BCR-ABL融合基因检测在慢性粒细胞白血病诊断中的价值

目的:探讨BCR-ABL融合基因检测对慢性粒细胞白血病(CML)鉴别、诊断的价值,以及对慢性粒细胞白血病各个病程(慢性期、加速期与急变期)进行监测的临床意义。方法:应用实时荧光定量PCR方法对临床常见骨髓增殖性肿瘤(慢性粒细胞白血病、真性红细胞增多症和原发性血小板增多症)患者标本进行BCR-ABL融合基因的定量检测。结果:慢性粒细胞白血病初发患者中,BCR-ABL融合基因水平均阳性,而真性红细胞增多症和原发性血小板增多症均为阴性。在CML患者中,初发患者与加速期和急变期的患者相比,白细胞计数、血红蛋白含量和血小板计数的差异具统计学意义,P值分别为0.046、0.039和0.001,而BCR-ABL融合基因水平的差异无统计学意义;初发与缓解后患者的BCR-ABL融合基因水平相比,差异具有统计学意义(P<0.001)。结论:BCR-ABL融合基因检测可以对CML与临床常见骨髓增殖性肿瘤做鉴别诊断,并对其病程进行监测,是一个有价值的指标,可为临床用药提供依据。

儿童慢性粒细胞白血病慢性期红细胞参数及血清bFGF、TGF-β1、VEGF表达变化分析

目的探究儿童慢性粒细胞白血病(CML)慢性期红细胞参数及血清碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、转化生长因子β1(TGF-β1)及血管内皮生长因子(VEGF)表达变化。方法前瞻性选取2020年1月至2023年1月在首都医科大学附属北京儿童医院进行治疗的54例CML慢性期患儿为研究组,另随机抽取46名同期在本院进行体检的健康儿童为健康对照组。研究组给予酪氨酸激酶抑制剂治疗。比较两组间红细胞参数及血清bFGF、TGF-β1、VEGF表达变化,并比较研究组治疗前后红细胞参数及血清bFGF、TGF-β1、VEGF表达水平。结果研究组的RBC、血红蛋白、红细胞压积(HCT)及平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)水平分别为(3.45±0.04)×10^(12)/L、(102.33±1.15)g/L、(32.03±0.61)%、322.15±2.58,均显著低于对照组[(4.98±0.03)×10^(12)/L、(149.78±1.88)g/L、(44.33±0.31)%、334.12±0.77],平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)及红细胞体积分布宽度(RDW)水平分别为(91.44±0.77)fL、(33.15±2.55)pg、(17.55±0.12)%,均显著高于对照组[(89.88±0.34)fL、(30.24±0.16)pg、(12.66±0.11)%],差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组的血清bFGF、VEGF水平分别为(30.66±9.66)、(128.68±30.58)pg/mL,均显著高于对照组[(5.26±1.54)、(70.66±11.26)pg/mL],TGF-β1水平为(38.22±8.06)μg/L,显著低于对照组[(78.66±8.13)μg/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后,研究组患儿的RBC、血红蛋白、HCT、MCV及MCH水平均较治疗前显著降低,MCHC及RDW水平均较治疗前显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组治疗后的血清bFGF、VEGF水平均较治疗前显著降低,TGF-β1水平较治疗前显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在儿童CML慢性期患儿中可见血细胞参数明显异常,血清bFGF、VEGF水平显著升高,TGF-β1水平显著降低。酪氨酸激酶抑制剂治疗CML慢性期能有效改善患儿红细胞形态及功能,抑制肿瘤细胞生长,临床疗效显著,值得临床推广使用。

