5-脱氧杂氮胞苷对HepG2肝癌细胞恶性表型及caspase-3和bcl-2表达的影响

目的 观察5-脱氧杂氮胞苷(5-aza-CdR)对HepG2细胞株生长抑制和凋亡的影响。方法 采用四甲基偶氮唑盐 (MTT)法检测5-aza-CdR对HepG2细胞的生长抑制;通过Giemsa染色观察细胞贴壁克隆形成率;用流式细胞术分析5-aza-CdR对细胞凋亡的影响;用免疫细胞化学方法检测caspase-3和bcl-2蛋白的表达变化。结果 5-aza-CdR可抑制HepG2细胞 株生长,并呈剂量依赖性,第4天时的抑制率最大,可达60.2%,细胞贴壁克隆形成率从36.3%下将至17.3%;流式细胞术结 果表明8μmol/L5-aza-CdR作用第4天凋亡率为10.26%,与对照相比差异有统计学意义;caspase-3蛋白表达明显增加,而 bcl 2蛋白表达则明显下调。结论 5-aza-CdR可抑制HepG2细胞增殖并能促进凋亡,其机制可能是通过恢复某些抑癌基因表 达,上调caspase-3蛋白并下调bcl-2蛋白表达。

同型半胱氨酸对人血管平滑肌细胞凋亡及bax、bcl-2表达的影响

目的 观察同型半胱氨酸 (Hcy) 对人血管平滑肌细胞 (VSMCs) 凋亡以及bax、bcl-2表达的影响。方法 采用组织贴块法体外培养人VSMCs; 采用流式细胞仪检测细胞凋亡率; 逆转录 -聚合酶链反应法检测Bax、bcl-2mRNA的表达。结果 体外培养的人VSMCs在终浓度为 0 (对照组)、100、200、500、1 000μmol/LHcy的培养液中孵育 24h后的细胞凋亡率分别为 ( 2. 68±0. 23 )%、 ( 2. 79±0 .12 )%、( 8. 45±2. 41 )%、 ( 13. 37±4 .71 )%、(23. 75±5 .56)%, 表明Hcy诱导人VSMCs细胞凋亡呈浓度依赖性; baxmRNA相对表达量分别为 0 .86±0. 01、0 .92±0 .03、1. 51±0 .02、1. 82±0 .03、1 .91±0 .02, bcl-2mRNA相对表达量分别为 1. 38±0 .04、1. 32±0 .03、1. 28±0 .03、1 .21±0. 02、1 .09±0. 02, 表明Hcy呈浓度依赖性诱导人VSMCsbax基因表达显著上调, bcl-2基因表达轻度下调, bax/bcl-2比值升高。结论 Hcy诱导人VSMCs凋亡可能是通过上调bax基因表达来实现的, 诱导人VSMCs凋亡可能是Hcy致动脉粥样硬化作用的机制之一。

兔颅脑爆炸伤后早期行高压氧治疗对Cyt C、Bax、Bcl-2表达的影响

目的研究早期高压氧治疗(HBOT)对兔颅脑爆炸伤后脑皮质细胞色素C(Cty C)、Bax、Bcl-2的影响。方法新西兰大白兔150只随机分为正常对照组(n=10)、创伤组(n=70)、HBOT组(n=70)。创伤组和HBOT组建立兔颅脑爆炸伤模型,正常对照组不行爆炸伤。伤后1、6、12、24 h和3、7、14 d,采用免疫组化方法观察3组兔脑皮质中Cyt C、Bax、Bcl-2的表达情况。结果与正常对照组比较,创伤组伤后1 h即出现Cyt C表达上升,伤后12 h达高峰,伤后24 h开始下降,但维持较高水平;HBOT组Cyt C的表达在伤后早期较创伤组下降明显(均P<0.05)。与正常对照组比较,创伤组Bax和Bc1-2的表达在伤后1、6、12、24 h和3 d均明显上调(均P<0.05);HBOT组Bax的表达在伤后早期较创伤组降低(P<0.05),Bc1-2的表达则明显上调(P<0.05)。结论早期高压氧治疗对颅脑爆炸伤后的脑保护作用可能与抑制Bax表达,诱导Bc1-2表达上调从而阻止伤后早期线粒体释放Cyt C有关。

激素致股骨头骨细胞坏死、凋亡及对bcl-2表达影响的实验研究

目的 :探讨激素性股骨头坏死的发病机制。方法 :选用健康成年大白鼠 30只 ,体重约 2 0 0 g ,随机分为实验组 (冲击注射地塞米松 )和对照组。实验 8周处死动物 ,取股骨头作骨细胞组织病理学、超微结构观察 ,并用TUNEL及免疫组化技术分别检测骨细胞凋亡和bcl 2表达情况。结果 :光镜下实验组较对照组股骨头骨小梁变细、稀疏、空骨陷窝明显增多 ,脂肪细胞增大。电镜下实验组骨细胞体积缩小 ,核固缩 ,线粒体及高尔基体肿胀 ,染色质边聚较多见。实验组凋亡骨细胞增多 ,bcl 2表达骨细胞轻度增加。结论 :激素性股骨头坏死是骨细胞凋亡和坏死共同作用的结果。

