多重PCR快速检测弥漫性大B细胞淋巴瘤患者骨髓BCL2/IGH与BCL6/IGH融合基因的临床意义

弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)是最常见的侵袭性非霍奇金淋巴瘤,其临床表现、分子生物学特点都有显著的异质性。本研究旨在探讨多重PCR技术在DLBCL患者骨髓BCL2/IGH及BCL6/IGH等融合基因检测中的临床意义。利用多重巢式PCR技术对80例初治DLBCL患者的骨髓标本进行BCL2/IGH及BCL6/IGH融合基因检测。结果表明,80例患者骨髓标本中携带目的融合基因共12例,阳性率为15%;其中BCL2-IGH阳性患者为6例,BCL6-IGH阳性患者为6例。DLBCL患者携带不同的融合基因具有不同的临床特点。结论:运用多重PCR方法对DLBCL患者进行分子生物学检测具有快速、准确的优点。但需进一步深入研究改善方法,使之对融合基因能做定量或半定量分析,这对于DLBCL患者的诊断、协助分期、预后评估、微小残留病变的估测,指导临床治疗DLBCL有重要意义。

实时定量PCR法检测淋巴瘤患者Bcl-2／IgH融合基因及其临床意义

本研究目的是检测滤泡性淋巴瘤和弥漫大B细胞淋巴瘤患者bcl-2/IgH融合基因的表达水平,以探讨其临床意义。以SYBRGreenⅠ荧光染料实时定量PCR方法检测20例患者外周血和(或)骨髓bcl-2/IgH融合基因的表达水平,并对其中4例患者bcl-2/IgH融合基因的表达水平进行动态监测。结果表明,在bcl-2/IgH融合基因阳性表达的病例中,骨髓和外周血bcl-2/IgH融合基因的相对拷贝数分别为4.23和2.73,统计学分析差异无显著性(p=0.107),而治疗前后融合基因的相对拷贝数均数分别为3.61和2.69,统计学分析差异有显著性(p=0.000),初诊及复发组的bcl-2/IgH融合基因表达水平明显高于缓解组(p=0.008),在4例患者的外周血bcl-2/IgH融合基因动态监测结果中,1例患者在临床复发前3个月bcl-2/IgH融合基因表达水平明显上升。结论:bcl-2/IgH融合基因表达水平与患者的疾病状态有一定的相关性,初诊及复发患者融合基因的表达水平高,而缓解患者融合基因的表达水平低,治疗后融合基因表达水平较治疗前明显下降,bcl/IgH融合基因表达水平的变化可能与临床疾病进程有关,检测外周血是比较可行的。

外周血Bcl-2/IgH融合基因检测的可行性探讨

目的探讨外周血作为Bcl-2/IgH融合基因检测的标本来源的可行性。方法以SYBR GreenⅠ荧光染料实时定量PCR方法检测20例患者外周血和5例骨髓Bcl-2/IgH融合基因的阳性率及表达水平。结果骨髓和外周血Bcl-2/IgH融合基因的阳性检出率分别是80%与65%,两者阳性率经统计学分析差异无显著性(P=0.64);外周血和骨髓融合基因相对拷贝数x軃±sd分别为2.73±2.54和4.23±4.06,经统计学分析差异无显著性(P=0.107)。结论以外周血作为Bcl-2/IgH融合基因观测的标本来源有一定的可行性,值得进一步研究。

实时定量PCR检测Bcl-2/IgH融合基因在淋巴瘤中的应用

Bcl-2/IgH融合基因是淋巴瘤的肿瘤特异性标志,见于85%～90%的滤泡性淋巴瘤及30%的弥漫性大B细胞淋巴瘤患者。大量研究表明,该融合基因与滤泡性淋巴瘤和弥漫性大B细胞淋巴瘤有很好的相关性,对Bcl-2/IgH的定量检测能反应淋巴瘤的临床进程。现就实时定量PCR技术对Bcl-2/IgH融合基因的检测在淋巴瘤的分期、疗效评价、预测复发和预后评估等方面的临床意义进行综述。

伴BCL2／IGH融合基因的急性淋巴细胞白血病二例并文献复习

目的探讨伴BCL2/IGH融合基因急性淋巴细胞白血病（ALL）患者的临床特征、疗效及预后。方法分析2例罕见伴t（14；18）易位的ALL患者临床和实验室特征，并进行文献复习。结果结合骨髓细胞形态学和流式细胞免疫分型技术诊断2例急性前体B细胞性淋巴细胞白血病患者，骨髓细胞核型分析显示伴有t（14；18）染色体易位；BCL2/IGH融合探针丝裂间期及中期荧光原位杂交（FISH）检测到BCL2/IGH融合信号；聚合酶链反应（PCR）检测出其中1例同时伴有MLL-AF4融合基因。结论伴BCL2/IGH融合基因的ALL较为罕见，次级染色体异常对其预后及生存期可能均有影响，还需更多病例明确骨髓干细胞移植是否能延长其生存期。

