熊果酸通过调控雌激素受体抑制甲状腺癌BCPAP细胞增殖、迁徙、侵袭的机制研究

目的:观察熊果酸对雌激素受体ERα、ERβ表达的影响,研究熊果酸抑制甲状腺癌BCPAP细胞增殖、迁徙、侵袭的机制。方法:Westernblot实验检测人正常甲状腺细胞(Nthy-ori3-1细胞)与甲状腺癌BCPAP细胞中ERα、ERβ的蛋白表达,CCK-8实验检测熊果酸对甲状腺癌BCPAP细胞增殖的影响,细胞划痕实验、Transwell实验检测熊果酸对甲状腺癌BCPAP细胞迁徙、侵袭能力的影响。Western blot实验检测熊果酸对甲状腺癌BCPAP细胞雌激素受体ERα、ERβ表达的影响。结果:Nthy-ori3-1细胞与BCPAP细胞比较,ERα的表达水平较低(P<0.05),ERβ的表达水平较高(P<0.05)。不同浓度的熊果酸(4、8、16、32、64μmol/L)对BCPAP细胞增殖具有抑制作用,呈时间和浓度依赖性(P<0.05)。同时间点,B4组(4μmol/L)、B8组(8μmol/L) BCPAP细胞迁移力低于B0组(0μmol/L)(P<0.05)。与B0组比较,B4组、B8组BCPAP细胞侵袭数明显降低(P<0.05)。熊果酸作用24 h后,B4组、B8组ERα表达水平低于B0组(P<0.05),ERβ表达水平高于B0组(P<0.05)。结论:熊果酸可能通过雌激素受体ERα、ERβ降低甲状腺癌BCPAP细胞增殖、迁徙、侵袭的能力。

芹菜素对甲状腺癌BCPAP细胞生长及细胞周期的影响

研究芹菜素对人乳头状甲状腺癌BCPAP细胞生长的抑制作用及对细胞周期的影响。采用MTT法检测不同浓度芹菜素在24h对BCPAP细胞的抑制作用,以及12.5,25.0,50.0μmol/L芹菜素分别在24,48,72h对BCPAP细胞的抑制作用;通过明场细胞形态学照片分析,对比不同浓度芹菜素对BCPAP细胞形态的影响,评价其对细胞生长的抑制作用。利用流式细胞仪检测BCPAP细胞周期和凋亡。结果表明,不同浓度（12.5~100.0μmol/L）芹菜素对BCPAP细胞的毒性有明显剂量和时间依赖性,其24h的IC50值为40.65μmol/L。芹菜素对BCPAP细胞的形态学变化有显著影响,高浓度芹菜素强烈抑制BCPAP细胞数目的增长。芹菜素可使BCPAP细胞周期的构成发生明显的变化并诱导细胞凋亡。芹菜素对BCPAP细胞有较明显的细胞毒性和生长抑制作用,其抑制机制可能是使BCPAP细胞生长停滞在G2/M期并诱导细胞凋亡,使得细胞生存率下降,从而抑制细胞活性和数目增长。

TWS119对人NK细胞增殖和杀伤甲状腺癌BCPAP细胞的影响

目的探讨糖原合酶激酶-3β抑制剂TWS119对NK细胞增殖和杀伤功能的影响。方法从健康人外周血中分离单个核细胞（PBMCs）,加入到NK完全培养基培养,分别于第1d和第7d时,加入TWS119（0~8.0μmol/L）诱导培养。培养10 d后,用CCK-8法测定NK细胞增殖和杀伤甲状腺癌BCPAP细胞的能力;采用流式细胞术检测各组NK细胞纯度、颗粒酶和穿孔素的表达。结果培养10d后,第1天加入TWS119诱导组对NK细胞纯度和增殖呈现抑制作用;而第7天加入在一定浓度范围的TWS119诱导培养时能促进NK细胞的增殖和杀伤指标穿孔素的表达及对甲状腺癌BCPAP细胞的体外杀伤活性。结论 TWS119在一定浓度范围能促进γδT细胞增殖和增强对甲状腺癌BCPAP细胞的杀伤功能。

地榆皂苷Ⅰ诱导人甲状腺乳头状癌细胞BCPAP凋亡的实验研究

目的研究地榆皂苷Ⅰ对人甲状腺乳头状癌BCPAP细胞作用及相关的分子机制。方法 MTT法检测地榆皂苷Ⅰ对BCPAP细胞增殖的作用;AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞凋亡;Western blot法检测凋亡相关蛋白表达水平;JC-1染色检测线粒体膜电位;试剂盒检测Caspase活性。结果地榆皂苷Ⅰ对BCPAP细胞增殖有显著抑制作用,且呈浓度依赖性(P<0.05),IC_(50)为28.99μmol/L。地榆皂苷Ⅰ可显著诱导BCPAP细胞凋亡,且凋亡率随着药物浓度的升高而显著升高,呈剂量依赖性。地榆皂苷Ⅰ可提高Bax/Bcl-2比率,降低线粒体膜电位,促使细胞色素C从线粒体内的释放,提高Caspase-9和Caspase-3活性。结论地榆皂苷Ⅰ通过激活线粒体通路导致人甲状腺乳头状癌BCPAP细胞增殖受到抑制并诱导细胞凋亡。