新型数字PCR对慢性粒细胞白血病BCR-ABL融合基因的检测效果研究

目的:针对慢性粒细胞白血病建立用于BCR-ABL融合基因检测的新型d PCR体系,探讨其在BCR-ABL^(p190/210/230)检测中的分析性能和临床适用性。方法:开发检测BCR-ABL^(p190/210/230)的新型d PCR体系,比较其与q PCR的灵敏度差异,及在慢性粒细胞白血病患者减药或停药期间药物副作用改善的差异。结果:在176份样本中,q PCR和d PCR在检测BCR-ABL的灵敏度方面表现出较高的一致性(82.39%),d PCR的阳性率约为q PCR的5倍(20.45%vs 3.98%)。随访期间,减药或停药的初始d PCR阴性患者较减药或停药前血常规(25%vs 10%)、肾/肝/胃(25%vs20%)及心脏功能(10%vs 0)均有明显改善。结论:d PCR检测体系可应用于BCR-ABL^(p190/210/230)检测,较q PCR一致性佳,阳性检出率高,基于d PCR指导的停药或减少剂量在改善药物副作用上有一定效果。

儿童混合表型急性白血病伴BCR-ABL1融合基因阳性病例分析

混合表型急性白血病(mixed-phenotype acute leukemia,MPAL)是急性白血病中淋系和髓系同时受累的一种罕见疾病,该文报道了1例儿童MPAL,此病例BCR-ABL1融合基因阳性并伴ASXL1基因突变,这种类型的遗传学改变为首次报道。该患儿接受急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)方案诱导治疗后骨髓细胞形态学及微小残留病灶(minimal residual disease,MRD)均未见明显异常。巩固治疗后进行异基因造血干细胞移植,移植后未出现急性排斥反应。移植后30 d骨髓细胞形态学、MRD、BCR-ABL1融合基因均转阴。截至目前移植术后9个月,患者仍处于无疾病进展生存期(progression-free survival,PFS)中。

1例急性髓系白血病治疗缓解后继发急性早幼粒细胞白血病的诊断与治疗

目的总结1例RUNX1::RUNX1T1阳性急性髓系白血病(AML)治疗缓解后继发PML::RARA阳性急性早幼粒细胞白血病(APL)患者的诊治方法。方法回顾性分析1例RUNX1::RUNX1T1阳性AML治疗缓解后继发PML::RARA阳性APL患者的临床资料,并复习相关文献。结果患者中年男性,因全血细胞减少就诊。髓系白血病融合基因筛查示RUNX1::RUNX1T1阳性,明确诊断为RUNX1::RUNX1T1阳性AML。患者经过诱导缓解和巩固治疗后RUNX1::RUNX1T1转阴,缓解期大于2年,疾病复发时髓系白血病融合基因筛查示PML::RARA阳性,诊断为PML::RARA阳性APL,经37 d三氧化二砷联合维甲酸诱导分化治疗达到骨髓象缓解。结论RUNX1::RUNX1T1阳性AML患者缓解后发生继发性APL临床罕见,容易漏诊,确诊主要依靠髓系白血病融合基因筛查;其发病原因可能与药物毒性诱导克隆改变有关,采用三氧化二砷及维甲酸治疗效果较好。

血清MCP-1、S-LDH、TFR水平对儿童急性早幼粒细胞白血病治疗疗效和预后的研究

目的探讨血清游离乳酸脱氢酶(S-LDH)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、转铁蛋白受体(TFR)水平对儿童急性早幼粒细胞白血病(APL)治疗疗效和预后的预测价值。方法选择该院2018年2月至2020年4月收治的160例APL患儿为研究对象,其中随机选取80例为治疗组,另外80例为观察组,同期选择于该院进行健康体检的100例健康儿童作为对照组。治疗组患者采用45 mg/d的全反式维甲酸进行治疗,观察组采用安慰剂治疗。参照血液病学诊断及疗效标准对患儿治疗疗效进行评估,记录患儿总生存期(OS)和无进展生存期(PFS);检测各组MCP-1、S-LDH、TFR水平;采用多因素Logistic回归分析APL患儿临床疗效的影响因素;采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线;采用多因素Cox回归模型分析影响APL患儿预后不良的因素。结果治疗前治疗组患儿MCP-1、S-LDH、TFR水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后治疗组患儿MCP-1、S-LDH、TFR水平明显低于观察组,差异有统计学意义(P<0.05)。完全缓解(CR)、部分缓解及未缓解(NR)患儿MCP-1、S-LDH、TFR水平有明显差异,其中CR患儿各指标水平最低,NR患儿各指标水平最高,差异有统计学意义(P<0.05)。高MCP-1、S-LDH、TFR水平是影响APL患儿临床疗效的独立危险因素(P<0.05);MCP-1、S-LDH及TFR低表达的APL患儿PFS、OS分别优于MCP-1、S-LDH及TFR高表达的APL患儿(P<0.05)。高MCP-1、S-LDH、TFR水平是影响APL患儿预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论有效控制APL患儿血清中MCP-1、S-LDH、TFR水平对治疗疗效具有十分重要的价值,且MCP-1、S-LDH、TFR水平也是预测APL患儿预后质量的重要指标。

