慢性HBV感染患者bcp/pc区点突变模式、pres区缺失及其临床意义

目的阐明HBV(hepatitis B virus,HBV)感染患者不同临床阶段bcp/pc(basic core promoter,BCP/precore,PC)点突变模式及pres区缺失突变规律,并探讨其临床意义。方法慢性HBV感染患者180例,其中,无症状HBV携带者13例,慢性乙型肝炎者75例,HBV相关肝硬化及肝癌分别为62、30例。Qiagen法提取血清HBV-DNA,常规PCR扩增目的基因,纯化PCR产物ABI377DNA自动测序仪直接双向测序。直接测序失败者,回收目的 DNA与PMD-18T载体连接,克隆质粒双向测序。DNAStar软件包的SeqMan软件进行生物信息分析。结果 Bcp/pc区点突变包括nt1753、nt1762、nt1764、nt1776、nt1803、nt1846、nt1896。HBV携带者、慢性乙型肝炎、HBV相关肝硬化及肝癌患者nt 1762(nt 1764)点突变率分别为7.7%、68.0%、72.7%(68.0%)及90.9%(81.8%),肝癌患者G1896A突变频率占54.6%。A1762T+G1764A联合突变占36%;A1762T、G1764A、G1896A联合突变占11%;T1753A/C、A1762T、G1764A、G1896A发生率为7%。克隆测序显示,肝硬化及肝癌患者bcp区起始点A1727G点突变率分别为72%、63%。HBeAg阴性患者存在更多的基因变异(P=0.022),G1776A和G1896A突变是HBeAg阴性的独立预测因素(P<0.05)。Bcp区点突变与HBeAg阴性无明显关系。肝硬化和肝癌患者pres基因缺失突变频率最高,肝癌及肝硬化患者pres1、pres2及pres1+s2缺失频率分别为7.1%、71.4%、7.1%及41.2%、58.8%、29.4%(P<0.05)。结论 A1727G、A1762T、G1764A及A1762T/G1764A联合突变、pres缺失在HBV相关肝硬化及肝癌患者多见,可能是肝脏疾病进展的危险因素,G1776A和G1896A突变是HBeAg阴性的独立预测因素。Bcp/pc点突变及pres区缺失可能为肝癌发生的早期预测因素,值得进一步研究。

海府地区慢性HBV感染者病毒基因型与BCP/PC区变异的研究

目的:探讨海府地区慢性HBV感染者病毒基因型与BCP/PC区变异的特点。方法:选取2013年1月至2015年12月期间海口市人民医院住院治疗的200例慢性HBV感染者作为研究对象,依照HBV感染自然史分为慢性HBV携带组、HBe Ag(+)慢性乙型肝炎组、非活动性HBs Ag携带组和HBe Ag(-)慢性乙型肝炎组,各50例。PCR-RELP法检测HBV基因型和PC/BCP变异。比较4组患者HBV基因型的分布情况及HBV变异类型的比率。结果:(1)4组患者HBV基因型的分布情况均以B型为主,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)PC变异发生于基因型B,BCP变异发生于基因型C,随着HBV感染自然史的进展,PC变异的比率并未出现太大变化(37.50%vs 48.65%vs 39.40%vs35.48%),差异无统计学意义(P>0.05);但BCP变异的比率却逐渐增高(30.00%vs 61、65%vs 76.47%vs 89.47%),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:海府地区慢性HBV感染进程的4个阶段(免疫耐受期、免疫清除期、免疫不全期和再活动期)均以B型基因为主,但是随着HBV感染自然史的进展,BCP变异比率均逐渐增高,表明BCP变异可能是肝细胞癌进程中的重要事件。

