自贡地区HBV基因BCP区1762/1764及前C区1896位点突变与HBV相关性肝癌的相关性研究

目的通过分析自贡地区乙肝患者乙型肝炎病毒HBV基因BCP区1762/1764及前C区1896位点的突变情况,探讨其与HBV相关性肝癌的关系。方法收集2015年9月至2018年6月141例经本院确诊的乙肝性相关疾病患者血清标本(HBV DNA≥103IU/mL):慢性乙肝(CHB组)50例、肝硬化(LC组)45例、肝癌(HCC组)46例,并收集临床相关资料。采用荧光定量PCR法检测患者的HBV DNA水平,多通道荧光PCR法检测HBV基因型,然后采用ARMS-PCR法检测HBV基因BCP区1762/1764及前C区1896突变情况。采用SPSS17.0软件对数据进行统计学分析。结果HCC组和CHB组在e抗原阳性率、HBV DNA水平及HBV DNA>105IU/mL方面对比发现差异均具有统计学意义(P<0.05);HCC组和LC组在e抗原阳性率方面比较发现差异无统计学意义(P>0.05),而HBV DNA水平方面差异具有统计学意义(P<0.05)。男性、女性乙肝患者HBV基因BCP区1762/1764位点突变率分别为67.0%、57.1%(P>0.05),前C区1896位点突变率分别为61.6%、66.7%(P>0.05)。HCC组患者、LC组患者、CHB组患者的HBV基因BCP区1762/1764突变率分别为91.3%、84.4%、22%,HCC组与CHB组比较差异具有统计学意义(P<0.05),而HCC组与LC组比较差异无统计学意义(P>0.05);HBV基因前C区1896突变率分别为84.8%、62.2%、42.0%,HCC组与CHB组、LC组比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。HCC组患者的HBV基因前C区1896和BCP区1762/1764位点同时突变率为78.3%,要高于LC组和CHB组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。HBV基因型方面比较,无论是基因B型还是C型的乙肝相关患者,疾病进程较重(HCC组、LC组)的受试者携带BCP区1762/1764突变型或前C区1896突变型的比例都要高于慢性乙肝患者(CHB组)。结论自贡地区HBV基因BCP区1762/1764和前C区1896突变率高,无性别和基因型差异,其中HBV基因BCP区1762/1764位点和前C区1896位点联合突变与HBV相关性HCC发生可能存在一定关系。

HBV基因BCP区1762/1764和前C区1896突变与GGT/ALT联合分析对HBV-HCC的早期诊断价值研究

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)基因核心启动子(BCP)区1762/1764和前C区1896基因突变与血清γ-谷氨酰转移酶(GGT)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)联合分析对HBV相关性肝细胞癌(HBV-HCC)的诊断价值。方法收集2015年9月至2018年6月经该院确诊(HBV DNA≥1000 IU/mL)的HBV相关疾病患者159例,其中慢性乙型肝炎(CHB)63例,肝硬化50例,HBV-HCC 46例;比较各组患者GGT与ALT水平;采用扩增阻滞突变系统荧光PCR(ARMS-PCR)法检测HBV基因BCP区1762/1764和前C区1896突变。结果HBV-HCC组患者的血清GGT水平和GGT/ALT比值均高于肝硬化组和CHB组,差异均有统计学意义(P<0.01)。HBV-HCC组、肝硬化组、CHB组的HBV基因BCP区1762/1764突变率分别为91.30%、84.00%、22.22%,HBV-HCC组与CHB组比较差异有统计学意义(P<0.05),而HBV-HCC组与肝硬化组比较差异无统计学意义(P>0.05);HBV基因前C区1896突变率分别为84.78%、64.00%、39.68%,HBV-HCC组与CHB组和肝硬化组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。HBV基因BCP区1762/1764突变型与未突变型和前C区1896突变型与未突变型的GGT/ALT比值比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。诊断HBV-HCC的受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,BCP区1762/1764突变检测联合GGT/ALT比值时,诊断灵敏度为71.70%、特异度为83.20%;前C区1896突变检测联合GGT/ALT比值时,诊断灵敏度为87.00%、特异度73.50%;BCP区和前C区突变检测联合GGT/ALT比值时,诊断灵敏度为93.50%、特异度为74.30%。结论HBV基因BCP区1762/1764突变、前C区1896突变和GGT/ALT比值均与HBV-HCC发生相关,三者联合分析对HBV-HCC的早期诊断具有临床应用价值。