视网膜母细胞瘤组织survivin、p16和Bcl-2表达意义

目的:研究视网膜母细胞瘤(retinoblastom,RaB)组织survivi、np16和Bcl-2表达。方法:RB标本采用免疫组织化学方法观察sur-vivin、p16和Bcl-2表达水平。结果:RB标本中survivi、np16和Bcl-2阳性检出率分别是:36例RB组织中19例survivin蛋白呈阳性表达,阳性率为53%(19/36),对照组6例组织未见survivin蛋白阳性表达,两组比较差异有显著性的意义,分化型为50%(10/20),未分化型为56%(9/16),两型之间差异无显著性(P>0.05)。36例RB组织P16蛋白阳性表达率为47%(17/36),分化型为55%(11/20),未分化型为38%(6/16),两型比较差异有显著性(P<0.05)。36例RB组织中BCL-2蛋白表达阳性率为50%(18/36),分化型中为35%(7/20),未分化型为69%(11/16),两型比较差异有显著性(P<0.05)。结论:survivi、np16和Bcl-2在RB的发生和发展过程中起重要作用。

鲨鱼软骨抽提物诱导人胃癌细胞凋亡并下调Bcl-2表达

目的 :探讨鲨鱼软骨抽提物 (SCP)诱导人胃癌MGC80 3细胞调亡的作用机制。方法 :以不同浓度SCP加入体外培养的MGC80 3细胞中 ,用MTT比色法检测细胞存活率 ;Hoechst3 3 3 42 /PI荧光染色 ,荧光显微镜分析凋亡细胞百分率 ;流式细胞术进行细胞凋亡定量 ;琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯状条带 ;免疫细胞化学染色法检测Bcl 2蛋白的表达。结果 :SCP明显抑制 (MGC80 3细胞生长 ,IC50 值为 1mg/ml;荧光显微镜下可见 60 %以上细胞为凋亡细胞的形态学改变 ;琼脂糖凝胶电泳呈现梯状条带 (DNA 1adder) ;免疫细胞化学检测显示Bcl 2表达明显降低。结论 :SCP诱导人胃癌MGC80 3细胞凋亡 ,其作用机制可能与下调Bcl

氯法拉滨对NB4细胞的增殖抑制作用及对Bcl-2表达的影响

本研究观察氯法拉滨对人急性髓系白血病NB4细胞的增殖抑制作用并探讨其可能的作用机制。用MTT法观察氯法拉滨0.01-0.1μmol/L作用于NB4细胞48 h的增殖抑制作用;氯法拉滨0.01-0.1μmol/L作用于NB4细胞24 h后,用流式细胞术分析其细胞的凋亡水平,Western blot检测细胞内Bcl-2的蛋白表达。结果表明,氯法拉滨对NB4细胞具有浓度依赖性增殖抑制作用。氯法拉滨作用24 h后,NB4细胞凋亡率明显增加,Bcl-2蛋白表达下调。结论:氯法拉滨能抑制NB4细胞增殖,其作用机制可能与下调Bcl-2的蛋白表达,诱导NB4细胞凋亡有关。

新加良附方对移植性人胃癌细胞Bax/Bcl-2表达影响

目的观察新加良附方诱导移植性人胃癌细胞(BGC-823)Bax/Bcl-2表达的影响。方法建立移植性人胃癌动物模型,并将动物模型随机分为模型对照、5-FU组及新加良附方高、中、低剂量5组。新加良附方大、中、小剂量组给药量分别为10、5和2.5g/kg;5-FU组给药剂量为17mg/kg;模型组给予等量无菌生理盐水。连续给药、给水15d处死模型小鼠分离肿瘤,瘤块称重,石蜡包埋,并将肿瘤组织切片,免疫组织化学法检测Bax/Bcl-2蛋白表达。结果新加良附方高剂量组能上调肿瘤组织Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,与模型对照组比较,有统计学意义(P<0.05);新加良附方中剂量组能下调Bcl-2蛋白表达,与模型组比较,有统计学意义(P<0.05)。结论新加良附方能通过上调肿瘤组织Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,从而诱导胃癌细胞发生凋亡。预示新加良附方在抗肿瘤方面具有进一步深入研究价值。

