胰腺癌细胞对 5 - Fu和吉西它滨获得性耐药后bcl- x_L 和mcl- 1表达的变化(英文)

目的 :探讨胰腺癌细胞对 5 Fu和吉西它滨的获得性耐药后bcl xL 和mcl 1表达的变化。方法 :应用SRB方法检测 5 Fu和吉西它滨对胰腺癌细胞株Panc 1,Mia Paca 2和Capan 1的细胞毒性作用 ,应用Westernblot法来检测bcl xL 和mcl 1的蛋白表达水平。结果 :5 Fu和吉西它滨对 3株胰腺癌细胞均产生了细胞毒性作用 ,5 Fu长期作用后 ,Capan 1细胞IC50 上升了 2 .1倍 (P <0 .0 5 )。吉西它滨长期作用后 ,Capan 1细胞IC50 上升了 1.5倍 (P <0 .0 5 )。 5 Fu或吉西它滨长期作用后 ,产生了获得性耐药的胰腺癌细胞bcl xL 和mcl 1表达水平上调。结论 :5 Fu或吉西它滨长期作用后 ,产生了获得性耐药 ,这种耐药与bcl xL 和mcl 1的过度表达相关。

BCL-x_1和BCL-2在喉鳞状细胞癌细胞中的表达

目的探讨B细胞淋巴瘤 /白血病 2 (B celllymphoma/leukemia 2 ,BCL 2 )基因及B细胞淋巴瘤/白血病 x基因长片段 (B celllymphoma/keukemia x ,long ,BCL x1)在喉鳞状细胞癌细胞中的表达及应用干扰素 α对其表达的影响。方法采用SABC免疫组织化学染色 ,观察比较干扰素治疗 1 0周后喉癌组织( 2 5例 )和未治疗组 ( 2 7例 )喉癌组织中喉鳞状细胞中BCL x1、BCL 2蛋白的表达。结果①治疗组喉癌组织中BCL x1表达OD值为 0 .1 2 ,未治疗组OD值为 0 .2 1 ,两组表达率差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ;② 5 2例喉癌组织中均无BCL 2蛋白表达。结论BCL x1可能在喉癌细胞凋亡中发挥抗凋亡作用 ,干扰素 α可能通过抑制BCL

肝癌组织中Mcl-1和Bax的表达与临床病理及预后的关系

目的研究Mcl-1、Bax在肝细胞癌及癌旁肝组织中表达的关系及临床意义,探讨Mcl-1表达与肝癌组织学分级及预后的关系。方法对48例人肝细胞癌及相应的癌旁肝组织标本,进行免疫组织化学EnVisionTM法检测。结合Mcl-1、Bax的表达情况与肝癌的临床病理、随访资料进行分析。结果肝癌组织中Mcl-1、Bax阳性率分别为60.4%(29/48)、31.3%(15/48),癌旁肝组织Mcl-1、Bax分别为14.5%(7/48)、52.1%(25/48),两者差异具有统计学意义(P<0.05)。肝癌组织中Mcl-1的表达与Edmonson grade分级、肿瘤直径、静脉浸润、肝内外转移有关(P<0.05)。在肝癌中Mcl-1与Bax的表达呈显著负相关(r=-0.373,P=0.009)。肝癌组织中III、IV级组Mcl-1/Bax≥1的比例显著高于I、II级组(P<0.05)。Mcl-1阳性病例的3年生存率显著高于Mcl-1阴性病例(P=0.032)。结论 Mcl-1在肝癌组织中呈高表达,与肝癌的分级、预后关系密切,Mcl-1、Bax在HCC的发生发展过程中起一定作用。

bcl-xl、bcl-2在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中bclxl和bcl2表达情况及其意义。方法采用免疫组化SP法,检测10例正常肺组织,49例NSCLC组织和9例配对淋巴结转移癌组织中的bclxl及bcl2表达强度。结果NSCLC组织中,bclxl表达强度显著高于正常肺组织(P<0.05)。伴淋巴结转移的NSCLC组织bclxl和bcl2表达强度均高于不伴淋巴结转移的NSCLC组织(P<0.01)。NSCLC中bclxl与bcl2表达强度无相关性(P>0.05)。结论bclxl表达增强可能与NSCLC发生有关。bclxl和bcl2表达增强在NSCLC的淋巴结转移方面可能起着重要作用。在NSCLC组织中,bcl-xl与bcl-2表达无相关性。