HBeAg阳性慢性乙型肝炎初治患者BCP区A1762T/G1764A变异株定量检测结果分析

目的探讨HBeAg阳性慢性乙型肝炎初治患者BCP区A1762T/G1764A变异株定量检测的临床意义。方法通过单标记探针联合选择性阻断实时荧光定量PCR法精确定量检测97例HBV DNA阳性慢性乙型肝炎初治患者BCP区A1762T/G1764A变异株,并进行统计学分析。结果 97例HBeAg阳性患者变异株的含量会随着HBV DNA水平的升高而降低(P<0.01)。变异株含量同时与HBeAg水平呈显著相关,随着HBeAg水平的升高,变异株含量降低(P<0.01)。结论对HBV感染者的BCP区A1762T/G1764A变异株进行定量检测,可对患者病情的可能发展进行预测,从而可以采取有效的防治措施。

慢性乙型肝炎患者HBV前C区G1896A、核心启动子1762/1764变异与乙型肝炎自然史、血清HBsAg定量及疾病程度的相关性

目的研究HBV前C区G1896A、核心启动子1762/1764变异与HBV自然史、血清HBsAg水平间的相关性及对疾病严重程度的影响。方法分别各选取40例HBV野生株、前C区G1896A或核心启动子1762/1764变异以及两者联合变异的慢性乙型肝炎感染者为研究对象。采用PCR反向点杂交技术检测HBV前C区G1896A位点、核心启动子1762/1764变异及HBV基因分型。同时检测HBsAg定量、HBeAg、HBV DNA定量、肝脏生化指标等。结果(1)HBV前C区G1896A、核心启动子1762/1764变异患者的年龄、ALT高于野生株感染者(P<0.001),Alb低于野生株感染者(P<0.001)。(2)HBV自然史免疫耐受期以野生株感染为主(P<0.001),免疫清除期、低(非)复制期野生株及PC G1896A或/和BCP1762/1764变异株差异无统计学意义(P>0.05),再活动期以PC G1896A或/和BCP1762/1764变异株为主(P<0.001)。(3)PC G1896A或/和BCP1762/1764变异株的HBsAg水平(lgIu/mL)、HBeAg阳性率较野生株组降低(P<0.001),基因C型、HBV DNA水平(≥6 lg拷贝/mL)较野生株组差异无统计学意义(P>0.05)。(4)HBV PC G1896A或/和BCP1762/1764变异中肝硬化患者多于野生株(P<0.05)。结论慢性HBV感染者前C区G1896A、核心启动子1762/1764变异与乙型肝炎自然史、HBsAg水平、HBeAg的状态及疾病严重程度相关。

乙型肝炎病毒X区T^1762－A^1764和前C区A^1896变异对干扰素治疗的影响

目的：研究乙型肝炎病毒(HBV)基因组X区和前C区热点变异对干扰素(IFN)治疗的影响。方法：采用半套式聚合酶链反应(HN-PCR．)结合限制性片段长度多形态(RFLP)技术检测20例慢性乙型肝炎患者IFN治疗前病毒核苷酸序列的突变。结果：A^1896变异株不影响治疗结束时应答率，6／8例T^1762-A^1764变异株感染者为应答者。停药后12mo时，l例T^1762-A^1764变异株感染者由无应答者变为应答者：在复发者中，既有T^1762-A^1764变异株感染者，又有A^1896变异株感染者，或两者同时存在。结论：T^1762-A^1764变异者近期疗效好，而A^1896变异者不影响近期疗效；T^1762-A^1764变异者远期疗效还有待进一步观察。

慢性乙型肝炎C基因启动子1762/1764双位点和前C区1896位点变异的检测

目的了解慢性乙型肝炎病毒C基因启动子1762/1764双位点变异和前C区1896位点变异的情况以及对血清学的影响,并观察出现1762/1764双位点变异后拉米夫定治疗疗效。方法采用微板核酸杂交-ELISA方法和PCR法检测162例慢性乙型肝炎C区基因启动子1762/1764双位点变异和前C区1896位点变异,35例慢性乙型肝炎患者服用拉米夫定抗病毒治疗,观察肝功能、HBV复制指标、病毒变异等变化。结果慢性轻型乙肝,慢性中、重型乙肝和肝硬化3组1762/1764双位点变异率分别为14.9%,40.7%和39.0%,1896位点变异率分别为11.9%,40.7%和65.9%;HBeAg+和HBeAg-2组1762/1764变异率分别为31.1%和28.4%,1896变异率分别为5.4%和60.2%;10例出现1762/1764双位点变异的患者接受拉米夫定治疗12月末,2例复发,并检测出变异株和YMDD变异,其中1例发展为重型肝炎并死亡;24月末,4例复发,并检测出变异株。结论HBV CP 1762/1764变异与病情轻重有一定关系,不能完全中止HBeAg的复制,不同于前C区1896位点对血清学的影响;拉米夫定治疗可以抑制变异株,但随着疗程的延长,变异株又会重新出现。