儿童感染乙型肝炎病毒BCP/PC区基因突变特征及其与基因型的关系

目的分析儿童感染乙型肝炎病毒(HBV)基本核心启动子和前C(BCP/PC)区在不同基因型样本中的突变特征及其临床意义。方法收集2011年至2018年期间就诊的294例儿童和92例成人慢性HBV感染患者,PCR扩增HBV BCP/PC区并直接测序,比对分析该区段基因突变情况。两样本均数比较采用t检验,非参数资料的比较采用Wilcoxon-Mann-Whitney检验,两组资料率的比较采用χ^2检验或Fisher精确检验。结果儿童和成人患者均以B基因型为主,分别占76.9%、71.7%,C基因型分别占23.1%、28.3%。在儿童组,nt 1679、1721、1753、1757、1758、1762、1764、1775、1856及1858十个核苷酸位点在C基因型样本中的突变率显著高于B基因型样本,如G1721A、C1856T和T1858C突变在C基因型样本中的突变率分别为30.9%、16.2%和30.9%,而在B基因型样本中的突变率则分别为0.4%、0、0,P<0.001。在成人组,只有nt 1679、1758、1775三个位点在C基因型样本中的突变率显著高于B基因型样本。这些位点多以联合突变的模式被检出,如T1858C突变共检出21例,其中20例为G1721A/A1775G/T1858C三联突变,10例为G1721A/A1775G/C1856T/T1858C四联突变,且这些联合突变模式仅在儿童C基因型样本中被检出,在儿童B基因型及成人样本中均无检出。进一步分析发现,G1721A/A1775G/T1858C三联突变组患者年龄明显低于无突变组患儿[(4.58±2.53)岁对比(6.53±4.02)岁,P=0.012)],血清HBV DNA滴度明显高于无突变组患儿[(7.57±2.03)log10拷贝/ml对比(6.61±2.11)log10拷贝/ml,P=0.045)]。结论儿童感染HBV BCP/PC区在C基因型样本中的突变频率显著高于B基因型样本;与基因型相关的联合位点突变主要见于C基因型儿童样本,且与较低的患者年龄和较高的HBV DNA滴度相关。

不同肝病患者乙型肝炎病毒BCP/PC区变异研究

目的探讨不同肝病患者乙型肝炎病毒BCP/PC区突变情况。方法选择乙型肝炎患者245例,其中慢性乙型肝炎(CHB)98例、慢性重症肝炎(CSHB)68例、肝硬化(LC)34例及肝癌(HCC)45例,荧光定量PCR测定其基因型,巢氏PCR扩增BCP/PC区基因,分析其在各个肝病组中的分布情况以及与基因型和HBeAg的关系。结果在所检测的245例患者血清中,检测出变异株134例,占54.7%;CSHB组、HCC组和LC组在A1762T/G1764A、G1896A以及联合变异中,其变异频率明显高于CHB组,差异有统计学意义(P<0.01)。CSHB组和LC组比较差异无统计学意义(P>0.05)。C基因型明显高于B型和B+C型的HBV BCP区变异频率,三者比较差异具有统计学意义(P<0.05)。HBeAg阴性组变异率明显高于HBeAg阳性组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HBV BCP/PC变异中,CSHB组、HCC组和LC组变异频率明显高于CHB组,HBV BCP/PC变异是导致HBeAg阴性的主要机制之一。

HBV前C／BCP区变异对HBeAg阳性慢乙肝患者干扰素治疗早期应答的影响

目的：研究HBV DNA前C区1896位变异，BCP区1762/1764位变异与干扰素α治疗应答的关系。方法以41例接受干扰素治疗的HBeAg阳性慢性乙型肝炎（慢乙肝）患者为研究对象。治疗前取患者外周血清，采用PCR 技术扩增前C区、BCP区，并测序分析。同时监测治疗0、12、24周患者外周血ALT、HBsAg、HBeAg、HBV DNA水平。结果①PC/BCP区变异（突变型，non-WT）患者HBeAg转阴率（ n＝13，72．2％）高于未发生PC/BCP变异（野生型，WT）患者（n＝4，28．8％）（P＝0．014）；②突变组HBsAg降低（ n＝5，56．7％）、HBVDNA转阴（n＝8，53．5％），完全应答（ n ＝5，62．5％），野生组 HBsAg 降低（ n ＝6，43．3％）、HBV DNA 转阴（ n ＝7，46．7％），完全应答（n＝3，37．5％），2组间无明显差异。结论突变型患者HBeAg转阴率高于野生型患者。