非小细胞肺癌和肺结核中血清BCAR1水平的临床意义

目的:探讨血清BCARl水平在非小细胞肺癌和肺结核中的临床意义。方法:采用酶联免疫试剂方法(ElISA)检测2009年3月至2010年5月期间65例非小细胞肺癌(NSCLC),26例肺良性肿瘤(炎性假瘤15例、错构瘤7例、纤维瘤4例),30例肺结核患者(结核瘤17例,空洞型肺结核13例),40例正常人血清BCARl水平。结果:NSCLC组血清BCAR1水平高于肺良性肿瘤组和正常对照组(P<0.001),而与肺结核组无显著差异(P>0.05);血清BCARl水平与性别、年龄和淋巴结转移无关(P>0.05);与鳞癌和腺癌病理类型无关(P>0.05),支气管肺泡癌BCAR1血清水平低于其它类型NSCLC(P=0.02);BCAR1血清水平随着临床分期增加有逐渐递增的趋势;BCAR1血清水平在切除肿瘤后其血清水平降低;肺结核组BCAR1血清水平高于正常对照组和肺良性肿瘤组(P<0.001),与结核病变的直径呈正相关(r=0.92,P<0.001),切除结核病变后其血清水平下降,空洞型肺结核血清中BCAR1水平高于结核瘤(P<0.001);肺良性肿瘤组和正常对照组血清BCARl水平无显著性差异(P>0.05)。结论:血清BCAR1可以作为NSCLC和肺结核诊断、了解病情进展和判断治疗效果新指标。

乳腺癌组织中BCAR1 p130Cas蛋白的表达及其临床意义

目的：探讨BCAR1／p130Cas蛋白在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌内分泌治疗耐药及预后的关系。方法：选择ER阳性且经过规范化内分泌治疗和随访5年资料完整的乳腺癌患者67例，应用免疫组化方法检测其BCAR1／p130Cas蛋白表达情况，回顾性分析BCAR1／p130Cas蛋白表达与乳腺癌的临床生物学特征及预后的关系。结果：在发生局部复发或远位转移的29例患者中，25例呈现BCAR1／p130Cas蛋白高表达，占86．2％，无复发转移的38例中，BCAR1／p130Cas蛋白高表达仅为21．1％，两组差异显著（χ^2=27．935，P=0．000）；乳腺癌组织中BCAR1／p130Cas蛋白表达与高组织学分级（r=0．270，P=0．027）、C—erbB-2蛋白高表达（r=0．492，P=0．000）以及绝经状况（χ^2=13．77．P=0．003）呈现正相关；与肿瘤大小（P=0．548）、病理类型（P=0．177）、淋巴结状况（P=0．720）、TNM分期（P=0．524）无统计学差异（P〉0．05）。结论：BCAR1／p130Cas蛋白的表达水平与肿瘤的侵袭性显著相关，BCAR1／p130Cas蛋白的表达水平越高肿瘤的恶性程度越高，所以BCAR1／p130Cas蛋白高表达患者的复发、转移风险增加；BCAR1／p130CaS蛋白高表达与三苯氧胺治疗耐药密切相关；芳香化酶抑制剂是绝经后ER阳性乳腺癌患者内分泌治疗的最佳选择。BCAR1／p130Cas蛋白的表达水平和腋淋巴结转移状况、肿瘤大小、病理类型、TNM分期无关。因此认为，BCAR1／p130Cas蛋白可以作为独立判定乳腺癌预后的一个重要参数，为监测乳腺癌的转移提供了一个有价值的指标，有助于乳腺癌复发转移的诊断及治疗。

BCAR1在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的探讨BCAR1在非小细胞肺癌中的表达及意义。方法应用免疫组化方法检测BCAR1在135例非小细胞肺癌和30例正常肺组织中的表达,并分析其表达与肿瘤临床病理因素及预后的相关性。结果 BCAR1在非小细胞肺癌中高表达,在正常肺组织中低表达(P<0.001);在非小细胞肺癌中,BCAR1的高表达与患者的高淋巴结转移及TNM分期正相关(P=0.006和P=0.025);BCAR1高表达的患者在单因素和多因素分析中均表现出更差的预后(P=0.001和P=0.002)。结论BCAR1促进非小细胞肺癌的发生发展,并与其差的预后相关。

BCAR1/P130CAS与肿瘤相关机制研究进展

CAS（Crk-associated substrate）蛋白家族作为细胞信号网络连接位点之一,过去10多年被相继发现,目前明确的有乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白（breast cancer anti-estrogen resist-ance 1,BCAR1）,神经元细胞表达发育下调基因9（NEDD9）,胚胎FYN相关底物（EFS）,CAS蛋白4（CASS4）,其中研究最广泛的是BCAR1。BCAR1又名P130CAS。最初由Reyn-olds等[2]在v-Crk和v-Src转化鸡胚胎细胞中发现,