血清VEGF、TGFβ1及PDCD4在慢性粒细胞白血病患者中的表达及相关性分析

目的 探讨血清血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子β1(TGFβ1)及程序性细胞死亡因子4(PDCD4)在慢性粒细胞白血病(CML)患者中的表达及相关性。方法 回顾性分析2014年5月至2017年5月阳江市人民医院收治的63例CML患者(作为研究组)的临床资料,另选同期于阳江市人民医院体检的健康者30例作为对照组。比较研究组与对照组入院24 h内血清VEGF、TGFβ1及PDCD4水平,分析CML患者血清VEGF、TGFβ1及PDCD4水平与临床病理指标的关系,比较死亡组与存活组CML患者血清VEGF、TGFβ1及PDCD4水平,分析CML患者预后影响因素以及CML患者无病生存期(DFS)。结果 研究组患者血清VEGF水平明显高于对照组,而血清TGFβ1、PDCD4水平均明显低于对照组,差异有统计学意义(P <0.05)。有无髓外浸润、不同疾病分期与危险度分型的CML患者血清VEGF、TGFβ1及PDCD4水平比较,差异有统计学意义(P <0.05)。死亡组患者血清VEGF水平明显高于存活组,而血清TGFβ1、PDCD4水平均明显低于存活组,差异有统计学意义(P <0.05)。髓外浸润、疾病分期(加速期、急变期)、危险度分型(高危)、VEGF>168.72 pg/ml、TGFβ1≤30.45μg/L、PDCD4≤0.57 ng/ml均为CML患者预后病死的独立危险因素(均P <0.05)。血清VEGF≤168.72 pg/ml CML患者DFS明显大于VEGF>168.72 pg/ml的患者,差异有统计学意义(P <0.05);血清TGFβ1>30.45μg/L的CML患者DFS明显大于TGFβ1≤30.45μg/L的CML患者,差异有统计学意义(P <0.05);血清PDCD4>0.57 ng/ml的CML患者DFS明显大于PDCD4≤0.57 ng/ml患者,差异有统计学意义(P <0.05)。结论 血清VEGF、TGFβ1及PDCD4水平与CML患者病情进展密切相关,髓外浸润、疾病分期(加速期、急变期)、危险度分型(高危)、VEGF>168.72 pg/ml、TGFβ1≤30.45μg/L、PDCD4≤0.57 ng/ml均为CML患者预后病死的独立危险因素,且血清VEGF≤168.72 pg/ml、TGFβ1>30.45μg/L、PDCD4>0.57 ng/ml的CML患者整体生存情况较好。

e1a3型BCR-ABL伴IKZF1基因突变的成人急性淋巴细胞白血病一例

急性淋巴细胞白血病是一种恶性克隆性肿瘤性疾病,在各种亚型、基因突变体中存在不同的生物学特征及预后,疗效差别很大。本文通过分析1例具有BCR-ABL融合基因e1a3罕见亚型并伴IKZF1基因突变的成人急性淋巴细胞白血病(ALL)患者的诊疗过程,并复习相关文献,为临床诊断、治疗提供参考。