血管内皮生长因子及其基因对缺血脑组织保护作用与Bax和Bcl-2表达的相关性

目的:探讨血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)基因对缺血脑组织脑梗死神经细胞的保护作用与Bax和Bcl-2水平的关系,以及VEGF作用的机制。方法:用线拴法制成Wistar大鼠大脑中动脉永久性闭塞模型,将VEGF165真核表达质粒(pUCCAGGS/hVEGF165)经颅骨注入到缺血区。术后7d断头取脑,用反转录PCR(RT-PCR)检测VEGFmRNA的表达强度,用免疫组织化学方法检测Bax,Bcl-2和VEGF的表达水平。结果:与对照组相比,治疗组VEGFmRNA的表达增强,VEGF表达增高犤(32.50±2.45)个/高倍视野比(3.33±1.03)个/高倍视野,t=334.821,P<0.01犦,Bax表达减弱犤(4.11±0.41)个/高倍视野,t=9.168,P<0.01犦,Bcl-2表达增强犤(7.94±0.49)个/高倍视野,t=5.335,P<0.01犦。结论:VEGF165基因可以转化到缺血脑组织中并表达VEGFmRNA和VEGF,后者可能通过抑制Bax和增强Bcl-2的表达而保护神经细胞。

大鼠心肌缺血预适应对I/R心肌细胞凋亡及bcl-2表达的影响

目的 :对缺血预适应 (IP)第一保护窗对大鼠缺血再灌注 (I/R)心肌细胞凋亡和凋亡抑制基因bcl- 2表达的影响进行研究。方法 :采用TUNEL法、免疫组化和原位杂交方法测定大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡和bcl- 2的表达。结果 :①IP +I/R3h组TUNEL法阳性心肌细胞核数量及阳性心肌细胞核占总心肌细胞核数的百分比均明显少于I/R3h组 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1) ;②IP +I/R3h组表达bcl- 2蛋白阳性的心肌细胞数及阳性心肌细胞占心肌细胞总数的百分比均明显高于I/R3h组 (P <0 0 1) ;IP +I/R1h组表达bcl- 2mRNA阳性的心肌细胞数及阳性心肌细胞占心肌细胞总数的百分比均明显高于I/R1h组 (P <0 0 1)。结论 :①大鼠心肌IP第一保护窗能够显著减少I/R心肌细胞凋亡 ;②IP通过上调凋亡抑制基因bcl-

滋肾化毒饮联合环磷酰胺对狼疮性肾炎患者外周血淋巴细胞Fas、FasL、Bcl-2表达的影响及临床疗效观察

目的:观察滋肾化毒饮联合间断性环磷酰胺(CTX)静脉冲击疗法对活动期狼疮性肾炎(LN)患者外周血淋巴细胞(PBL)凋亡调控因子及临床指标的影响。方法:将活动性LN患者40例,随机分为治疗组和对照组,每组各20例。治疗组予滋肾化毒饮联合间断性CTX静脉冲击疗法,对照组予间断性CTX静脉冲击疗法。观察治疗3个月前后的PBL的Fas、FasL、Bcl-2表达及临床指标变化,Fas、FasL、Bcl-2用免疫组化法测定。结果:治疗后两组Fas、FasL及治疗组Bcl-2表达下调(P<0.05),而Fas、FasL表达下调幅度大于对照组(P<0.05)。治疗组SLEDAI、24h尿蛋白、Hgb、Ccr、C3指标的改善优于同期对照组(P<0.05)。治疗组肝功能受损、白细胞减少、舌苔厚腻、失眠、痤疮发生率明显少于对照组(P<0.05)。结论:调控Fas、FasL介导的凋亡可能是CTX、激素、滋肾化毒饮有效治疗活动狼疮性肾炎机制之一。

克癌临对大鼠肝癌发生期间p53和bcl-2表达的影响

为探讨克癌临 (主药 :半枝莲、仙鹤草等 )抑制癌症发生的作用机制 ,以DEN诱生大鼠肝癌 ,观察诱癌 8周和 16周时大鼠肝脏组织形态及p5 3、bcl- 2基因表达等的改变。结果 :克癌临组大鼠的肝脏增长性病变在 8周和 16周时均明显轻于模型组 ;p5 3和bcl- 2表达少于模型组 ,比较其积分光密度值均有显著差异 (P <0 0 5或P <0 0 1)。提示下调p5 3和bcl - 2基因表达 。