冬凌草甲素对甲状腺癌BCPAP细胞增殖的抑制作用

目的 研究冬凌草甲素对甲状腺癌BCPAP细胞增殖的抑制作用。方法 使用0、0.5、1、2、5、10、20、50、100 μmol/L浓度的冬凌草甲素处理甲状腺癌细胞株BCPAP 48 h后，用CCK8测定细胞增殖率，绘制增殖曲线，计算细胞半数抵制率（IC50）。实验组加入接近IC50浓度（10 μmol/L）的冬凌草甲素，对照组细胞正常培养36 h后，采用流式细胞术检测细胞凋亡，利用Western blot检测凋亡基因PARP、Erk1/2和p-Erk1/2蛋白的表达。结果 冬凌草甲素能显著抑制BCPAP细胞增殖，在2~20 μmol/L时，具有明显的量效关系。流式细胞术检测发现，与对照组相比，实验组细胞早期凋亡率（2.83±0.70）%，晚期凋亡率（1.43±0.31）%，总凋亡率（4.27±1.01）%，均明显升高（P〈0.05）。Western blot发现，剪切后的PARP及p-Erk蛋白的表达水平分别上调了1.5倍和1.8倍，上调显著（P值均〈0.05）。结论 冬凌草甲素可抑制甲状腺癌细胞株BCPAP增殖，其可能与诱导细胞凋亡有关。

温里祛寒中药方剂抗寒活性成分筛选及药效学验证

目的基于中医“治寒以热”辨证理论和温里祛寒方剂温中散寒的功效,对温里祛寒方中抗寒活性成分筛选并进行体外药效学验证。方法基于大数据分析温里祛寒方剂药材分布特性;通过系统药理学方法进行活性成分的虚拟筛选和关键靶点的富集分析。建立体外BCPAP细胞低温联合缺氧模型,通过代表成分的细胞活力及调控活性氧水平、抗凋亡/坏死情况进行体外药效学验证。结果共收集到温里祛寒方剂147方,涉及中药材153味,药性主要为温/热、辛/苦,归脾肾肝经,具有生热、发散风寒之功效;药材中的化学成分主要参与细胞对外界物质及环境刺激的反应、体温调节等生物过程和HIF-1信号通路、细胞凋亡、甲状腺激素合成等信号通路的调节。体外药效学结果显示,代表成分阿魏酸、姜黄素、肉桂醛、6-姜酚、甘草苷能够有效抑制低温联合缺氧诱导BCPAP细胞活力的降低,改善细胞氧化应激水平和凋亡/坏死情况(P<0.05)。分子对接结果显示活性成分与关键蛋白具有良好的结合活性(结合能<-5.0 kcal·mol^(-1))。结论温里祛寒方剂及其活性成分能够帮助机体应对低温刺激,其抗寒作用与改善包括甲状腺在内的神经内分泌系统损伤相关。

MicroRNA-155对甲状腺乳头状癌细胞生物学行为的作用及机制研究

目的探讨miR-155在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)细胞生长、侵袭与转移过程中的作用及可能的作用机制。方法构建人的miR-155类似物并体外转染PTC BCPAP细胞,通过CCK8及transwell试验观察细胞增殖及侵袭能力的变化。miR-155类似物体外转染BCPAP细胞并用Western blot方法检测MAPK通路相关蛋白本底及磷酸化表达。给予ERK通路抑制剂U0126观察能否逆转miR-155过表达造成的甲状腺癌细胞异常增殖及侵袭能力增强。结果过表达miR-15548 h后通过CCK8试验检测发现BCPAP细胞明显增殖,过表达miR-15524h、48 h后通过transwell试验发现甲状腺癌细胞侵袭能力明显增强(P<0.05);利用Western blot检测MAPK信号通路相关蛋白JNK、ERK、P38的表达均明显上调(P<0.05)。同时检测细胞内p-ERK蛋白表达升高(P<0.05),利用ERK通路抑制剂U0126与miR-155共同处理细胞发现p-ERK表达较miR-155组明显降低(P<0.05)。同时,我们检测各组细胞的增殖及侵袭情况,发现U0126能逆转miR-155造成的促增殖及促侵袭作用。结论miR-155能通过激活MAPK通路的ERK通路,进而促进PTC BCPAP细胞的增殖以侵袭能力,为治疗甲状腺癌提供了潜在的靶点。

YAP1基因促进人甲状腺癌细胞生长与迁移

目的构建带myc标签的人Yes相关转录调节蛋白1(YAP1)基因的真核表达载体,探讨YAP1对甲状腺癌BCPAP细胞增殖和迁移的影响。方法采用聚合酶链反应(PCR)扩增YAP1的编码区序列,将其插入到pXJ40-myc载体中,构建pXJ40-myc-YAP1重组质粒并鉴定;质粒转染人甲状腺癌BCPAP细胞,Western印迹鉴定融合蛋白表达,细胞增殖实验(CCK-8法)、克隆形成实验、划痕实验检测细胞的生长、增殖和迁移能力的变化。结果 pXJ40-mycYAP1质粒构建成功;转染BCPAP细胞后重组融合蛋白表达成功;细胞增殖实验、克隆形成及划痕实验证明YAP1可促进甲状腺癌细胞BCPAP的增殖和迁移。结论带myc标签的人YAP1基因能在人甲状腺癌BCPAP细胞中表达,且可促进该细胞的增殖和迁移,为进一步研究YAP1在甲状腺肿瘤中的功能奠定了基础。