单核细胞趋化蛋白1对人牙周膜细胞凋亡及凋亡调控蛋白Bax表达的影响

目的探讨单核细胞趋化蛋白1(CCL2)对人牙周膜细胞凋亡和凋亡调控蛋白Bax表达的影响。方法无菌条件下刮取因阻生或正畸需要拔除的牙齿根中1/3的牙周膜组织,采用组织块法进行体外原代培养,免疫荧光化学法检测CCL2的表达,人牙周膜成纤维细胞(HPDLCs)中加入不同浓度(5、10、20和50ng/mL)的趋化因子CCL2,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组织化学染色法测定凋亡调控蛋白Bax的表达。结果 HPDLCs细胞呈CCL2阳性表达。与无血清对照组比较,不同浓度CCL2组的细胞凋亡率和Bax平均灰度值均显著降低(P值均<0.05),且随着CCL2浓度的增大呈下降趋势。结论 CCL2可能通过调节Bax在人HPDLCs中的表达,对抗无血清诱导的细胞凋亡,从而促进牙周膜细胞的生长。

蓝莓联合益生菌通过IL-22调控的JAK1/STAT3/BAX通路改善非酒精性脂肪性肝病的作用机制

目的研究蓝莓联合益生菌通过对IL-22调控的JAK1/STAT3/BAX信号通路的影响,进一步探明其改善非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的作用机制。方法清洁级SD大鼠40只分为正常对照组(CG)、IL-22siRNA阴性对照组(IL-22SI-NC)、IL-22siRNA组(IL-22SI)、IL-22siRNA阴性对照+蓝莓益生菌组(IL-22SI-NC+BPG)、IL-22siRNA+蓝莓益生菌组(IL-22SI+BPG)。正常对照组予100%普通饮食,其余大鼠均采用复合高脂饲料制备脂肪肝模型,同时予IL-22siRNA阴性对照慢病毒及IL-22siRNA慢病毒腹部肝区注射(盲穿),隔日1次,共12周,取肝脏确认造模及siRNA封闭效果后予蓝莓益生菌原液灌胃,同时按上述分组后给予正常饮食,予蓝莓益生菌原液灌胃,共观察8周。多组间比较采用单因素方差分析,进一步比较方差齐时采用SNK法(q检验),方差不齐时用Tamhane法(q'检验)。结果 IL-22SI组与IL-22SI-NC组比较,ALT、AST、TC、TG、LDL均显著升高(P值均<0.01),HDL显著降低(P<0.01),IL-22、JAK1、STAT3的mRNA及蛋白表达均明显减弱(P值均<0.01)、BAX的表达明显升高(P<0.01);与IL-22SI-NC相比,IL-22SI-NC+BPG的ALT、AST、TC、TG、LDL均明显降低(P值均<0.01),HDL明显升高(P<0.01),IL-22、JAK1、STAT3的mRNA及蛋白表达均显著升高(P值均<0.01),BAX的表达显著下降(P<0.01);IL-22SI+BPG较IL-22SI组ALT、AST、TC、TG、LDL均略有降低(P值均<0.05),HDL略有升高(P<0.05),IL-22、JAK1、STAT3的mRNA及蛋白表达均有所增加(P值均<0.05),BAX的表达略有减少(P<0.05)。结论蓝莓联合益生菌能一定程度拮抗IL-22siRNA所加剧的肝细胞脂肪变性,并可以增强IL-22的表达,提示IL-22可能为蓝莓联合益生菌影响NAFLD的关键作用因子。推测蓝莓联合益生菌能增强IL-22表达,激活JAK1/STAT3信号通路,抑制其下游凋亡因子BAX的表达,减少肝细胞凋亡,增强胆固醇代谢,减少脂质沉积,达到改善NAFLD的目的,是NAFLD的一个辅助治疗方案。