siRNA抑制BCAR1基因对乳腺癌细胞抗雌激素药物耐药的影响

目的探讨抑制BCAR1基因对乳腺癌细胞抗雌激素药物三苯氧胺(tamoxifen,TAM)耐药的影响及作用机制。方法将人类雌激素依赖型乳腺癌细胞株ZR-75-1分为雌二醇(E2)+TAM+空白载体组、E2+TAM+shRNA-β-actin组和E2+TAM+shRNA-BCAR1组。采用RT-PCR和W estern b lot检测各组的抑制效果;4-甲基偶氮四唑蓝(MTT)细胞增殖试验观察TAM对各组乳腺癌细胞生长的影响;流式细胞仪DNA定量法观察TAM作用后各组乳腺癌细胞周期的变化。结果shRNA-BCAR1在mRNA水平和蛋白水平均明显抑制BCAR1基因的表达。BCAR1表达被抑制后,癌细胞对抗雌激素药物TAM的耐药性明显降低,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论BCAR1基因高表达与乳腺癌细胞对抗雌激素药物TAM耐药密切相关。

抑制BCAR1降低肺癌细胞系A549 p-P38表达

目的探讨抑制乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白(BCAR1)表达对肺癌细胞系A549 P38和p-P38表达的影响。方法培养正常A549细胞(对照组)、慢病毒BCAR1基因干扰A549细胞(干扰组)和慢病毒阴性对照A549细胞(阴性对照组),用Western blot检测细胞P38和p-P38表达水平,用克隆形成实验、流式细胞计量术、Transwell实验和划痕实验检测细胞的细胞克隆、细胞周期、细胞侵袭和迁移能力。结果干扰组p-P38表达显著低于其他两组(P<0.05);干扰组细胞G1期比例显著高于其他两组(P<0.05);干扰组细胞增殖、侵袭和迁移能力低于其他两组(P<0.05)。结论抑制BCAR1表达可下调p-P38表达,减弱肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭能力。

胸腔积液中BCAR1检测的临床意义研究

目的探讨BCAR1表达对癌性和结核性胸腔积液鉴别诊断价值。方法收集结核性胸水患者40例和肺癌胸腔积液患者40例,另取我院中心健康体检者30例作为对照。BCAR1表达的测定采用ELISA法。结果肺癌患者胸腔积液中BCAR1表达水平为(71.52±22.61)μg/L,显著高于肺结核胸腔积液中BCAR1的[(13.67±5.24)μg/L](P<0.01)。对照组、肺结核组和肺癌组血液中BCAR1的表达水平分别为(12.52±4.18)、(14.21±6.55)和(84.63±30.27)μg/L,统计学分析显示:肺癌组血液中BCAR1的表达水平显著高于肺结核患者和健康对照人群(P<0.01),而肺结核组与对照组比较则无显著性差异(P>0.05)。相关性分析显示胸腔积液中BCAR1的表达与血液中BCAR1的表达呈显著正相关(γ=0.637,P<0.01)。结论肺癌患者胸水中存在BCAR1蛋白的异常表达,BCAR1蛋白的高表达有可能作为胸水良恶性鉴别的一个有效的分子标记。

BCAR1促进肺腺癌细胞增殖、生长及其互作蛋白网络的研究

目的本研究旨在探索乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白1(breast cancer anti-estrogen resistance 1,BCAR1,p130cas)在肺癌发生发展中的生物功能与互作蛋白网络。方法(1)免疫印迹实验(western blot)研究15对肺癌及癌旁组织中BCAR1表达情况,免疫组化(immunohistochemistry,IHC)分析54例早期肺腺癌组织芯片中BCAR1与预后的关系,并通过TCGA数据库进一步验证。(2)通过CRISPR/Cas9分别构建人肺腺癌H1975,H1299 BCAR1敲除(knock out,KO)细胞株,通过调取cDNA文库构建A549过表达(overexpression,OE)细胞株,四唑盐比色实验(MTT)检测细胞增殖能力、平板克隆形成实验检测细胞存活能力。(3)免疫共沉淀质谱分析(immunoprecipitation mass spectrometry,IP-MS)联合生信分析找出工具细胞即293T细胞中BCAR1的互作蛋白网络及可能的关键节点。(4)western blot验证细胞系BCAR1-KO或BCAR1-OE后关键节点基因的表达变化,并在肺癌组织芯片中予以验证基因表达的相关性。结果(1)western blot:BCAR1在肺腺癌组织较癌旁组织显著高表达(P<0.05);IHC:BCAR1高表达的早期肺癌患者预后差(HR=5.026,P=0.001),TCGA:BCAR1高表达肺腺癌患者预后差(HR=1.5,P=0.0087)。(2)成功构建BCAR1-KO与BCAR1-OE稳定细胞株,细胞增殖能力及细胞克隆形成率均随BCAR1敲除降低,过表达后升高。(3)IP-MS联合生信分析:哺乳动物酵母同源致命因子Sec13蛋白8(MLST8)可能作为BCAR1的关键互作蛋白;(4)相比癌旁组织,MLST8在癌组织中高表达(P<0.05),并与BCAR1表达显著正相关(R=0.4221,P=0.0015)。细胞系中MLST8的表达在BCAR1敲除后降低,过表达后升高。结论BCAR1在肺癌中发挥重要的促瘤效应。MLST8表达与BCAR1显著相关,可能是BCAR1的关键下游蛋白。