我国常见乙型肝炎病毒基因型与基本核心启动子及前C区突变关系的初步研究

收集81份HBV DNA阳性血清标本,经PCR扩增和序列测定确定其中有50份属于基因型C,31份属于基因型B;C基因型的基本核心启动子BCP T1762/A1764的突变率(38%)明显高于B基因型(12.9%,P<0.05);前C区A1896的突变在B、C两基因型间无显著性差异,B基因型为9.7%,C基因型为12%,P>0.05;HBeAg的表达与否与BCP双突变或前C区A1896突变均无明显相关性。经定量PCR检测证明,HBeAg阳性组中的HBV DNA含量明显高于抗-HBe阳性组,P<0.05。组内BCP双突变株和野生株及前C1896突变株和野生株的HBV DNA含量无显著性差异。

乙型肝炎病毒基因组C区启动子突变位点新型检测方法的建立、验证及初步应用

目的 利用错配扩增和荧光PCR技术,建立一种针对乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）基因组C区启动子（basal core promoter,BCP）1762/1764突变位点的新型检测方法,并对该方法进行验证及临床评价。方法 根据NCBI登录的HBV A-H型基因序列（以GenBank号为AB033556.1的C基因型作为标准参考序列）合成野生型和突变型标准品序列,测序后连接至pMD-18T载体上,构建质粒标准品,设计引物、探针及合适的突变检测体系,确定检测的线性范围;对建立的方法进行灵敏度、重复性、特异性、稳定性验证;分别用本实验建立的ARMS-PCR法和基因Sanger测序法（金标准）检测132份慢性乙型肝炎患者血液样本的基因位点是否发生突变,并分析ARMS-PCR法的灵敏度和特异度。结果ARMS-PCR法能检测1 × 10^2- 1 × 10^9 copies/ml的野生型和突变型质粒;野生型和突变型样本检测的Ct差值（驻Ct）在7以上,且能检出最低达1%突变含量的混合质粒和样本;该方法灵敏度较高,重复性、特异性、稳定性良好;其检测132份慢性乙型肝炎患者血液样本1762/1764位点突变阳性率为41.7%,明显高于Sanger测序法检测结果（P〈0.05）。结论 建立的ARMS-PCR法能很好地用于评估乙肝患者患肝癌的风险,且较Sanger测序法检测精度更高,更适合于临床推广。

慢性乙型肝炎患者YMDD变异合并前C/C区启动子变异的临床研究

目的探讨慢性乙型肝炎患者中拉米夫定诱导的 YMDD 变异和前 C 区1896位核苷酸以及 C区启动子1762和1764位核苷酸变异的检出率及其临床意义。方法采用基因芯片技术检测拉米夫定治疗6个月以上的122例慢性乙型肝炎患者血清中前 C 区1896位以及 C 区启动子1762和1764位核苷酸变异发生率。结果 122俐慢性乙型肝炎患者中检出40例 YMDD 变异阳性患者,检出率为32.8%。发生 YMDD变异后,HBV DNA 反跳,ALT 和 AST 增高,差异有统计学意义(P<0.01)。YMDD 变异阳性患者前 C 区1896位和 C 区启动子1762和1764位核苷酸变异检出率显著高于无 YMDD 变异的慢性乙型肝炎患者,差异有统计学意义(P<0.01)。YMDD 变异阳性伴前 C 区1896位以及 C 区启动子1762和1764位核苷酸变异患者与无前 C 区1896位以及 C 区启动于1762和1764位核苷酸变异的 YMDD 变异阳性患者比较,病情容易加重.易发展为重型肝炎或肝硬化,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论拉米夫定诱导的 YMDD 变异患者容易发生前 C 区1896位/C 区启动子1762和1764位核菅酸变异,但与病情加重和预后无相关性。

HBV基本核心启动子区和前C区变异与肝病进展的关系

乙型肝炎病毒（HBV）感染是我国严重的卫生健康问题，目前大约有1．7亿慢性HBV感染者，约占世界慢性HBV感染者的一半。HBV基因组结构为部分环状双链DNA，全长约3．2kb，其核心启动子对于HBV的复制和形态构成发挥了关键性作用。