同时伴有myc／IgH基因和bcl－2／IgH基因融合的B细胞淋巴瘤一例

患者男，27岁。鼻塞8年余，持续性头痛2个月，伴双眼复视1个月。当地医院头颅CT考虑鼻咽癌侵犯蝶骨斜坡及蝶窦。2009年12月25日在本院磁共振成像（MR]）检查考虑鼻咽癌侵犯中颅窝底骨质，并双侧咽后组、颈部Ⅱ区淋巴结转移。PET·CT检查符合淋巴瘤影像改变。实验室检查：乳酸脱氢酶（LDH）4．68μmol·s^-1·L^-1（正常值1．82～4．09μmol·s^-1·L^-1）。

滤泡性淋巴瘤的发病机制与治疗的研究进展

滤泡性淋巴瘤（FL）是起源于滤泡生发中心B细胞的恶性淋巴瘤,在常见的淋巴瘤亚型中居第二位,且发病率有上升趋势,在恶性淋巴瘤发病类型中仅次于弥慢性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）。组织学上,FL呈滤泡或结节样生长,肿瘤性滤泡主要由中心细胞和中心母细胞组成,同时也含有巨噬细胞、滤泡树突状细胞、成纤维细胞、内皮细胞和T淋巴细胞。

亚砷酸钠及其代谢产物诱导16HBE细胞BCL2L2-PABPN1表达及机制探讨

目的探讨亚砷酸钠及其甲基化代谢产物诱导16HBE细胞融合基因B淋巴细胞瘤-2样蛋白2(BCL2L2)-多聚(A)结合蛋白核1(PABPN1)表达的差异及相关机制。方法(1)分别以浓度为1.5、3.0、4.5μmol/L的亚砷酸钠染毒16HBE细胞(设为低、中、高剂量砷染毒组),以浓度为4.5μmol/L一甲基胂酸(MMA)、二甲基胂酸(DMA)和亚砷酸钠染毒16HBE细胞(设为MMA组、DMA组和亚砷酸钠组),并设无毒物刺激的对照组。培养48 h后,以实时荧光定量聚合酶链式反应法(qRT-PCR)检测BCL2L2-PABPN1的表达。(2)设计两种小干扰RNA(siRNA)沉默片段转染16HBE细胞,以敲减BCL2L2-PABPN1,分别设为siRNA-1组和siRNA-2组;另设无敲减BCL2L2-PABPN1转染的对照组。培养48 h后,以qRT-PCR检测3组细胞中BCL2L2-PABPN1的表达,分别以MTS法、JC-1线粒体膜电位检测法检测细胞存活率和早期凋亡率,以Hoechest33342/碘化丙啶(PI)双重染色法观察细胞凋亡情况,以蛋白质免疫印迹法检测P53信号通路相关蛋白表达。结果(1)随着亚砷酸钠染毒剂量的增加,16HBE细胞BCL2L2-PABPN1相对表达水平增加(P<0.01);高剂量砷染毒组16HBE细胞BCL2L2-PABPN1相对表达水平分别高于对照组、低剂量砷染毒组和中剂量砷染毒组(P值均<0.05)。亚砷酸钠组16HBE细胞BCL2L2-PABPN1相对表达水平分别高于对照组、MMA组和DMA组(P值均<0.05);但对照组、MMA组和DMA组16HBE细胞BCL2L2-PABPN1相对表达水平两两比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05)。(2)siRNA-1组、siRNA-2组16HBE细胞中BCL2L2-PABPN1相对表达水平和细胞存活率均低于对照组(P值均<0.05);但3组16HBE细胞早期凋亡率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Hoechest33342/PI双重染色结果显示,siRNA-1组、siRNA-2组16HBE细胞核固缩和早期凋亡细胞的数量均较对照组增多。siRNA-1组、siRNA-2组16HBE细胞中P53、Ser392位点磷酸化P53、B淋巴细胞瘤-2相关死亡启动子、P21和细胞色素C的蛋白相对表达水平均高于对照组(P值均<0.05),P53上调凋亡因子蛋白相对表达水平均低于对照组(P值均<0.05)。结论亚砷酸钠可能通过诱导融合基因BCL2L2-PABPN1的表达,阻滞16HBE细胞凋亡;其机制与激活P53信号通路有关。亚砷酸钠甲基化代谢产物MMD和DMA对BCL2L2-PABPN1的表达无影响。BCL2L2-PABPN1可能通过BCL2L2和PABPN1基因的协同作用发挥抗凋亡效应。