血清Omentin-1、Bax和RBP4在非创伤性股骨头坏死病情评估及诊断中的价值

目的探讨血清网膜素(Omentin-1)、Bcl2-相关X蛋白(Bax)、视黄醇结合蛋白4(RBP4)在非创伤性股骨头坏死(NTONFH)病情评估及诊断中的价值。方法采用回顾性研究方法,选取2020年2月至2022年12月徐州医科大学附属医院经影像学检查确诊为NTONFH的患者100例作为病例组,另外选取100名健康体检志愿者作为对照组。检测对比两组患者血清Omentin-1、Bax和RBP4水平。并按照是否存在股骨头塌陷、国际骨循环研究会(ARCO)分期标准、患侧分布进行分层分析NTONFH患者血清Omentin-1、Bax和RBP4水平,确定其与患者病情的关系。通过受试者工作特征(ROC)曲线分析Omentin-1、Bax和RBP4诊断NTONFH的价值。结果病例组患者的血清Bax水平显著高于对照组,血清Omentin-1、RBP4水平均显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。股骨头塌陷患者的血清Bax水平显著高于非股骨头塌陷患者,Omentin-1、RBP4水平均显著低于非股骨头塌陷患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。ARCOⅡ期、Ⅲ期、Ⅳ期患者的血清Bax水平逐渐升高,ARCOⅡ期、Ⅲ期、Ⅳ期患者的血清Omentin-1、RBP4水平逐渐降低,组间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。双侧股骨头坏死患者血清Bax水平显著高于单侧患者,血清Omentin-1、RBP4水平均显著低于单侧患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。Omentin-1诊断股骨头坏死的敏感度为84.66%,特异度为77.20%,曲线下面积(AUC)值为0.872;Bax诊断股骨头坏死的敏感度为90.17%,特异度为83.75%,AUC值为0.780;RBP4诊断股骨头坏死的敏感度为70.57%,特异度为74.95%,AUC值为0.917。结论NTONFH患者Bax水平显著升高,Omentin-1、RBP4水平均显著降低,并且与患者股骨头塌陷与否、患侧分布、ARCO分期有关,在患者病情评估中具有重要参考价值。另外,Omentin-1、Bax、RBP4对NTONFH均有较好的诊断价值。

BI-1蛋白及其相关调控因子在非小细胞肺癌细胞系中的表达研究

目的研究凋亡抑制因子BI-1及其相关调控因子Bcl-2、Bcl-XL在非小细胞肺癌细胞系中的表达差异,分析BI-1与Bcl-2、Bcl-XL的相互作用关系。方法以9种非小细胞肺癌细胞系(NSCLC)为实验材料,采用RT-PCR和Western印迹技术在cDNA和蛋白水平检测3种基因的表达。结果发现BI-1在NSCLC中高表达,Bcl-2表达较低(在A549、PAa、GLC-82和SPC-1-A几乎检测不到),Bcl-XL表达较稳定,且明显高于Bcl-2。结论在NSCLC细胞中,BI-1主要与Bcl-XL形成蛋白复合体作用于凋亡通路。

银杏内酯B诱导人结直肠癌HCT116细胞凋亡的研究

目的探讨银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对人结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法通过制备HCT116裸鼠瘤模型,观察GB对肿瘤生长的影响,并通过体外培养人结直肠癌HCT116细胞,分别加入不同质量浓度GB,与其共孵育72h,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率,Giemsa染色观察细胞形态,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot法检测Bcl-2蛋白(B-cell leukemia/lymphoma 2,Bcl-2)、Bax蛋白(Bcl-2-associated protein x,Bax)和线粒体融合蛋白1(mitofusin 1,Mfn1)的表达。结果GB抑制裸鼠瘤的生长(P<0.05),并显著抑制HCT116细胞的增殖(P<0.01),诱导HCT116细胞发生凋亡。同时,GB能够显著下调HCT116细胞Mfn1蛋白和Bcl-2蛋白的表达水平(P<0.01),并上调Bax蛋白的表达(P<0.05)。结论 GB可能通过抑制Mfn1的表达,调节促凋亡蛋白Bax活性,降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,促进结直肠癌细胞的凋亡。

