HBV DNA C区BCP双突变PCR-FP检测方法的建立及其临床应用

目的 :建立简便的 HBV DNA序列中 BCP双突变的检测方法。方法 :采用终点终止法和偏振光检测技术进行点突变的检测。首先对 HBVC区基因进行 PCR扩增 ,然后用特异探针与扩增产物中待测核苷酸的下游序列杂交 ,使探针的 3’端可以在 DNA聚合酶的催化下 ,依据其互补链上的待测核苷酸连接上一个标有特定荧光素的 d NTP,然后检测该3’端带有荧光素的探针 ,根据检测到的荧光素种类和偏振光的强度可以判定待测点是何种核苷酸。结果 :该方法可以检测出 HBV基因序列中 BCP双突变核苷酸类型 ,可以检测 1个拷贝的模板 ,并且可以从 BCP野生型株 DNA序列中检出 5 % BCP双突变 DNA序列 ,对 76例 HBV DNA阳性患者进行检测 ,结果 HBV BCP基因双突变率为 5 3.9( 4 1 /76)。结论 :该技术可以对血清中 HBV DNA C区 BCP双突变。

HBV BCP区1762/1764和1896突变位点检测新技术研究

目的:利用错配扩增和荧光PCR原理,建立一种针对HBV BCP区1762/1764和前C区1896突变位点的新型检测方法——错配扩增突变分析PCR法(MAMA-PCR),并对该方法进行临床评价。方法:a)MAMAPCR突变检测方法性能评估:以野生和突变性阳性参考品作为模板检测3次,分析该方法稳定性;将突变型和野生型质控品梯度比例混合,分析该方法检测混合感染的检测效率。b)测序法、商品化试剂盒与本方法同时检测样本并对MAMA-PCR方法做出评价。结果:MAMA-PCR 3次检测重复性良好,CV值均小于5%,且可稳定检出含1%突变含量的混合样本。132例HBV样本中,1762/1764双突变位点测序法检出67例,ARMS-PCR试剂盒检出69例,MAMA-PCR检出69例,突变检出率分别为50.8%、52.3%和52.3%;1896突变测序法检出39例,ARMSPCR试剂盒检出41例,MAMA-PCR检出42例,突变检出率分别为29.5%、31.1%和31.8%。结论:MAMA-PCR检测方法性能稳定,突变检出率高于测序法,与商用试剂盒基本一致,可用于临床乙肝患者BCP区1762/1764双突变和前C区1896突变位点的快速检测。

HBV基因型及A1762T/G1764A双位点变异在肝癌患者中的临床意义

目的:研究肝细胞癌(HCC)患者乙型肝炎病毒(HBV)基因型与基本核心启动子(BCP)基因区A1762T/G1764A双位点变异(BCP区双突变)之间的关系,探讨HCC的发病机制。方法:选择40例HCC患者作为研究组,40例慢性乙型肝炎(CHB)患者作为对照组,采用多对型特异性引物PCR扩增法进行基因分型及HBV基因多态性芯片检测BCP区A1762T/G1764A双位点变异。结果:40例HCC患者中有30例HBV DNA定量阳性,平均对数值为(6·53±1·31)copy/ml,将30例HBV DNA定量阳性的HCC及40例CHB患者的血清进行HBV基因分型及基因变异检测,结果显示30例HCC中HBV B基因型5例(16·7%),C基因型25例(83·3%);BCP区双突变共有20例(67·7%),其中B基因型1例,C基因型19例,BCP双突变率在B基因型和C基因型中分别为20%(1/5)和76%(19/25);40例CHB患者中B基因型32例(80%),C基因型8例(20%);BCP区双突变共有13例,其中B基因型8例,C基因型5例,BCP双突率在B基因型和C基因型中分别是25%(8/32)和62·5%(5/8)。结论:肝细胞癌的发生与BCP区A1762T/G1764A双位点变异有关,多发生在HBV C基因型的患者。