基于BCG-MCP的四代微光像增强技术

介绍了Ⅲ代微光像管中的防离子反馈膜技术 ,阐述了美国Litton公司基于BCG MCP的Ⅳ代像管的近期发展及应用概况 ,给出了实际应用中的对比情况 ,指出了BCG MCP。

单核细胞趋化因子及钟声蛋白样受体在卡介苗灌注膀胱局部抗肿瘤免疫反应中的表达

目的:观察行卡介苗(BCG)膀胱灌注治疗后,膀胱肿瘤中MCP-1,钟声蛋白样受体(TLR4,TLR2),以及核转录因子кB(NFкB)的表达,探讨MCP-1在BCG抗肿瘤中的作用及其可能的机制。方法:分别提取标本组织中的总RNA,用MCP-1,TLR4,TLR2,NFкB的寡核苷酸引物进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳后,用凝胶成像系统检测原发膀胱移行细胞癌标本、正常膀胱黏膜以及BCG灌注治疗后膀胱移行细胞癌复发标本中MCP-1,TLR4,TLR2,NFкB mRNA的表达。结果:在TURBT标本中,经膀胱BCG灌注治疗后,复发的膀胱移行细胞癌标本中MCP-1,TLR4,TLR2,NFкB mRNA表达增强。结论:经BCG灌注治疗后,其肿瘤标本中MCP-1,TLR4,TLR2,NFкB mRNA的表达增强,提示BCG的抗瘤机制可能包括TLR4,TLR2,诱导NFкB信号系统的激活导致肿瘤局部产生MCP-1的升高,进而起到抗肿瘤作用。

卡介苗穿梭表达质粒pMS MCP-1的构建与鉴定

目的:构建分泌性表达单核细胞趋化因子-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)的重组卡介苗。方法:分别以卡介苗(BCG)和MCP-1cDNA为模板,通过PCR扩增得到120bp的BCG Ag85B信号肽序列和300bp的MCP-1基因序列。将BCG Ag85B信号肽序列插入大肠杆菌-卡介苗穿梭质粒pMV261,得到重组质粒pMS。再将MCP-1基因序列克隆至pMS中,得到重组质粒pMS MCP-1。结果:质粒pMS MCP-1用双酶切和PCR扩增及测序鉴定证实,克隆基因BCG Ag85B和MCP-1正确插入载体pMV261。结论:重组质粒pMS MCP-1可望在BCG中分泌性表达细胞因子MCP-1,从而协同加强对肿瘤的杀伤作用,该质粒的成功构建为改造卡介苗、发展新型抗膀胱肿瘤疫苗奠定了基础。

MF59/hBCG复合佐剂促进巨噬细胞募集和分泌MCP-1

目的初步探讨MF59/h BCG复合佐剂增强重组结核分枝杆菌蛋白（TP）免疫反应的机制。方法 MF59、h BCG、TP及其不同配伍分别体外刺激RAW264.7细胞,刺激培养24 h后收集上清,ELISA检测细胞培养上清中TNF-α、MCP-1和IL-1β含量。MF59、h BCG、TP及其配伍分别于小鼠左后腿皮下或肌肉注射,注射后24、48或72 h取注射部位的肌肉组织剪碎、PBS冲洗,采用胶原蛋白水解酶消化法和机械法结合将肌肉组织解离为单个细胞;荧光抗体标记细胞,流式细胞术分析巨噬细胞含量。结果任何免疫原刺激RAW264.7细胞,其培养上清均未检测到IL-1β;MF59和h BCG均能刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α和MCP-1,且TNF-α分泌水平呈剂量依赖;而TP却不能刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α和MCP-1。1∶100 MF59/h BCG（h BCG终质量浓度为25、50μg/ml）刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α和MCP-1水平均显著高于25、50μg/ml h BCG和空白对照（所有P〈0.01）;1∶250MF59/h BCG（h BCG终质量浓度为25、50μg/ml）刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α和MCP-1水平均显著高于25μg/ml h BCG和空白对照（P〈0.05）。1∶250 MF59/TP（TP终质量浓度为5、10μg/ml）刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α水平显著低于1∶100 MF59/TP（TP终质量浓度为5、10μg/ml）（P〈0.01）。同一免疫原皮下注射和肌肉注射后24 h,其注射部位肌肉组织募集的巨噬细胞含量比较,差异均无统计学差异（P〉0.05）;MF59、50μg h BCG、10μg/ml TP、MF59/50μg h BCG和MF59/10μg TP肌肉注射后24 h,均未见明显的巨噬细胞募集到注射部位肌肉组织,而它们分别皮下注射（除50μg h BCG外）的注射部位肌肉组织募集到不同数量的巨噬细胞;10μg TP皮下注射及MF59/50μg h BCG/10μg TP皮下注射与肌肉注射后24 h,注射部位肌肉组织中巨噬细胞含量均显著高于PBS对照（P〈0.05）。50μg h BCG皮下注射后72 h和250μg h BCG皮下注射后24 h,其注射部位肌肉组织中巨噬细胞含量最高;但与对照PBS比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。MF59/50μg h BCG皮下注射后48 h,注射部位肌肉组织中巨噬细胞含量最高、且显著高于其它所试试验组（MF59、50μg h BCG、250μg h BCG、MF59/250μg h BCG和PBS）（P〈0.05）;MF59/250μg h BCG皮下注射后24~72 h,注射部位肌肉组织中巨噬细胞含量持续保持较高水平,且72 h时巨噬细胞含量显著高于其它所试试验组（MF59、50μg h BCG、250μg h BCG、MF59/50μg h BCG和PBS）（P〈0.05）。结论 MF59和h BCG体外均能刺激巨噬细胞分化因子MCP-1,两者联合具有协同作用,显著增强巨噬细胞募集到注射部位肌肉组织。