探讨流式细胞术和BCR-ABL融合基因检测对慢性粒细胞白血病的临床诊断价值

目的探讨流式细胞术和BCR-ABL融合基因检测在慢性粒细胞白血病诊断的临床价值。方法选择100例流式细胞术检测结果显示粒细胞比例>70%的标本作为研究对象。分析100例标本的免疫表型CD16、CD13、CD15、CD11b是否表达紊乱,粒细胞是否异常表达CD56,是否存在嗜酸性粒细胞或嗜碱性粒细胞和BCR-ABL融合基因检测情况,并针对BCR-ABL1阳性患者的流式结果以及性别和年龄进行分析统计。结果100份细胞术检测显示粒细胞比例>70%的样本中有85份标本BCR-ABL1融合基因为阳性,15份标本BCR-ABL1融合基因为阴性,85例确诊慢性粒细胞白血病患者中粒细胞增多伴其免疫表型CD16、CD13、CD15、CD11b表达紊乱占91.76%,粒细胞异常表达CD56占80.00%,存在嗜酸性粒细胞或嗜碱性粒细胞占83.53%,血常规白细胞总数大于10×109/L占87.06%,其中男性占比高于女性。结论流式细胞术和BCR-ABL融合基因检测对慢性粒细胞白血病诊断都具有一定临床诊断价值,但经过比对分析BCR-ABL融合基因比流式细胞术检测慢性粒细胞白血病更加敏感,二者联合检测增加临床对慢性粒细胞白血病诊断的准确性,从而更好地为临床患者服务。

联合阿西替尼及达沙替尼有效治疗BCR-ABL1 T315I突变的慢性粒细胞白血病1例

慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)是一类以髓系细胞慢性增殖为主要特征的恶性克隆性疾病,大多数患者具有Ph染色体。近年来,酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitors,TKI)治疗CML明显改善了其预后。但当患者发生对传统TKI耐药或基因突变时,可能会限制治疗方案的选择。本文报道1名38岁CML男性患者在接受2.5年的TKI(伊马替尼/达沙替尼)治疗后,出现BCR-ABL1 T315I突变;联合阿西替尼及达沙替尼的方案治疗2个月后,BCR-ABL1拷贝数明显下降,取得理想的治疗效果。患者后续进行造血干细胞移植治疗,移植后仍使用阿西替尼及达沙替尼维持治疗,随访至移植后2年的结果均提示患者BCR-ABL1阴性。本文提供了1个阿西替尼联合现有TKI治疗伴有BCR-ABL1T 315I突变的CML患者的成功实例。

羧胺三唑对人嗜酸性粒细胞EOL-1增殖的抑制作用

目的探究羧胺三唑(CAI)对人嗜酸性粒细胞白血病细胞系(EOL-1)增殖的影响及相关机制。方法以EOL-1细胞系为研究对象,0.625、1.25、2.5、5、10、20和40μmol·L^(-1)CAI处理对数生长期EOL-1细胞24和48 h,CCK-8法检测细胞增殖,计算抑制率和半数抑制浓度(IC_(50));Western blotting法检测CAI对PDGFRα信号通路关键蛋白的影响。结果CAI对EOL-1细胞增殖具有明显抑制作用,表现出量效和时效关系,CAI处理EOL-1细胞24和48 h的IC_(50)分别为4.22和1.82μmol·L^(-1);CAI降低PDGFRα、Stat3、Akt和Erk 1/2的磷酸化水平,但对总蛋白水平没有明显影响。结论CAI呈剂量和时间依赖性地抑制EOL-1细胞增殖,其作用机制可能与抑制PDGFRα信号通路活化有关。

培门冬酶注射液联合CAG方案化疗方案用于加速期慢性粒细胞白血病患者的效果

目的:观察培门冬酶注射液联合CAG方案化疗方案用于加速期慢性粒细胞白血病(CML)患者的效果。方法:选取2021年3月至2023年2月该院收治的98例加速期CML患者进行前瞻性研究,按照随机数字表法将其分为观察组与对照组各49例。对照组给予CAG方案化疗,观察组在对照组基础上联合培门冬酶注射液治疗,比较两组临床疗效,治疗前后凝血功能指标水平、Th1/Th2淋巴细胞因子水平,以及不良反应发生率。结果:观察组治疗总有效率为73.47%,明显高于对照组的53.06%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组纤维蛋白原、D-二聚体水平均低于治疗前,且观察组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组血清白细胞介素(IL)-10、IL-4水平均低于治疗前,且观察组低于对照组,两组血清IL-2、γ干扰素水平均高于治疗前,且观察组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:培门冬酶注射液联合CAG方案化疗方案用于加速期CML患者可提高治疗总有效率,降低其纤维蛋白原、D-二聚体水平,改善其Th1/Th2淋巴细胞因子水平,效果优于单纯CAG方案化疗。