凋亡和自噬交互调控元件Bax、Bcl-2、Beclin-1在慢性紫外线损伤小鼠模型皮肤角质形成细胞中的表达

目的观察慢性紫外线损伤对小鼠皮肤角质形成细胞凋亡和自噬交互调控元件Bax、Bcl-2、Beclin-1及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase3）的调控效应。方法健康昆明小鼠30只，雌雄各半，鼠龄6—8周，按性别随机分成慢性紫外线损伤组（20只）和对照组（10只），每组雌雄各半，根据性别将小鼠分笼饲养。采用模拟日光紫外线（UVA＋UVB）光源对实验小鼠进行照射，从最小红斑量（UVB0．07J／cm2，UVA0．7J／cmO开始，每周增加0．5个最小红斑量，每日1次，每周照射5d，共9周，UVB总剂量达9．45J／cm2，UVA总剂量达94．5J／cm2。通过组织学观察、特殊化学染色和表皮厚度测量确定皮肤损伤，应用免疫组化法分别对照射前（w0）和实验9周末（w9）Bax、Bcl-2、Beclin-1和caspase3的表达进行检测，表达强度以免疫反应强度分布指数（IRIDI）表示，并与对照组进行比对分析。分别采用配对t检验和Wilcoxon符号秩和检验对各参数进行比较。结果慢性紫外线照射后，小鼠表皮厚度明显增加。肉眼观察、组织学观察和胶原纤维、弹性纤维特殊染色均显示损伤组小鼠皮肤临床表现和组织学改变均与慢性紫外线光损伤的人类皮肤较为吻合。在损伤组，照光前Beclin-1、caspase3、Bax、Bcl-2的表达计分均值分别为0．30、0．25、0．35、0．25，照光后分别为2．70、3．30、3．35、0．25。Beclin-1、caspase3、Bax蛋白表达显著升高，且差异有统计学意义（z值分别为4．034、4．001、3．970，均P〈0．05），Bcl-2蛋白表达变化不明显（z=0，P〉0．05）。对照组小鼠Beclin-1、caspase3、Bax、Bcl-2的均值在wo时和W9时表达差异均无统计学意义（z值分别为0、0．577、0、0．577，均P〉0．05）。结论慢性紫外线损伤对小鼠皮肤角质形成细胞中凋亡和自噬的交互调控元件Beclin-1和Bax具有上调表达的作用，而对Bcl-2表达调控效应不显著。这一系列的调控效应可能参与了凋亡和自噬在慢性紫外线皮肤损伤中的交互调控。

Bcl-xl在乳腺癌中的表达及其临床病理相关性研究

目的探讨凋亡抑制因子Bcl-xl在乳腺癌中的表达及与临床病理特征、雌孕激素受体表达的关系。方法用S-P免疫组织化学技术检测39例浸润性乳腺癌组织、35例癌周组织及30例正常、30例增生乳腺组织中凋亡抑制因子Bcl-xl的表达。结果与癌周组织、增生及正常的乳腺组织相比,乳腺癌组织中Bcl-xl呈过表达(P<0.05);乳腺癌组织中Bcl-xl表达随临床分期的升高而升高(P<0.05),随组织分级的增高而升高(P<0.05);乳腺癌组织中Bcl-xl表达和雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)表达呈负相关(P<0.05);同时也与乳腺癌患者有无腋窝淋巴结转移有关,其在有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组(P<0.05)。结论乳腺癌组织中Bcl-xl表达与肿瘤分期,细胞学分级,有无腋窝淋巴结转移,ER、PR表达有相关性,在乳腺癌的发生发展过程中有不可忽视的作用。

伊班膦酸钠对卵巢切除所致骨质疏松模型大鼠的影响及机制

背景:双膦酸盐类药物是一种新型骨吸收抑制剂,能有效抑制破骨细胞的活性和功能。目的:观察伊班膦酸钠对骨质疏松大鼠髁突软骨中牙本质基质蛋白1、Caspase3及Bcl-2、Bax表达的影响。方法:将36只雌性大鼠随机分组为假手术组、骨质疏松组及伊班膦酸钠组,每组各12只。假手术组术中不切除卵巢,骨质疏松组和伊班膦酸钠组切除双侧卵巢,术后7 d给予伊班膦酸钠组大鼠10μg/kg/次的伊班膦酸钠,每隔7 d腹腔注射1次,90 d后取材。microCT测量各组大鼠骨密度变化;采用甲苯胺蓝染色、TUNEL染色观察髁突软骨变化;免疫组织化学检测牙本质基质蛋白1蛋白表达;Western blot检测Caspase3、Bcl-2、Bax蛋白表达。实验方案经南华医院动物实验伦理委员会批准(批准号为SLXD_201804010)。结果与结论:①与假手术组或伊班膦酸钠组比较,骨质疏松组骨密度值显著降低(P<0.05);②甲苯胺蓝染色结果,伊班膦酸钠组髁突软骨肥大层明显厚于骨质疏松组;与假手术组或伊班膦酸钠组相比,骨质疏松组大鼠髁突软骨及软骨下骨凋亡细胞数均明显上升(P<0.05);③与假手术组比较,骨质疏松组TRAP阳性细胞数增多,而经伊班膦酸钠治疗后TRAP阳性细胞数下降(P<0.05);④骨质疏松组牙本质基质蛋白1蛋白表达较假手术组明显下降,而经伊班膦酸钠治疗后牙本质基质蛋白1蛋白表达上升(P<0.05);⑤与假手术组相比,骨质疏松组Caspase3、Bax表达明显上调,Bcl-2表达下降,而经伊班膦酸钠治疗后Caspase3、Bax表达水平明显下降,Bcl-2表达水平上调;⑥结果说明,伊班膦酸钠能够抑制骨质疏松状态下髁突软骨细胞凋亡及破骨细胞数量,可能与调控Caspase3、Bcl-2、Bax及牙本质基质蛋白1表达有关。

