验证后 ,作为探针进行人活化B细胞cDNA文库的筛选。将所获得的阳性克隆的编码区经PCR扩增后克隆到原核表达载体pGEX 5X 1中 ,重组质粒经酶切、测序鉴定后转化大肠杆菌BL 2 1,以IPTG诱导表达融合蛋白。结果 以在活化B细胞高表达的EST32为探针 ,经 3轮筛选人活化B细胞文库获得一个新的全长为 15 14bp的cDNA克隆 (命名为BC 15 14)。重组的BC 15 14蛋白可在E .coli中以融合蛋白的形式有效表达 ,其表达量约占细菌总蛋白量的 14.3%左右。BC 15 14cDNA的GenBank的登录号为AF30 44 42。结论 获得了 1条新的与B细胞活化相关的cDNA克隆并在E .coliBL 2 1中得到了有效表达。
关键词
差异显示
B淋巴细胞
原核基因表达
CDNA
克隆
bc-1514
Keywords
Differential display RT PCR
B lymphocyte
Prokaryotic gene expression
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人B细胞活化相关基因BC-1514全长cDNA的克隆与原核表达
芦兴武
殷际义
李永海
崔莲仙
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2001
0
原文传递
已选择
0
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参考文献
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