水稻脆秆突变体bc1-wu3的鉴定与基因克隆

【目的】茎秆机械强度与植株抗倒伏性直接相关。发掘脆秆突变体,克隆其相关基因有助于了解茎秆机械强度遗传机制,为抗倒伏育种提供理论依据。【方法】在经^(60)Co-γ诱变的粳稻品种武育粳3号后代群体中获得一个脆秆突变体,命名为bc1-wu3(brittle culm 1 from Wuyujing3),以突变体bc1-wu3为母本,Kasalath为父本构建相应的F_2分离群体,采用图位克隆的方法定位相应脆秆基因。【结果】与野生型相比,突变体的叶片、叶鞘、茎秆等组织在全生育期始终表现为脆性,易折断;穗长和粒长显著降低,粒宽显著增加。茎秆细胞细胞壁糖成分测定表明,细胞壁中纤维素含量极显著下降,而木糖、葡萄糖及阿拉伯糖含量则显著增加。茎秆切片观察发现突变体茎秆的厚壁细胞层数减少,厚壁细胞细胞壁极显著变薄。遗传分析表明,bc1-wu3脆性性状受1对隐性核基因控制。采用图位克隆的技术将该基因定位于第3染色体标记MK12与MK18之间,物理距离为57 kb,在此定位区段内包含1个已克隆的脆性基因BC1(LOC_Os03g30250)。测序结果表明,突变体bc1-wu3中BC1基因第2外显子内(CDS 659处)有1个碱基的替换(G-T),导致编码氨基酸由半胱氨酸变异为苯丙氨酸。实时荧光定量PCR结果表明,BC1基因在脆秆突变体bc1-wu3茎秆中的表达量显著降低。【结论】据此推断本研究中定位的脆秆基因bc1-wu3为BC1新等位基因。相关结果加深了对BC1基因功能的认识,有助于阐明水稻茎秆强度遗传机制。

Bc1-2基因家族与胃肠道间质瘤关系的研究进展

胃肠道间质瘤是一种常见的原发于消化道的间叶性肿瘤。Bc1-2基因家族参与细胞凋亡的调控,其参与G IST的形成与发展已被证实。但是,对于Bc1-2及其家族基因在G IST中表达的意义,目前存在广泛的争议。

一例Bjornstad综合征患儿BCS1L基因突变检测

目的:检测Bjornstad综合征患儿的基因突变。方法:提取患儿,其表型正常父母及100名正常人的外周血DNA,采用二代皮肤靶向测序包检测患儿的基因突变,然后应用Sanger测序方法进行验证。结果:测序结果发现患儿及其父母在BCS1L基因存在2个杂合突变,在第7个外显子上发现c.818delC缺失突变,在第8个外显子上发现c.917G>A错义突变。健康对照中未检测到BCS1L基因突变。结论:该患儿存在BCS1L基因突变,可能与Bjornstad综合征发病有关。

喉癌组织Bc1-2和Bax基因蛋白表达及其临床相关性研究

目的 探讨喉癌组织Bc1 2和Bax基因蛋白表达与喉癌发生、发展的关系。方法 采用免疫组化SP法测定 5例正常人声带组织和 73例喉癌组织标本中Bc1 2和Bax基因蛋白表达。结果 喉癌组织中Bc1 2基因蛋白表达阳性检出率 45 .2 % ,喉癌组织中Bax基因蛋白达阳性检出率 6 0 .3% ,与正常人相比 ,均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。喉癌组织中Bc1 2及Bax基因蛋白的表达呈明显的负相关关系 ,r值 - 0 .71,P <0 .0 5。结论 喉癌组织中Bc1 2和Bax基因蛋白表达的失调可能与喉癌的发生、发展有关。

B型非何杰金淋巴瘤中bc1－2基因的重排

本文用两种１８染色体上特异性ＤＮＡ片段的探针和１４号染色体上免疫球旦白重链结合区探针，用Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ法对２５例Ｂ型非何杰金淋巴瘤病例（Ｂ－ＮＨＬ）进行ｂｃ１－２基因重排的检测，并作了免疫表型和染色体核型检查。发现５６％（１０／１８例）的滤泡型ＮＨＬ和１／７例弥漫型ＮＨＬ病人出现了ｂｃ１－２基因重排。９１％（１０／１１例）重排病例的ｂｃｌ－２基因片段与重排的Ｉｇ重链结合区的片段一起移动。证实了ｔ（１４；１８）染色体易位。结果表明，ｂｃ１－２基因重排与滤泡型ＮＨＬ的发病有密切关系。

bc1－2与淋巴细胞程序性死亡

本文主要介绍了ｂｃ１－２原癌基因的基因结构、表达产物的特性及其抑制淋巴细胞程序性死亡的作用。ｂｃ１－２基因在Ｔ和Ｂ淋巴细胞发育和成熟中的作用反映了其正常的生物功能。重要的是ｂｃ１－２基因不引起淋巴细胞的分化而延长细胞的存活期。

