BCL6B对人结直肠癌LoVo细胞增殖和迁移的影响及机制

目的:研究B细胞白血病/淋巴瘤6B(BCL6B)在人正常肠上皮细胞FHC及结直肠癌细胞LoVo中的表达水平及BCL6B对LoVo细胞增殖和迁移的影响,并探讨其相关分子机制。方法:采用RT-PCR及Western blot检测FHC细胞和LoVo细胞中BCL6B的内源性表达;用脂质体法将重组质粒pc DNA3.1-BCL6B转入LoVo细胞,运用MTT、集落形成、细胞划痕及Transwell小室实验检测BCL6B对LoVo细胞增殖和迁移的影响,采用RT-PCR及Western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达,Western blot检测蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平。结果:与正常肠上皮细胞FHC相比,BCL6B在LoVo细胞中呈明显低表达;转染pc DNA3.1-BCL6B后的LoVo细胞内BCL6B水平显著增高。过表达BCL6B的实验组细胞72 h的增殖活性及划痕愈合力分别较对照组降低28.33%(P<0.01)和36.11%(P<0.05)。实验组细胞cyclin D1和MMP-9的m RNA水平分别降低39.90%(P<0.01)和77.36%(P<0.05),同时cyclin D1、MMP-9和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)的蛋白水平分别降低44.00%(P<0.05)、47.06%(P<0.01)和32.88%(P<0.05)。结论:BCL6B可抑制结直肠癌LoVo细胞的增殖和迁移,其机制可能涉及PI3K/AKT信号通路的抑制。

BCL6B抑制结直肠癌细胞HCT116增殖、迁移及其可能机制研究

目的:探讨B细胞淋巴瘤6B(B cell lymphoma 6 member B,BCL6B)对人结直肠癌细胞HCT116增殖、迁移的影响及机制。方法:采用定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,q PCR)和Western blot检测和比较人正常肠上皮细胞FHC及人结直肠癌细胞HCT116中BCL6B的内源性表达;用脂质体法将pc DNA3.1-BCL6B转入HCT116细胞,同时设转入空载体的对照组;运用MTT法、流式细胞术、划痕愈合及Transwell试验检测BCL6B对癌细胞增殖、周期及迁移能力的影响;采用Western blot检测细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、磷酸化的糖原合成酶激酶-3β(p-GSK3β)、细胞周期蛋白(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶-7(matrix metalloproteinase-7,MMP-7)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达。结果:q PCR和Western blot结果显示,与正常肠上皮细胞FHC相比,BCL6B在结直肠癌细胞HCT116中呈明显低表达(P=0.017);转染pc DNA3.1-BCL6B后,细胞内BCL6B表达水平明显升高(P=0.000)。与阴性对照组相比,BCL6B组HCT116细胞4 d时的增殖活性降低41.79%(P=0.040),且G1期细胞百分比增加62.09%(P=0.001);同时,BCL6B组HCT116细胞48 h划痕愈合率及穿膜细胞数均明显减少(P=0.001)。Western blot结果表明,BCL6B组HCT116细胞内β-catenin、p-GSK3β、Cyclin D1和MMP-7的表达水平较阴性对照组分别降低65.66%(P=0.028)、62.03%(P=0.001)、60.87%(P=0.021)和50.88%(P=0.030),E-钙黏蛋白的表达升高63.64%(P=0.018)。结论:BCL6B可抑制结直肠癌细胞HCT116的增殖及迁移,其机制可能涉及Wnt/β-catenin通路的抑制。

