温阳复元方通过调控线粒体铁死亡相关基因BCRP/FLVCR保护大鼠脑缺血再灌注损伤

目的 从线粒体铁死亡相关基因胸腺癌抵抗蛋白(BCRP)/人类猫白血病C亚类病毒受体(FLVCR)角度探讨温阳复元方对大鼠脑缺血再灌注(Cerebral ischemia-reperfusion, I/R)损伤的神经保护作用机制。方法 采用线栓法制备大鼠脑I/R模型,将84只SD雄性大鼠随机分为假手术组(SO)、模型组(MCAO)、补阳还五汤对照组(BYHW)及温阳复元方组(WYFY),每组21只,于再灌注后12h、3d和7d取材(n=7)。于缺血2h和取材前对大鼠进行神经功能缺损评分;采用透射电镜(TEM)观察再灌注3d时大鼠梗死灶周围的线粒体超微结构变化;通过荧光定量聚合酶链式反应(PCR)和蛋白印迹法(WB)观察各时间点BCRP/FLVCR mRNA及蛋白表达水平。结果 ①SO组无神经功能缺损,MCAO组神经功能评分显著升高(P<0.01);与MCAO组相比,BYHW组其评分仅在12h时显著减少(P<0.01),WYFY组其评分在各时间点均显著降低(P<0.01);而WYFY组于7d时其评分较BYHW组进一步下降(P<0.05)。②TEM结果显示:SO组大鼠线粒体结构完整,MCAO组线粒体形态异常,可见神经元线粒体体积变小,外膜破裂,线粒体嵴减少,BYHW和WYFY治疗后能明显减轻上述损害,而WYFY组其线粒体损害较BYHW组进一步减轻。③BCRP mRNA及蛋白表达变化:SO组可以检测到较高的BCRP mRNA和蛋白表达,MCAO组其mRNA及蛋白表达在各时间点均显著下降(P<0.01);与MCAO组同期对比,BYHW和WYFY治疗后均能提高其mRNA和蛋白表达(P<0.05或P<0.01);而WYFY组其mRNA和蛋白表达较BYHW组进一步升高(P<0.01)。④FLVCR mRNA及蛋白表达变化:SO组可以检测到较高的FLVCR mRNA和蛋白表达,MCAO组其mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.01);与MCAO组同期比较,BYHW组和WYFY组其mRNA和蛋白表达量显著增高(P<0.01);与BYHW组相比,WYFY组均能进一步增加其mRNA和蛋白表达(P<0.05或P<0.01),于7d时达最高峰(P<0.01)。结论 温阳复元方可能通过上调BCRP/FLVCR表达,减少细胞内铁过载,增加血红素铁的外流,调节铁代谢,抗氧化应激,进而抑制线粒体铁死亡,发挥神经保护作用,其疗效优于补阳还五汤。

铁代谢相关基因FLVCR1对肝细胞癌的预后影响及与免疫细胞浸润的相关性研究

目的 基于多个数据库探索猫白血病病毒C亚群受体1(feline leukemia virus subgroup C receptor 1,FLVCR1)在肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma, HCC)中的表达、预后及与免疫细胞浸润的相关性。方法 利用UALCAN、GEPIA2、仙桃学术平台分析FLVCR1在HCC患者中的表达情况;利用GEPIA、GSCA分析FLVCR1与临床分期的关系;Linkedomics寻找与FLVCR1相关的基因,进一步进行GO、KEGG富集分析;利用TIMER数据库分析FLVCR1与免疫细胞浸润的相关性;Kaplan Meier plotter探索免疫细胞浸润高低对预后的影响;在GSCA分析FLVCR1与药物敏感性的相关性。结果 FLVCR1在HCC患者中高表达;FLVCR1表达与临床分期呈正相关;与FLVCR1正相关的基因主要富集在有机酸分解代谢等过程,与FLVCR1负相关的基因主要富集在染色体分离等过程;FLVCR1表达水平与四种免疫细胞包括CD4^(+)记忆T细胞、CD8^(+)T细胞、髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells, MDSCs)、调节性T细胞(regulatory cells, Tregs)的浸润水平呈正相关且P<0.05;Kaplan Meier plotter数据库结果说明四种免疫细胞浸润与HCC患者不良预后相关;FLVCR1的表达与Dasatinib药物敏感性正相关,与Navitoclax负相关。结论 FLVCR1对HCC患者的不良预后与免疫细胞浸润密切相关。