温阳复元方对脑缺血再灌注损伤大鼠的治疗机制

目的:观察温阳复元方对脑缺血再灌注损伤模型大鼠JNK1、Bax表达的影响,探究其相关的作用机制。方法:将32只雄性大鼠随机分为五组,模型组、假手术组给予0.9%氯化钠溶液灌胃,温阳复元方低剂量组、温阳复元方中剂量组、温阳复元方高剂量组分别按1.5、3、6 ml剂量给予温阳复元方灌胃。观察成模后各组大鼠TTC染色及第1、3、7天的神经功能缺陷评分;Nissl染色观测组织病理学;IF和RT-qPCR检测脑组织中JNK1、Bax阳性细胞和mRNA表达。Western blotting检测大鼠脑组织中JNK1、Bax蛋白表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠神经功能缺陷评分较高,差异有统计学意义(P<0.01)。造模后,大鼠脑组织出现明显的白色梗死灶,缺血侧神经元轮廓模糊,部分胞质自溶,颗粒脱失,着色不均匀,胞核碎裂消失,尼氏小体含量明显减少,结构不清。与模型组比较,第1、3、7天温阳复元方中剂量组、温阳复元方高剂量组的神经功能缺陷评分均低,差异有统计学意义(均P<0.05)。与模型组比较,温阳复元方低剂量组、温阳复元方中剂量组、温阳复元方高剂量组JNK1、Bax阳性细胞数和mRNA表达均低,且温阳复元方高剂量组最低,差异有统计学意义(均P<0.05)。与模型组比较,温阳复元方低剂量组、温阳复元方中剂量组、温阳复元方高剂量组p-JNK1、Bax、p-Bax蛋白表达均低,且温阳复元方高剂量组最低,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:脑缺血再灌注损伤可能与大脑组织中的JNK1、Bax蛋白增多有关,温阳复元方通过抑制JNK1、Bax蛋白活化,减少神经细胞凋亡,延缓疾病进展,且以高剂量效果较好。

电针足三里、内关穴抑制mTOR信号通路缓解大鼠脑缺血损伤作用的研究

目的探讨电针(EA)刺激足三里、内关穴对脑缺血大鼠的影响及对mTOR信号通路的调控作用。方法将75只大鼠按随机数字表法分为假手术(Sham)组、大脑中动脉阻塞(MCAO)模型3 d组、EA干预3 d组、MCAO模型7 d组、EA干预7 d组,每组15只。除Sham组外,其余组采用Longa线栓法构建永久性MCAO大鼠模型,EA干预组术后每日治疗内关和足三里穴20 min。于相应时间点对各组行神经功能缺损评分,采用2,3,5-三苯基四氮唑(TTC)染色分析脑梗死体积,HE和尼氏染色评估脑缺血后病理改变,Western blot法检测梗死侧大脑皮层中雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关因子蛋白激酶B(AKT)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、总mTOR蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测梗死侧大脑皮层中LC3B、Beclin-1和B淋巴细胞瘤-2相关蛋白X(Bax)mRNA的表达。结果与Sham组相比,MCAO模型组各时间点神经功能缺损评分升高(P<0.05),大脑皮层区出现大片坏死及炎性浸润,大量神经元坏死,细胞排列紊乱,完整神经元数量显著减少(P<0.05),LC3B、Beclin-1 mRNA表达显著降低(P<0.05),MCAO模型7 d组的Bax mRNA表达显著增加(P<0.05),并且mTOR磷酸化水平(p-mTOR/t-mTOR)显著高于MCAO模型3 d组(P<0.05)。与MCAO模型组相比,EA干预7 d组大鼠神经功能缺损评分降低,EA干预3 d组和7 d组脑梗死面积百分比均明显降低(P<0.05),大脑皮层区坏死灶显著减小,炎性浸润改善,细胞排列不规律,完整神经元数量显著增加(P<0.05)。与MCAO模型7 d组相比,EA干预7 d组LC3B、Beclin-1 mRNA表达显著增加,Bax mRNA表达显著降低,p-mTOR/t-mTOR水平显著降低(均P<0.05)。AKT蛋白在各组中表达无明显差异。结论EA刺激足三里、内关穴对脑缺血性损伤具有神经保护作用,并诱导自噬发生,抑制凋亡反应,其机制可能与抑制mTOR信号通路活化有关。