子宫内膜异位症患者异位及在位内膜组织中BCAR1的表达及其意义

目的观察子宫内膜异位症(EMS)患者异位和在位内膜组织中抗雌激素药物耐药性基因1(BCAR1)表达,并分析其临床意义。方法选取2016年2月至2016年12月在浙江省乐清市人民医院接受治疗的100例EMS患者为研究对象(EMS组),同时选取同期在浙江省乐清市人民医院接受体检筛查的100例健康成年人作为对照组。观察两组内膜组织中BCAR1的表达和血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、癌抗原125(CA125)水平,比较EMS患者异位内膜及在位内膜组织中BCAR1的差异,分析子宫内膜异位症患者BCAR1表达与VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平的相关性。结果 EMS组患者组织中的BCAR1阳性表达率为85.00%,明显高于对照组(χ~2=106.676,P<0.001);EMS组患者血清VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平分别为228.72±12.35ng/L、46.33±5.96pg/mL、165.82±13.02ng/L、332.46±12.13U/mL,明显高于对照组(t值分别为-39.764、-41.339、-24.083、-97.792,均P<0.001);EMS患者异位内膜中BCAR1阳性表达率为95.0%,明显高于在位内膜中BCAR1阳性表达率(χ~2=15.686,P<0.001);子宫内膜异位症患者BCAR1阳性表达率与血清VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平明显正相关(r值分别为0.587、0.612、0.542、0.598,均P<0.05)。结论 EMS患者的异位内膜组织中BCAR1阳性表达率较高,且与患者血清VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平正相关,可作为临床监测的重要指标。

BCAR1基因与乳腺癌抗雌激素药物耐药的相关研究

乳腺癌抗雌激素药物耐药是导致雌激素受体阳性患者内分泌治疗失败的重要原因之一。BCAR1／p130Cas蛋白能在活体外诱导雌激素依赖性乳腺癌细胞对抗雌激素药物产生耐药，是内分泌治疗的重要耐药因子，其诱导机制尚不能确定。但研究表明检测BCAR1／p130Cas蛋白表达水平可以提示乳腺癌临床内分泌治疗的效果。

BCAR1在前列腺癌根治标本中的表达及其临床病理意义

[目的]探讨乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白BCAR1在前列腺癌根治标本中的表达及其临床意义。[方法]应用免疫组化法检测BCAR1在97例前列腺癌根治标本中的表达情况,并分析其在肿瘤组织中的表达与各临床病理因素及预后的相关性。[结果]BCAR1在前列腺高级别上皮内瘤变(HGPIN)和前列腺癌组织中的表达显著高于癌旁前列腺组织(P<0.01)。并且BCAR1在癌组织中高表达与高Gleason评分之间存在显著相关性(χ2=6.987,P=0.008)。但BCAR1的表达与血清PSA水平、肿瘤体积、TNM分期及生物学复发之间均无显著相关性(P>0.05)。[结论 ]BCAR1的表达与前列腺癌的分化程度呈负相关,BCAR1可能在前列腺癌的发生过程中发挥作用。

人乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白1基因siRNA慢病毒载体的构建与鉴定

目的构建人乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白1(Breast cancer anti-estrogen resistance 1,BCAR1)基因siRNA慢病毒载体,并进行鉴定。方法针对人BCAR1基因靶序列设计并合成4条siRNA序列(PLVT350、PLVT351、PLVT352、PLVT353)及1条阴性对照序列(PLVT4),分别退火后,插入经AgeⅠ和EcoRⅠ双酶切的慢病毒载体pMagic 4.1中,连接产物转化感受态大肠杆菌DH5α,经PCR和DNA测序筛选阳性克隆,提取重组干扰质粒,与辅助质粒共同感染293T细胞,进行慢病毒包装,浓缩后,采用梯度稀释法测定病毒滴度。将重组慢病毒感染A549细胞,荧光显微镜下观察感染效率,实时荧光定量PCR检测干扰效率,筛选干扰效果最好的重组慢病毒感染肺癌A549细胞,Western blot检测BCAR1蛋白的表达水平。结果成功构建了4种人BCAR1基因慢病毒干扰质粒,PLVT350、PLVT351、PLVT352和PLVT353的病毒滴度分别为3.45×108、2.13×108、3.01×108和2.47×108TU/ml;慢病毒感染3 d后,A549细胞的感染效率均达90%以上;除PLVT350外,其他3个均为有效靶点,PLVT351、PLVT352和PLVT353的沉默率分别为82%、73%和82%,BCAR1基因的表达量显著低于未转染和PLVT4组A549细胞(P<0.001);PLVT351感染的A549细胞中BCAR1蛋白的表达水平明显低于未感染和PLVT4组A549细胞(P<0.01)。结论成功构建了人BCAR1基因siRNA慢病毒载体,并建立了稳定表达的A549细胞株,为进一步探索BCAR1基因在肺癌中的相关功能及其分子机制奠定了基础。