糖尿病大鼠脑缺血再灌注后脑组织细胞凋亡与Bax、Bcl-2及p53基因表达

目的观察糖尿病性高血糖大鼠脑缺血再灌注后脑组织细胞凋亡与Bax、Bcl-2和p53表达情况。方法将Wistar大鼠随机分成正常对照组、假手术组、正常血糖脑缺血再灌注组(NIR)和糖尿病性高血糖脑缺血再灌注组(DIR),采用链脲佐菌素腹腔注射制作糖尿病模型、线栓法制作大脑中动脉缺血再灌注模型,应用TUNEL法和免疫组化法分别检测细胞凋亡和Bax、Bcl-2及p53表达。结果与假手术组和正常对照组比较,NIR组凋亡细胞百分率和Bax、Bcl-2、p53表达明显增加(P均<0.01);与NIR组比较,DIR组凋亡细胞百分率和Bax、p53表达明显增加,Bcl-2表达明显降低(P均<0.01)。结论糖尿病性高血糖大鼠脑缺血再灌注后梗死周边区细胞凋亡增加是高血糖加重缺血性脑损伤的机制之一;Bax和p53表达上调、Bcl-2表达下调参与了糖尿病大鼠脑缺血再灌注后细胞凋亡的调控。

BCS1L基因新突变位点引发的新生儿发育迟缓与乳酸酸中毒

本研究旨在分析一家系两例发育迟缓、乳酸酸中毒新生儿的临床特征及基因变异特点,探讨基因变异与临床特征的关系。回顾性分析2019年5月和2021年12月于重庆医科大学附属儿童医院新生儿科病房就诊的两例发育迟缓、乳酸酸中毒新生儿的临床特征;利用全外显子测序检测患儿基因变异;对BCS1L蛋白进行同源建模,分析模型蛋白的结构和功能改变;分析基因变异与临床表型的相关性。结果显示,该家系两例患儿的主要临床特征为线粒体呼吸链复合体Ⅲ缺陷症表现,包括早产、发育迟缓、呼吸衰竭、乳酸酸中毒、胆汁淤积、肝功能异常、肾小管病变、凝血功能异常、贫血、低血糖、肌张力低下和早期死亡。全外显子测序发现BCS1L基因c.486_488delGGA(p.E163del)新型缺失变异和c.992C>T(p.T331I)新型错义变异,蛋白同源建模结构分析结果显示复合杂合变异对蛋白功能影响较大。综上,BCS1L基因新的变异位点c.992C>T(p.T331I)为“可能致病”变异,复合杂合变异与线粒体呼吸链复合体Ⅲ缺陷症疾病表型密切相关。

阻断急性髓性白血病细胞Bcl—2表达并诱导其凋亡的研究

目的 探讨特异Bcl—2反义脱氧寡核苷酸(ASON)在诱导急性髓性白血病(AML)细胞凋亡中的作用。方法 37例AML细胞及6例正常骨髓细胞分别与特异ASON及有义脱氧寡核苷酸(SON)共培养,再用Northern blot检测Bcl—2 mR-NA并定量检测凋亡细胞百分数。结果 AML细胞Bcl—2表达量高于正常骨髓细胞。特异ASON能下调AML细胞Bcl—2mRNA,并诱导其凋亡,而对正常骨髓细胞影响不大。结论 Bcl—2 ASON在治疗AML中有着一定的应用前景。