慢性粒细胞白血病bcr-abl融合基因克隆与真核细胞表达的研究

目的 为研究慢性粒细胞白血病 (CML)的肿瘤基因疫苗 ,克隆和表达CML的bcr abl融合基因片段。方法 根据bcr abl(b3a2 )融合基因序列自行设计一对寡核苷酸引物 ,以CMLK5 6 2细胞株的总RNA为模板 ,通过RT PCR扩增包含bcr abl融合位点周围 4 5 0bp的基因片段 ,并将其克隆进pGEM Teasy载体。经序列测定证实其阅读框架正确后 ,将bcr abl融合基因片段正向插入真核细胞表达载体 pcDNA3 1。以脂质体介导重组质粒pcDNAbcr abl转染中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞 ,用间接免疫荧光法 (IFA)检测基因表达情况。结果 成功构建了包含融合位点基因片段的bcr abl融合基因真核细胞表达载体 pcDNAbcr abl,pcDNAbcr abl转染的CHO细胞的免疫荧光强度高于K5 6 2阳性对照细胞。结论 bcr abl融合基因片段在真核细胞中能高效表达 ,pcDNAbcr abl真核细胞表达载体的构建为进一步研究bcr abl融合基因在CML防治中的作用奠定了基础。

服用伊马替尼慢性粒细胞白血病患者hOCT1表达的变化

目的动态检测慢性粒细胞白血病(CML)患者服用伊马替尼(IM)前后的hOCT1基因表达及其变化,探讨hOCT1基因表达与疾病的阶段、病程及伊马替尼疗效的关系。方法收集四川大学华西医院血液科CML30例(20例慢性期、10例进展期)患者的骨髓或外周血标本共63份,按伊马替尼疗效分为有反应(佳+次佳)及失败两组。采用半定量RT-PCR方法进行hOCT1基因mRNA水平检测,并结合临床表现、实验室检查和细胞遗传学结果,分析hOCT1水平变化与疾病阶段及伊马替尼疗效相关性。结果①30例CML患者,基线和治疗后hOCT1相对表达量分别为0.5110±0.1629,0.5207±0.1909,差异无统计学意义(P=0.5840)。②20例慢性期及10例进展期CML患者的基线hOCT1水平分别为0.5525±0.1985,0.4490±0.1717,差异无统计学意义(P=0.1090)。提示CML疾病分期可能对hOCT1水平没有影响。③服用伊马替尼3、6、9、12及15个月患者的hOCT1水平,差异无统计学意义(P=0.3412),提示服用伊马替尼疗程长短与hOCT1的表达没有关系。④伊马替尼疗效有反应组(佳+次佳)15例患者与失败组5例患者hOCT1基线水平分别为0.5820±0.1460,0.4640±0.1781,P=0.127。提示伊马替尼疗效与基线hOCT1水平无明显相关性。⑤16例慢性期CML患者伊马替尼治疗后hOCT1较基线hOCT1升高,分别为0.5207±0.1909,0.5110±0.1629,P=0.001。但hOCT1增加与BCR-ABL降低值无相关性。结论CML疾病的不同分期、不同病程、不同伊马替尼疗效患者的基线hOCT1 mRNA水平差异均无统计学意义,说明hOCT1 mRNA基线水平与伊马替疗效无关。