c-Jun氨基端激酶通路抑制剂SP600125对大鼠脑缺血再灌注后自噬的影响

目的研究c-Jun氨基端激酶(JNK)特异性抑制SP600125对大鼠脑缺血再灌注后自噬性蛋白Beclin1、髓样细胞白血病基因-1(Mcl-1)蛋白和B淋巴瘤-2基因相关X(Bax)蛋白表达的影响。方法按照体重将SD大鼠随机分为3组,每组10只:假手术组、模型组和实验组。模型组和实验组均采用线拴法制作SD大鼠大脑中动脉阻塞再灌注(MCAO)模型,脑缺血1 h再灌注72 h。造模前,实验组先向大鼠侧脑室内注射3μg·μL^(-1)SP600125溶液10μL,1 h后进行MCAO制模。以组织免疫荧光染色方法测定MCAO后JNK与Beclin1的表达;以免疫印迹法测定MCAO后JNK、Beclin1、Mcl-1和Bax蛋白表达。结果给药后,假手术组、模型组、实验组的JNK条带光密度值分别是0.11±0.05,0.83±0.03,0.56±0.04;这3组的Beclin1条带光密度值分别为0.14±0.04,1.77±0.05,0.86±0.05;这3组的Mcl-1条带光密度值分别为0.17±0.03,0.79±0.04,1.46±0.05;这3组的Bax条带光密度值分别为0.26±0.05,1.15±0.06,0.47±0.04。模型组与假手术组比较,JNK、Beclin1、Mcl-1和Bax值均明显增高,差异均有统计学意义(均P<0.01);实验组与模型组比较,JNK、Beclin1和Bax值均明显下降而Mcl-1值明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论通过抑制JNK可下调脑缺血再灌注后Bax与Beclin1的表达、上调Mcl-1蛋白表达,推测JNK可能参与调节缺血再灌注后神经元的自噬。

沙眼衣原体pORF5质粒蛋白通过HMGB1抑制细胞凋亡机制的初步研究

目的探讨pORF5质粒蛋白抗凋亡分子机制,为进一步阐明沙眼衣原体致病机制提供实验依据。方法将HeLa细胞分为两组,一组用凋亡诱导剂碳酰氰基-对-氯苯腙(CCCP)刺激30 min,另一组经pORF5质粒蛋白预处理18 h后,再用CCCP刺激30 min。然后,Western印迹检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和胱天蛋白酶3(caspase-3)的表达水平;JC-1荧光探针检测HeLa细胞线粒体膜电位变化;间接免疫荧光观察细胞色素c释放情况。为了分析高迁移率族蛋白1(HMGB1)是否参与pORF5质粒蛋白的抗凋亡作用,分别用HMGB1 shRNA和对照RNA稳定转染HeLa细胞,再用pORF5质粒蛋白与CCCP共刺激两种细胞后,测定Bcl-2、Bax和活化的caspase-3蛋白的表达以及细胞色素c的释放情况。两组间比较采用配对样本t检验。结果pORF5质粒蛋白能拮抗CCCP诱导的线粒体膜电位的下降,CCCP单独处理组Hela细胞红/绿荧光强度比率为0.4 ± 0.1,显著低于pORF5与CCCP共处理组(1.7 ± 0.3,t = 6.95,P < 0.01)。与对照组相比,pORF5与CCCP共处理组HeLa细胞Bcl-2蛋白表达水平增加(5.3 ± 0.6)倍(t = 8.62,P < 0.01),而Bax和活化的caspase-3平均表达水平分别降低79%± 10%(t = 9.23,P < 0.01)和75%± 8%(t = 4.26,P < 0.05)。与对照RNA转染组相比,HMGB1 shRNA转染组HeLa细胞线粒体膜电位下降(t = 11.23,P < 0.01),细胞色素c释放增加,Bcl-2的表达水平降低(t = 7.19,P < 0.05),而Bax的表达水平增加(t = 13.06,P < 0.01)。结论沙眼衣原体pORF5质粒蛋白通过HMGB1阻断线粒体凋亡途径发挥抗凋亡作用。