子宫内膜癌Cyclin D1 bcl-2基因表达及其与ⅠⅡ型关系的研究

目的 探讨CyclinD1、bcl- 2与子宫内膜癌发生、发展的关系以及与雌激素在致癌过程中有无内在联系。方法 采用免疫组化法检测了 2 5例正常子宫内膜、2 6例子宫内膜增生、6 9例子宫内膜癌组织中CyclinD1及bcl- 2的表达情况。结果 增生期子宫内膜CyclinD1的表达明显高于分泌期 ,CyclinD1的表达与子宫内膜癌的临床病理特征无关 ,但在Ⅰ型中的表达明显高于Ⅱ型。bcl- 2在正常增生期、复合增生、非典型增生、癌组织中依次下降 ,bcl - 2表达与子宫内膜癌的临床病理特征无关 ,与分型也无关。结论 CyclinD1可能是雌激素致癌的部分分子途径。bcl- 2可能与子宫内膜癌的发生早期有关。

Bjornstad综合征致病BCS1L基因的新发突变位点研究

目的检测1例以先天性头发扭曲和感音性听力丧失为主要表现的Bjornstad综合征(扭曲发综合征)患者的致病基因BCS1L的突变情况。方法收集患者临床资料,提取患者及其父母的外周血DNA,PCR扩增BCS1L基因全部外显子及侧翼序列并进行Sanger测序,测序结果与正常序列进行比对;取患者头发进行扫描电镜检査。结果患者BCS1L基因存在2处突变:①第4号外显子上存在杂合无义突变,即第144位密码子CGA→TGA,导致其编码氨基酸序列由精氨酸变为终止密码子(p.R144*),此为BCS1L基因突变导致Bjornstad综合征新发现的致病突变位点,属国际首例;②第8号外显子上存在杂合错义突变,即第306位密码子CGC→CAC,导致其编码氨基酸序列由精氨酸变为组氨酸(p.R306H)。患者母亲仅在BCS1L基因第4号外显子发生c.430 C>T杂合突变(P.R144*),患者父亲仅在BCS1L基因第8号外显子发生c.917 G>A杂合突变(p.R306H)。扫描电镜显示,患者发干以不规则的间隔出现扁平、沟槽和沿长轴的扭曲。结论首次报道BCS1L基因第144位密码子CGA-TGA导致的编码终止为该基因突变导致Bjornstad综合征的新发突变位点,BCS1L基因复合杂合突变与患者的临床表现相关,基因检测有助于Bjornstad综合征的诊断。

扶正解毒通络方对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制研究

目的:探讨扶正解毒通络方对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:MTT法观察细胞增殖能力; RT-PCR检测细胞内Bax和Bcl-2 mRNA水平;免疫印迹(Western blot)检测细胞中Bax、Bcl-2、活化的caspase-3、SIRT3、P53及Fas蛋白水平。结果:扶正解毒通络方能明显诱导减少HepG2细胞内Bcl-2基因转录,增加Bax基因转录;扶正解毒通络方能明显诱导减少HepG2胞内Bcl-2蛋白表达,增加Bax、活化的caspase-3、SIRT3、P53及Fas蛋白表达。结论:与正常对照组比较,正常血清组人肝癌细胞HepG2细胞内Bax、Bcl-2、活化的caspase-3、基因及蛋白表达水平无明显改变;与正常血清组比较,扶正解毒通络方低、中和高剂量含药血清和阳性对照组HepG2细胞内Bcl-2基因转录减少,蛋白表达减少; Bax基因转录增加,蛋白表达增加,活化的caspase-3蛋白表达增加。

Bcl-2和Bax蛋白在慢性病毒性肝炎肝组织中的表达

目的研究细胞凋亡相关的Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ蛋白在慢性病毒性肝炎（ＣＨ）肝组织中表达的情况与该病发生发展的关系。方法对３５例不同病变程度的ＣＨ肝组织用免疫组化法检测Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ的表达及定位。结果Ｂｃ１－２和Ｂａｘ分布基本一致，轻、中度ＣＨ主要见于碎屑样坏死（ＰＮ）区中的单个核细胞（ＭＮ），邻近ＰＮ区边缘的肝细胞浆中也有强阳性表达。ＨＥ染色观察，这些Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ阳性肝细胞多呈重度水样变性或嗜酸性变。在重度ＣＨ肝组织中Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ阳性的ＭＮ主要分布于重度ＰＮ区和桥接坏死区，周围部分肝细胞Ｂａｘ阳性，而Ｂｃｌ－２为阴性。在慢性重型肝炎，Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ除在亚大块肝细胞坏死区浸润的ＭＮ胞浆内表达外，残存肝细胞亦呈阳性表达。结论Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ在肝组织中的表达可能不仅与ＣＨ的细胞凋亡有密切关系。