人慢性粒细胞白血病融合蛋白BCR-ABL适配子筛选及结构分析

目的:筛选、鉴定人慢性粒细胞白血病融合蛋白BCR-ABL适配子。方法:利用SELEX(Systematic evolution of ligands by exponential)技术,以高纯度融合蛋白BCR-ABL为靶分子,从体外化学合成的长度为90 bp的随机单链DNA文库中来筛选与融合蛋白BCR-ABL特异性结合的寡核苷酸适配子,并进行解离常数(Kd)值测定和适配子序列测定,再分别用Clustal W软件包和DNA Folding Sever分析适配子一级结构及二级结构,以酶联仪测定OD450值,根据OD值高低判定适配子亲和力大小。结果:经过13轮筛选,随机ss DNA文库与融合蛋白的亲和率从0.3%上升到47.1%,所有的一级结构没有共同的同源序列,二级结构分析结果显示,茎和环等二级结构可能是适配子和融合蛋白BCR-ABL结合的基础,其中,寡核苷酸适配子A2与BCR-ABL亲和力最高,kd值达72 nmol/L。结论:利用随机寡核苷酸文库筛选技术成功获得抗融合蛋白适配子,为临床上治疗和预防慢性粒细胞白血病提供一定的参考。

人慢性粒细胞白血病bcr-abl基因反义寡核苷酸对K562细胞株的凋亡诱导作用研究

背景与目的：随着人类基因组计划的完成，人们的研究重点已转向基因功能的研究，反义核酸技术无疑为这项宏伟工程提供了一个新的发展方向。目前，国内关于反义寡核苷酸诱导K562细胞凋亡的实验研究很少。本实验在体外构建针对人慢性粒细胞白血病（chronic myelogenou leukemia，CML）bcr-abl融合基因mRNA的反义寡核苷酸，探讨bcr-abl反义寡核苷酸对K562细胞凋亡的诱导作用。方法：以bcr-abl融合基因mRNA翻译起始点融合前区19个寡核苷酸为作用靶点，设计反义寡核苷酸，以其反义寡核苷酸序列转染人慢性粒细胞K562细胞，采用Hoechst染色法观察不同浓度寡核苷酸对K562细胞株的凋亡情况，采用蛋白[质]印迹法（Western blot）检测自噬凋亡蛋白LC3-Ⅱ的表达情况，采用流式细胞术（flow cytometry，FCM）检测细胞周期变化，采用JEM-4000EX电镜术检测细胞凋亡形态变化，通过DNA琼脂糖凝胶电泳检测K562细胞凋亡情况。结果：Hoechst染色结果显示，bcr-abl反义寡核苷酸能显著促进K562细胞的凋亡，且呈现一定的浓度依赖性。Western blot检测结果显示，bcr-abl反义寡核苷酸各浓度组凋亡自噬蛋白LC3-Ⅱ表达水平明显高于对照组，差异有统计学意义（P〈0.05）。FCM检测结果显示，bcr-abl反义寡核苷酸作用于K562细胞后，细胞周期阻滞于G0/G1期。各组G0/G1期、S期细胞数量与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0.05）。在JEM-4000EX电镜下可见明显的新月型凋亡小体。DNA琼脂糖凝胶电泳显示，10、30μmol/mL bcr-abl反义寡核苷酸组可以明显观察到以180~200 bp碱基对整倍数出现明暗间隔的DNA梯状条带。结论：Bcr-abl反义寡核苷酸可显著诱导K562细胞凋亡，为临床上基因治疗人CML提供一定的参考。

RQ-PCR在慢性粒细胞白血病细胞BCR-ABL融合基因检测中的应用

目的探讨采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RQ-PCR)技术检测慢性粒细胞白血病(CML)细胞的BCRABLp210融合基因的临床价值。方法应用RQ-PCR技术对60例CML患者骨髓细胞BCR-ABLp210融合基因进行定量检测分析。结果 60例BCR-ABLp210融合基因阳性的CML患者中,慢性期33例,加速期13例,急变期14例,且CML急变期患者BCR-ABLp210转录本水平明显高于慢性期和加速期患者。经异基因造血干细胞移植治疗或经伊马替尼治疗6个月后,BCRABLp210转录本水平均较6个月前明显降低。但这两种方法治疗CML患者12个月后的效果比较差异无统计学意义(P>0.05),而采用其他酪氨酸激酶抑制剂治疗CML 12个月后也可达到相似的治疗效果。结论 RQ-PCR技术监测CML患者细胞BCR-ABLp210融合基因表达有助于CML的诊断、治疗效果评价及微小残留的监测。

