实时定量PCR检测白血病中BCL11B基因的表达水平

目的建立BCL11B基因的定量检测方法,并分析其在白血病中的表达水平。方法利用实时定量RTPCR分析TALL(12例)、BALL(8例)、BCLL(6例)、AML(7例)和正常对照(10例)外周血单个核细胞(PBMC)中BCL11B基因的表达水平,以β2微球蛋白(β2M)基因表达水平作为内对照。结果TALL患者PBMC中BCL11B表达水平(553.84±564.01拷贝105β2M拷贝)明显高于正常对照和其他白血病患者(P=0.006,P=0.013,P=0.031,P=0.020);而AML组BCL11B表达水平(0.02±0.04拷贝105β2M拷贝)则明显低于正常对照组(P=0.000)、BALL组(P=0.006)和TALL组(P=0.020);BALL(1.99±1.59拷贝105β2M拷贝)和BCLL(2.26±3.57拷贝105β2M拷贝)中BCL11B表达水平与正常对照(2.20±1.01拷贝105β2M拷贝)无显著差别。结论建立了实时定量RTPCR检测BCL11B方法,TALL中BCL11B高表达可能与其发病有一定关系。

转录因子BCL11B通过TGF-β_1调控支气管哮喘患者IL-17A的表达

目的探讨转录因子BCL11B在支气管哮喘患者中的变化情况,并分析其是否可以通过TGF-β1调控哮喘患者IL-17A的表达。方法 25例慢性持续期哮喘患者为哮喘组,10例非哮喘志愿者为正常对照组。分别通过实时定量PCR(Taqman法)检测两组外周血单个核细胞中BCL11B的表达水平,通过ELISA方法检测两组血浆中TGF-β1和IL-17A的表达情况。结果哮喘组患者BCL11B的表达明显低于正常对照组,而TGF-β1和IL-17A表达明显高于正常对照组。哮喘患者BCL11B的表达与TGF-β1和IL-17A均呈负相关,而TGF-β1和IL-17A的表达呈正相关。结论哮喘患者低表达的BCL11B可能会通过TGF-β1上调IL-17A的表达,从而参与哮喘炎症反应的发生。

RNA干扰下调bcl11b基因表达对Molt-4细胞增殖和凋亡的影响

目的分析下调bcl11b基因表达对人T淋巴细胞白血病细胞株Molt-4细胞增殖和凋亡的影响。方法通过核转技术将bcl11b-siRNA转染Molt-4细胞;在不同时间点分别采用荧光实时定量PCR观察其对bcl11b基因表达的影响;MTT法观察对Molt-4细胞体外增殖的抑制作用;流式细胞术及刘氏染色检测siRNA的诱导凋亡作用。结果转染后24小时开始细胞生存率均显著降低(P<0.01),细胞发生凋亡,bcl11b基因表达下调。结论bcl11b-siRNA可抑制Molt-4细胞中bcl11b基因表达,使肿瘤细胞增殖抑制和发生凋亡。

T-ALL/淋巴瘤中BCL11B基因转录本的分析

目的:分析T-ALL/淋巴瘤中BCL11B基因转录本的特点。方法:利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和实时定量聚合酶链式反应(RQ-PCR)方法分析12例T-ALL/淋巴瘤外周血单个核细胞(PBMC)中BCL11B基因的表达情况;限制性内切酶消化确定PCR产物的特异性。结果:3例T-ALL/淋巴瘤患者中出现2种BCL11B转录本:野生型和第3外显子缺失型,其余9例均表达第3外显子缺失型的转录本。两组病人PBMC中BCL11B表达水平无显著差别(P=0.301)。结论:3例T-ALL/淋巴瘤病人中存在2种BCL11B基因转录本,但在表达水平上无明显差别。