bcl6b基因转染对人食管癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨外源性bcl6b基因表达对人食管癌细胞生物学行为的影响.方法:应用PCR方法扩增bcl6b基因编码区,利用脂质体转染技术将真核表达重组体pcDNAbcl6b质粒和空载体pcDNA3.1质粒分别导入KYSE180细胞,经G418筛选后获得稳定转染细胞克隆,Western blot检测BCL6B和P53在KYSE180细胞中的表达变化.通过流式细胞术(FCM)分析其细胞周期及其凋亡的变化,绘制生长曲线和克隆形成试验检测重表达bcl6b基因后食管癌细胞的增殖变化.结果:成功获得了稳定表达外源性bcl6b基因的KYSE180细胞系,与转染空白载体组比较,转染bcl6b基因的细胞,细胞周期中G1/G0期比例明显增加(BCL6B:47.85%±1.53%vs Vector:40.62%±1.07%,P<0.05),S期比例减少(BCL6B:34.40%±1.30%vs Vector:42.31%±0.66%,P<0.01),细胞凋亡率升高(BCL6B:11.74%±0.99%vs Vector:2.43%±0.70%,P<0.01);同时P53和P21蛋白的表达水平明显升高.转染bcl6b基因的细胞的生长速度较空载组比明显减慢.结论:BCL6B可能通过上调P53和P21蛋白的表达水平从而抑制KYSE180细胞的恶性生物学行为.

结肠癌患者BCL6B基因启动子区域甲基化检测结果分析

目的探讨结肠癌患者BCL6B基因启动子区域甲基化情况。方法方便选取2018年6月—2020年6月该院收治的56例结肠癌患者,取其癌组织与癌旁组织,另取同期同数量在该院做健康检查正常人的肠镜活检组织。比较其BCL6B基因启动子区域甲基化率,并分析影响因素;再比较3种组织的BCL6B基因启动子区域甲基化状况。结果Ⅰ、Ⅱ期患者甲基化率(50.00%)明显低于Ⅲ、Ⅳ期(81.25%)患者,差异有统计学意义(χ^(2)=6.140,P<0.05);高分化患者甲基化率(44.44%)明显低于中、低分化(78.95%)患者,差异有统计学意义(χ^(2)=6.667,P<0.05);而有淋巴转移患者甲基化率(84.85%)明显高于无转移(43.48%)患者,差异有统计学意义(χ^(2)=10.635,P<0.05);Logistic分析显示,TNM分期、分化程度以及有无转移均为BCL6B基因启动子区域甲基化率的独立影响因素(P<0.05)。正常结肠组织中未发现甲基化情况;结肠癌细胞系中RKO、HT29完全甲基化;56例患者中甲基化率达67.86%。结论BCL6B基因在结肠癌呈高甲基化,与TNM分期、分化程度以及有无淋巴转移密切相关,经去甲基化药物处理后BCL6B表达上升,结肠癌的发病机制与BCL6B基因启动子区域甲基化相关。

BCL6B基因启动子区域甲基化与结肠癌的关系研究

目的探讨BCL6B基因启动子区域甲基化与结肠癌的关系。方法选取在广州军区武汉总医院2013年1月至2015年1月经病理检查确诊为结肠癌53例患者的癌组织和癌旁组织,来自该院实验室的结肠癌细胞株和正常人外周血淋巴细胞及正常结肠黏膜组织。比较结肠癌组织、癌旁组织和正常结肠黏膜组织BCL6B甲基化状况的差异;比较结肠癌组织和癌旁组织中BCL6B表达和免疫染色评分的差异。分析各病理参数对结肠癌组织BCL6B甲基化的影响。结果 53例结肠癌组织中41例发生BCL6B启动子区域甲基化,甲基化率为77.36%;结肠癌细胞系RKO、HT29为完全BCL6B甲基化,其余为半甲基化;正常结肠黏膜组织未发现甲基化。53例结肠癌组织中有45例(84.91%)BCL6B低表达或表达缺失;53例癌旁组织中有9例(16.98%)BCL6B低表达或表达缺失,两种组织BCL6B表达的差异具有统计学意义(P<0.05);结肠癌组织的染色评分低于癌旁组织[(4.35±2.15)分vs(6.28±3.46)分,P<0.05]。结肠癌组织BCL6B甲基化率在有淋巴结转移、高TNM分期、低分化程度患者中较无淋巴结转移、低TNM分期、高分化程度患者中明显增高,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论结肠癌组织BCL6B启动子区域甲基化高于癌旁组织和正常结肠黏膜组织,BCL6B甲基化与淋巴结转移、TNM分期、分化程度相关。