促红细胞生成素对大鼠脑缺血再灌注损伤后缺血侧皮层神经元凋亡和Bcl-2表达的影响

目的 探讨促红细胞生成素 (Erythropoietin ,EPO)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后的保护作用。方法 采用线栓法阻断大鼠一侧大脑中动脉 (MCA)血流 2h ,再灌注 2 4h制成局灶性脑缺血再灌注损伤模型。将 3 2只雄性SD大鼠随机分成EPO组、缺血再灌注组、假手术组和正常组。于缺血开始时EPO组给EPO 3 0 0 0U/kg腹腔注射 ;缺血再灌注组和假手术组给予等剂量生理盐水。再灌注 2 4h后断头取脑、切片 ,进行HE染色、Bcl -2免疫组化染色和细胞凋亡检测。结果 缺血 2h再灌注 2 4h后 ,EPO组和缺血再灌注组大鼠缺血侧皮层可检测到凋亡细胞 ,且EPO组凋亡细胞数明显少于缺血再灌注组 ,假手术组和正常组未见凋亡细胞 ;EPO组和缺血再灌注组缺血侧皮层Bcl -2阳性细胞数均高于假手术组和正常组 ,与缺血再灌注组相比 ,EPO组Bcl-2蛋白表达显著增高。结论 EPO可抑制缺血再灌注损伤后缺血侧皮层的细胞凋亡 ,其机制可能是通过上调bcl-2基因表达而实现。

参附注射液联合丙泊酚预处理对沙土鼠急性脑缺血再灌注后Bcl-2表达的影响

近年来，国内、外对预处理脑保护作用的研究热点已从缺血性预处理发展到药物性预处理。中药的保护作用越来越受到重视，参附注射液是一种纯中药制剂，是中医急救的必备药物，而丙泊酚作为一种静脉麻醉药物，广泛应用于临床。研究表明，在轻度脑缺血损伤中，凋亡是重要的神经细胞死亡方式，而抗凋亡基因bcl-2可抑制细胞坏死及细胞凋亡。本实验旨在通过检测凋亡细胞来研究参附注射液联合丙泊酚预处理对缺血神经元的保护作用，并通过研究其与抗凋亡基因bcl-2表达之间的相互关系来揭示其作用机制。

丁咯地尔对大鼠坐骨神经损伤后背根神经元凋亡及Caspase-3、Bcl-2表达的影响

目的:研究丁咯地尔对大鼠坐骨神经损伤后背根神经元凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、Bcl-2表达的影响。方法:将48只成年健康SD大鼠随机分为正常组、模型组、丁咯地尔组,预处理14 d后制作坐骨神经损伤动物模型,分别在模型制备后12,24,72 h与7 d各组提取L1～5背根神经节,用原位末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸标记法(TUNEL法)检测神经细胞的凋亡水平和用免疫组化方法计数Caspase-3、Bcl-2阳性细胞表达数,并加以组间比较。结果:正常组大鼠背根神经细胞凋亡和Caspase-3阳性细胞较少;而模型组在坐骨神经损伤后12 h,神经细胞凋亡及Caspase-3阳性表达数明显增多,72 h达高峰,7 d表达减弱;丁咯地尔组在坐骨神经损伤后12 h,神经细胞凋亡及Caspase-3阳性表达数也增多,但较模型组减少(P<0.05),24 h至7 d均较同期模型组明显减少(P<0.01);丁咯地尔组于模型制备后12 h Bcl-2即有明显表达,72 h达高峰,7 d时与模型组比较仍有明显差异(P<0.05)。结论:坐骨神经损伤后背根神经元存在广泛的细胞凋亡现象,丁咯地尔通过抑制Caspase-3蛋白表达,上调Bcl-2表达,从而抑制细胞凋亡来发挥其神经保护作用。

鼻咽癌E-cadherin的表达与bcl-2表达的相关性

目的 :探讨鼻咽癌组织细胞中E -cadherin的表达和bcl-2基因表达的相互影响。方法 :利用免疫组化方法检测 74例鼻咽癌组织细胞中E -cadherin及bcl -2基因表达 ,计算各例的阳性表达率 ,通过非参数相关样本Wilcoxon检验 ,检验两者的相互关系。结果 :74例鼻咽癌中E -cadherin72例显示不同程度阳性表达 ,阳性率由 5 %至 10 0 % ;bcl -2在 65例中显示不同程度阳性表达。bcl-2中位阳性率明显低于E -cadherin的中位阳性率 (Z =-3 0 2 1,P =0 0 0 3 ) ,且随着E -cadherin阳性率增高而减低。结论 :鼻咽癌细胞中E -cadherin的表达可降低bcl-2基因的表达 ,促进癌细胞凋亡。

白术挥发油对小鼠S_(180)的抑瘤作用及瘤组织凋亡相关基因bcl-2表达的影响

目的探讨白术挥发油对小鼠S180肉瘤的抑瘤作用及肿瘤凋亡相关基因bc l-2表达的影响;方法荧光免疫组织化学法,通过激光共聚焦显微镜观察并计数表达bc l-2基因的瘤细胞数。结果白术挥发油各剂量组对小鼠S180肉瘤组织具有抑制作用;白术挥发油各剂量组能明显降低小鼠S180肉瘤凋亡相关基因bc l-2的表达。结论白术挥发油可能通过调控肿瘤细胞凋亡相关基因bc l-2的表达而实现抑瘤作用。