pIRES2-EGFP-BCL11B真核表达载体体外表达的动态分析

目的:研究真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B(B细胞白血病/淋巴瘤11B基因)在K293(人胚肾细胞株)和Raji(人Burkitt淋巴瘤细胞株)细胞中的表达情况。方法:分别利用脂质体和核转染技术将真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B(pBCL11B)转染至K293和Raji细胞中,并设立空质粒组(pI2)和空转染组(MOCK)作为对照。通过荧光显微镜和流式细胞仪检测转染后48 h各组EGFP的表达,确定转染效率。通过荧光实时定量PCR(Taqman)技术检测转染后24 h各组BCL11B mRNA的表达情况,通过Western blotting技术检测转染后48 h各组BCL11B蛋白的表达情况。高分辨率活细胞成像系统动态观察转染后36-72 h重组质粒在Raji细胞增殖过程中的表达。结果:K293细胞pBCL11B、pI2和MOCK组的转染效率分别为(71.23±4.62)%、(70.45±3.58)%和(0.30±0.10)%,而Raji细胞各组的转染效率分别为(23.12±5.94)%、(22.48±6.25)%和(0.30±0.10)%。实时定量PCR和Western blotting结果显示转染后pBCL11B组在mRNA和蛋白水平均能检测到BCL11B基因的有效表达,BCL11B的表达量均明显高于pI2组和MOCK组(P<0.05)。活细胞追踪显示转染后36-72 h重组质粒在细胞中可稳定表达且转染后的细胞可以正常分裂增殖。结论:系统分析了真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B转染至K293和Raji细胞的表达变化特点,转染后可以检测到该基因的有效上调,研究结果为下一步转染正常人T细胞奠定了基础。

评价血液ST13和BCL11B基因表达水平在帕金森病早期诊断中的潜在价值

目的:研究外周血ST13和BCL11B基因表达水平作为帕金森病(PD)早期分子诊断标志物的可能性。方法:利用实时定量PCR,比较外周血ST13和BCL11B基因的表达水平在各阶段PD患者中的变化,并计算与健康对照组的统计学差异。结果:PD患者外周血ST13和BCL11B的表达水平明显降低。BCL11B的表达在包括Hoehn-YahrⅠ级患者在内的所有PD患者中均显著下降,而ST13的表达只有在Hoehn-YahrⅡ级以上患者中才出现明显变化。结论:ST13和BCL11B基因表达水平都有作为潜在PD分子诊断标志物的可能,但就筛查早期PD患者而言,BCL11B可能更具优势。

SYBR Green荧光定量PCR法对BCL11B基因座位相互作用位点的验证分析

目的:研究在不同类型细胞核中,位于不同染色体上的BCL11B与ARHGAP6基因座位间的相互作用关系。方法:通过SYBR Green荧光实时定量PCR法,分别对MCF-7和Jurkat细胞的3C(染色体构象捕获)样品进行定量分析,分析分别位于不同染色体上的BCL11B与ARHGAP6基因座位间的相互作用频率。结果:与TaqMan探针法相比较,基于SYBR Green荧光实时定量PCR法对3C样品的分析同样具有良好的特异性。在MCF-7和Jurkat细胞中,BCL11B与ARHGAP6基因座位间的相互作用频率存在很大的差异。结论:SYBR Green荧光实时定量PCR法在染色体构象捕获技术中具有很好的特异性;BCL11B与ARHGAP6基因座位间的相互作用具有细胞类型特异性。

Ficoll分离和MACs分选对T细胞BCL11b表达水平的影响

目的了解Ficoll分离和MACs分选过程对T细胞中BCL11b基因表达水平的影响情况。方法利用Ficoll分离3例正常人外周血单个核细胞(PBMC),进一步经MACs负性分选CD3+T细胞。分别收集培养0、6和20h的PBMC和CD3+T细胞,利用实时定量PCR方法检测各组样本中BCL11b基因的表达水平。结果经Ficoll分离的PBMC和MACs分选后CD3+T细胞在3个时间点BCL11b的表达水平无显著性差异(p>0.05),根据CD3+T细胞%标化后,各组BCL11b表达水平也均无显著性差异。结论Ficoll分离和MACs负性分选过程不影响T细胞中BCL11b表达水平,提示其不会影响T细胞的活化。

Nucleofection转染过程对Jurkat细胞BCL11b水平的影响

目的了解核转染(Nucleofection)过程对Jurkat细胞中BCL11b基因表达水平的影响情况。方法利用实时定量PCR方法检测分析经不同程序Nucleofection过程和不同时间培养的Jurkat细胞的BCL11b基因的表达水平。结果经Nucleofector的C-16、S-18和G-10+siRNA程序处理后,C-16与S-18组细胞培养2h的BCL11b水平明显升高(p<0.05),C-16、S-18和G-10+siRNA三组细胞培养10h后BCL11b水平均高于对照组(p<0.05)。对照组、C-16和S-18组细胞随着培养时间延长(在2～24h之间),BCL11b水平降低(p<0.05),而在G-10+siRNA处理组,直到培养48hBCL11b水平才有所下降。结论Nucleofection处理过程对Jurkat细胞BCL11b表达有一定的影响,但有一定的时效性。