慢性粒细胞白血病Ph染色体和bcr-abl mRNA定量检测的临床意义

目的探讨Ph染色体和bcr-abl mRNA在慢性粒细胞白血病诊断、分期、治疗及微小残留病变监测中的意义。方法同时检测437份慢粒标本的Ph染色体和bcr-abl mRNA的表达情况。结果慢性期、加速期和急变期的bcr-abl mRNA定量结果逐渐增高(P<0.05);异基因造血干细胞移植后的bcr-abl mRNA定量结果随时间逐渐降低,一般在移植6月后转阴,服用格列卫与异基因造血干细胞移植病程相似,但融合基因转阴所用时间较长。结论实时定量PCR技术检测bcr-abl mRNA较Ph染色体的检测更为敏感,对于疾病分期、评价疗效、监测微小残留病变以及预测疾病进展具有重要的临床应用价值。

过表达prohibitin促进NB4-R1急性早幼粒细胞白血病维甲酸耐药细胞凋亡

目的构建人prohibitin基因真核过表达载体,探讨上调prohibitin对NB4-R1急性早幼粒细胞白血病维甲酸耐药细胞凋亡的影响。方法 PCR钓取目的基因prohibitin,与pEGFP-N1-3FLAG真核载体定向连接,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。将阳性重组载体pEGFP-N1-3FLAG-prohibitin转染NB4-R1细胞,以实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法检测过表达效果,annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞术检测prohibitin过表达对NB4-R1细胞凋亡的影响。结果 PCR筛选及测序比对,证明成功构建了prohibitin基因过表达载体;对NB4-R1细胞转染率可达70%以上;qRT-PCR结果显示转染pEGFP-N1-3FLAG-prohibitin过表达载体组(OE)prohibitin mRNA表达水平较空白对照组(CON)和阴性对照组(NC)分别上调(1.64±0.37)倍和(1.58±0.43)倍(P<0.05),Western blot结果显示OE组prohibitin蛋白表达水平较CON组和NC组分别上调(1.91±0.33)倍和(1.99±0.37)倍(P<0.05);流式细胞术结果表明CON组、NC组和OE组NB4-R1细胞凋亡率分别为(5.88±0.43)%、(6.63±0.46)%和(28.22±1.33)%,OE组较CON组和NC组细胞凋亡率分别增加了(3.80±0.24)倍和(3.39±0.30)倍(P<0.05)。结论过表达prohibitin可诱导NB4-R1细胞凋亡。

BCR-ABL1^+粒细胞白血病小鼠模型的建立及其鉴定

目的:建立BCR-ABL1^+粒细胞白血病小鼠模型,为研究白血病的发病机制和药物开发提供理想的平台.方法:利用含有p MSCV-BCR/ABL1-IRES-GFP逆转录病毒上清感染6~10周龄C57BL/6供者小鼠的骨髓细胞,移植给致死量射线照射的同种同型受者小鼠,建立BCR-ABL1^+粒细胞白血病小鼠模型;监测移植小鼠的体质量,生存率;流式细胞仪检测小鼠外周血有核细胞GFP表达(代表有核细胞表达BCR/ABL1)和细胞分型;观察小鼠脾脏、肺脏和肝脏等器官大体形态和HE染色变化.结果:移植20 d后,移植小鼠呈现弓背、活动性减少、精神萎靡的状态,体质量明显降低;流式细胞仪检测外周血中出现GFP^+细胞,并且随着移植时间的延长,GFP^+粒细胞明显增多.移植小鼠的生存率较对照组明显降低.移植小鼠发病后呈现脾脏显著增大、肺出血、肺脏及肝脏出现白色结节和HE染色呈现大量细胞浸润,且小鼠脾脏中有核细胞的80%为GFP^+Gr-1^+细胞,即BCR-ABL1^+粒细胞白血病细胞.结论:利用此方法成功建立了BCR-ABL1^+粒细胞白血病小鼠模型,为研究慢性粒细胞白血病机制和治疗提供了平台.