BCL6B基因启动子区域甲基化与结肠癌的关系

目的检测结肠癌患者BCL6B基因启动子区域甲基化的情况,探讨其相关的临床意义。方法调取2014年1月至2015年12月收治的结肠癌患者108例组织蜡块,另取同期因结肠良性病变切除的结肠组织标本30例作为对照。甲基化特异性聚合酶链式反应(PCR)检测BCL6B基因启动子区域甲基化。结果结肠癌患者中BCL6B基因启动子区域甲基化率为38.9%(42/108),显著高于对照组的16.7%(5/30)(P<0.05)。结肠癌患者男、女性别和不同年龄之间BCL6B基因启动子区域甲基化率无统计学差异(P均>0.05)。Ⅲ、Ⅳ期临床分期患者BCL6B基因启动子区域甲基化率为44.8%(26/58),显著高于Ⅰ、Ⅱ期临床分期患者的32.0%(16/50)(P<0.05)。有淋巴结转移患者BCL6B基因启动子区域甲基化率为45.9%(28/61),显著高于无淋巴结转移患者的29.8%(14/47)(P<0.05)。肿瘤中、低分化患者BCL6B基因启动子区域甲基化率43.9%(29/66),显著高于高分化患者的31.0%(13/42)(P<0.05)。结论 BCL6B基因启动子区域在结肠癌组织中高甲基化,BCL6B基因启动子区域高甲基化与结肠癌的临床分期、肿瘤分化程度以及有无淋巴结转移密切相关。

两种农药对青鳉抗氧化酶活性和bcl6b基因表达的影响

为了解阿特拉津和毒死蜱对青鳉(Oryzias latipes)肌肉组织中抗氧化酶活性和B细胞淋巴瘤6B基因(B cell CLL/lymphoma 6B,bcl6b)表达的影响,实验通过不同染毒浓度的阿特拉津、毒死蜱,二者单独或共同染毒,在不同的染毒时间检测其对青鳉肌肉组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性及bcl6b mRNA表达的影响。结果表明:青鳉肌肉组织中的抗氧化酶(SOD,GSH-PX)活性随染毒农药浓度的升高而显著下降,bcl6b mRNA相对表达则显著升高;30 d恢复处理后,与染毒末期相比,恢复末期中浓度组和高浓度组的这两种酶活性显著升高,bcl6b mRNA表达则显著降低。这一结果证实该两种农药单独或共同染毒,会对青鳉产生毒性作用,使青鳉抗氧化酶(SOD,GSHPX)活性和bcl6b mRNA表达发生显著变化,bcl6b mRNA表达与抗氧化酶水平的变化趋势相反;环境条件改善后,上述2种酶的活性和bcl6b mRNA表达会得到有效恢复。

小分子化合物WK429抑制炎症和降低体液免疫反应的研究

生发中心(germinal center,GC)的形成和自身抗体的产生常见于多种自身免疫性疾病。在GC形成过程中,滤泡辅助性T细胞(T follicular helper cell,Tfh cell)和生发中心B细胞(germinal center B cell,GC B cell)是不可或缺的。B细胞淋巴瘤6(B cell lymphoma 6,BCL6)是Tfh细胞和GC B细胞的重要转录因子,这两种细胞类型中BCL6的缺失会导致GC反应的终止。本文以BCL6为靶点,以均相时间分辨荧光(homogeneous timeresolved fluorescence,HTRF)为筛选方法,发现了靶向BCL6BTB结构域的新型高效小分子抑制剂WK429。在体外,WK429抑制外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)和Raw264.7细胞产生炎症因子IL-6和TNF-α,抑制Raw264.7细胞表达趋化因子CCL2和CCL7,也抑制Tfh细胞和GC B细胞的形成及浆细胞的形成和分裂;在体内,WK429同样抑制Tfh细胞、GC B细胞和浆细胞的形成,同时明显降低抗体IgG的产生。本研究显示,WK429能抑制炎症和降低体液免疫反应,这为体液免疫反应过强的自身免疫性疾病的预防或治疗提供了新的策略。