BCL11B基因在血液系统恶性肿瘤中的研究进展

BCL11基因是BCL家族的重要组成部分,与血液肿瘤的发生相关,而BCL11B基因是BCL11家族一个不可忽视的成员之一。BCL11B基因是一种重要的转录调控因子,同时也是一种肿瘤抑制基因。BCL11B基因不仅参与胸腺发生、T细胞增殖和分化等生物过程,同时也调控着淋巴造血系统的发育和增殖等。此外,BCL11B基因基因突变或者异常表达等还会导致白血病/淋巴瘤以及其他恶性肿瘤的发生。因此研究BCL11B基因能为肿瘤的发生及治疗提供理论依据。

BCL11b调控ILC2机制的研究进展

Ⅱ型固有淋巴细胞(ILC2)是新近发现的固有淋巴细胞群体,在Notch信号下,B细胞慢性淋巴细胞白血病/淋巴瘤11B基因(BCL11b)通过独立生长因子-1(Gfi-1)诱导GATA结合因子-3(GATA-3)调控ILC2的发育,并诱导ILC2产生炎性细胞因子。本文将对ILC2的界定、BCL11b在ILC2的表达、BCL11b介导ILC2的发育和调控ILC2产生炎性细胞因子的研究进展进行综述。这将对发现免疫性疾病和慢性疾病等的新机制以及潜在的治疗靶标具有一定的现实意义。

利用环形染色体构象捕获技术对Bcl11b基因座位在细胞核内空间组织的研究

环形染色体构象捕获(4C)技术实现了在全基因组范围内捕获与4C靶位点发生相互作用的基因座位,因而通过4C相关技术可以进一步研究靶基因座位在细胞核内的空间组织形式。该文以Bcl11b基因座位作为4C分析的靶位点,通过优化4C分析的反向巢式PCR扩增条件,实现4C分析PCR的高效扩增;并通过有限克隆筛选与普通测序分析相结合的方法,在全基因组范围内捕获到一些与Bcl11b基因座位发生潜在相互作用的基因座位。这些基因座位与靶位点间的相互作用既有发生在相同染色体内的,也有发生在不同染色体之间的。这些基因座位间的相互作用表明了Bcl11b基因座位在细胞核内复杂的空间组织形式。

MiR-92a及其靶抑癌基因BCL11b在辐射诱导小鼠胸腺淋巴瘤中的作用

目的 采用电离辐射诱导的小鼠胸腺淋巴瘤动物模型,检测抑癌基因BCL11b和miR-92a的表达变化,探讨miR-92a对BCL11b基因的调控作用.方法 BALB/c小鼠采用γ射线全身照射,单次照射剂量和剂量率分别为1.75 Gy和0.382 Gy/min,每周1次,连续照射4周,计算电离辐射诱导小鼠胸腺淋巴瘤发生率.采用实时定量PCR法检测miR-92a表达变化情况,Westernblot方法检测BCL11b蛋白表达变化情况；将miR-92a序列插入载体pcDNA-DEST-47中构建真核表达质粒；构建BCL11b基因3＇UTR-荧光素酶报告质粒,与pcDNA-DEST-miR-92a质粒共转染至EL-4细胞,分析miR-92a对BCL11b表达的调控作用.结果 辐射诱导的BALB/c小鼠胸腺淋巴瘤的发生率为58.51％.胸腺淋巴瘤细胞中BCL11b表达下调,而miR-92a表达上调,两者之间存在显著的负相关（r=-0.827,P＜0.05）.psiCHECK 2-BCL11b和pcDNA-DEST-miR-92a两种质粒共转染组的荧光素酶表达明显低于单独转染的空载体和靶基因BCL11b组（t=3.42,P＜0.05）.结论 电离辐射诱导的小鼠胸腺淋巴瘤中miR-92a与BCL11b表达的负相关,提示miR-92a可能参与了辐射诱发肿瘤中BCL11b蛋白表达的调控作用.

IFN-α对人皮肤淋巴瘤细胞系Hut78的影响

目的研究IFN-α对人皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,探讨IFN-α治疗CTCL的机制。方法分别用3000,5000,10000,20000U/mL的IFN-α作用Hut78细胞24,48,72h后,利用MTS法检测Hut78细胞的生存率;并用流式细胞术检测不同浓度IFN-α作用细胞24h后,Hut78细胞的凋亡情况。运用Real-time PCR检测不同时间点IFN-α作用后,BCL11B mRNA的表达情况,Western blot检测不同时间点IFN-α作用后BCL11B蛋白的表达情况,免疫荧光检测IFN-α不同时间点作用后,BCL11B蛋白在Hut78细胞表达程度和分布情况。结果 IFN-α能明显抑制Hut78细胞的增殖,且这种作用呈剂量依赖性和时间依赖性。其抑制效应在48h达到峰值。IFN-α还能显著诱导Hut78细胞的凋亡,其作用亦呈浓度依赖性。10000U/mL IFN-α作用细胞3,6,9,12h后,BCL11B mR-NA表达均显著降低,其中在6h时间点BCL11B的mRNA表达下降到最低点,10000U/mL IFN-α作用细胞6,12,24h后BCL11B的蛋白也明显降低,在12h时间点,BCL11B的蛋白表达量下降至最低。结论 IFN-α通过抑制细胞增殖和促进细胞凋亡对CTCL起到治疗作用,并可通过降低BCL11B的表达,促进细胞凋亡,并提高CTCL细胞对常规化疗的敏感性。

BCL11基因与恶性肿瘤的关系

B细胞淋巴瘤/白血病(B-cell lymphoma/leukemia,BCL)家族蛋白在细胞的增殖和抗凋亡等方面起重要作用。BCL11基因是BCL家族的成员之一,分为BCL11A和BCL11B基因。其中BCL11A基因是一种原癌基因,而BCL11B被认为是一种抑癌基因,近年来人们逐渐认识到了它们的结构与特点。越来越多的研究发现,它们不仅与血液系统淋巴细胞肿瘤的关系密切,还与很多其它系统的恶性肿瘤有着一定关系。本文主要介绍BCL11基因特点、功能,并结合最新的资料将其与人类各系统恶性肿瘤关系的研究做一综述。

B细胞淋巴瘤/白血病11B在小鼠耳蜗螺旋器发育中的表达研究

目的·探索B细胞淋巴瘤/白血病11B(B-cell leukemia/lymphoma 11B,BCL11B)在小鼠耳蜗螺旋器(organ of Corti)发育过程中的表达。方法·选择出生前后不同时期/年龄[胚胎期14.5 d(E14.5)、E15.5、E16.5、E18.5,出生后0日龄(P0)、P2、P4、P7]、随机性别的野生型C57BL/6J小鼠24只,每个年龄3只。将其处死后,取出小鼠双侧耳蜗并固定,对左侧耳蜗解剖获得完整基底膜,右侧耳蜗经蔗糖脱水后进行包埋并制作冰冻切片。采用BCL11B抗体与肌球蛋白6(MYOSIN 6)抗体对小鼠耳蜗基底膜解剖样品、冰冻切片耳蜗样品进行免疫组化分析。采用共聚焦荧光显微镜对上述染色后的不同年龄点的组织样品进行观察,并对BCL11B阳性表达的毛细胞的计数及百分比进行统计。结果·成功制备了8个年龄点的小鼠耳蜗基底膜解剖样品及冰冻切片耳蜗样品。共聚焦荧光显微镜下显示,最先于E15.5胎鼠耳蜗螺旋器底中圈发现BCL11B的表达,其表达特异性出现在MYOSIN6阳性的外侧3排外毛细胞中;随着耳蜗发育,BCL11B在外毛细胞内的表达逐渐增强,至P2时达到顶峰,于P4时逐渐减弱,直至P7时已无法检测到。在BCL11B于外毛细胞表达的整个时期内,螺旋器中的其他细胞均未有BCL11B的表达。分别对BCL11B阳性表达毛细胞计数及百分比进行统计分析,结果显示E16.5、P0和P4这3个年龄点间的差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论·通过免疫组化共染BCL11B与MYOSIN6证实,BCL11B是一个在耳蜗螺旋器中外毛细胞发育早期的特异性表达蛋白。

Using mouse models to study function of transcriptional factors in T cell development

Laboratory mice have widely been used as tools for basic biological research and models for studying human diseases.With the advances of genetic engineering and conditional knockout(CKO)mice,we now understand hematopoiesis is a dynamic stepwise process starting from hematopoietic stem cells(HSCs)which are responsible for replenishing all blood cells.Transcriptional factors play important role in hematopoiesis.In this review we compile several studies on using genetic modified mice and humanized mice to study function of transcriptional factors in lymphopoiesis,including T lymphocyte and Natural killer(NK)cell development.Finally,we focused on the key transcriptional factor Bcl11b and its function in regulating T cell specification and commitment.