乳腺癌耐药蛋白BCRP在肿瘤化疗耐药中的研究进展乳腺癌耐药蛋白BCRP在肿瘤化疗耐药中的研究进展

ABCG2(三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2)是ABC转运体(三磷酸腺苷结合盒转运体)超家族中的一员,因其介导肿瘤药物的化疗耐药中而为人们所熟知。自1998年克隆出ABC转运体家族的多药耐药蛋白(ABCG2/BCRP)后,有关于BCRP的研究论文已超过五千多篇。ABC转运体超家族成员均能引起药物耐药。本文主要对ABCG2的结构、功能、与其有关的底物药、抑制剂以及其对肿瘤药物耐药作用进行综述。

五脏温阳化瘀方对血管性痴呆大鼠FLVCR1及BCRP表达的影响

目的探讨五脏温阳化瘀方对血管性痴呆大鼠猫白血病病毒C亚类受体1(feline leukemia virus subgroup C receptor,FLVCR1)及胸腺癌抵抗蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)表达的影响。方法通过双侧颈总动脉永久性结扎法建立血管性痴呆大鼠模型,然后将实验动物分为模型组、西药组(尼莫地平片20mg·kg^(-1)·d^(-1))及五脏温阳化瘀方低(1.25 g·kg^(-1)·d^(-1))、中(2.5 g·kg^(-1)·d^(-1))、高(5 g·kg^(-1)·d^(-1))剂量组,另取6只大鼠设为假手术组。各组大鼠给予相应药物干预28 d后,采用Morris水迷宫实验评价各组大鼠学习记忆能力;HE及Nissl染色法进行组织病理学检测;Perls’铁染色检测各组大鼠海马CA1区铁沉积情况;采用qRT-PCR和Western blotting检测各组大鼠海马组织中FLVCR1和BCRP mRNA和蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期显著性延长(P<0.01);穿越平台次数明显减少(P<0.01);海马CA1区病理损伤严重,尼氏小体数量明显减少,铁沉积明显增多;FLVCR1和BCRP mRNA和蛋白表达水平显著性降低(P<0.01);与模型组比较,西药组、五脏温阳化瘀方中剂量和高剂量组大鼠逃避潜伏期显著缩短(P<0.01),穿越平台次数明显增加(P<0.01);与模型组比较,西药组和五脏温阳化瘀方各剂量组大鼠海马CA1区病理损伤减轻,尼氏小体数量明显增加,铁沉积明显减少;FLVCR1和BCRP mRNA和蛋白表达水平显著性升高,且高剂量组及西药组升高效果最显著(P<0.01);高剂量组与西药组比较无显著差异(P>0.05)。结论五脏温阳化瘀方可以通过上调FLVCR1和BCRP的表达,减少细胞内铁过载,调节铁代谢,抑制铁死亡,从而发挥改善血管性痴呆大鼠认知能力的作用。

BCRP和Ki-67与乳腺癌新辅助化疗疗效的关系

目的:探讨乳腺癌组织中乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)和Ki-67的表达与新辅助化疗疗效之间的关系。方法:回顾性分析我科2012年10月至2014年8月收治的Ⅱ-Ⅲ期乳腺癌新辅助化疗患者65例,采用免疫组化方法检测BCRP和Ki-67的表达,分析BCRP、Ki-67的表达水平与新辅助化疗疗效的关系。结果:原发性乳腺癌组织中BCRP的阳性表达率为67.7%。BCRP的表达水平与新辅助化疗后病理组织学反应有关,组织学显著反应组(病理反应4~5级)BCRP的表达水平明显低于非显著反应组(病理反应1~3级),差异有统计学意义(χ~2=12.77,P=0.001)。化疗前Ki-67高表达组临床缓解率明显高于低表达组(χ~2=17.72,P<0.00)。结论:联合检测乳腺癌组织中BCRP和Ki-67的表达水平对新辅助化疗疗效有一定的预测价值。

MCF-7/BCRP细胞系的建立及其生物学特征

目的:建立表达乳腺癌耐药蛋白(BCRP)的耐药细胞系MCF-7/BCRP。方法:提取MCF-7细胞的总RNA,设计BCRP基因上下游引物,用RT-PCR法克隆出BCRP基因全长并连接到真核表达载体pcDNA3.1穴-雪上,转染MCF-7细胞后以G418筛选细胞。采用米托蒽醌外排实验、细胞毒性实验、细胞群体倍增时间、免疫荧光法鉴定构建的耐药细胞系。结果:MCF-7/BCRP对米托蒽醌耐药指数增加至14.72;外排米托蒽醌的作用增强;细胞群体倍增时间较亲代细胞延长;MCF-7/BCRP细胞能表达一定量的BCRP。结论:MCF-7/BCRP细胞能够表达BCRP并具有BCRP的耐药表型。

MDR1、BCRP和LRP基因在乳腺癌组织中的表达及其意义

目的探讨多药耐药基因(MDR1)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)及肺耐药蛋白(LRP)mRNA在乳腺癌组织中的表达及其相互关系,分析它们与乳腺癌临床病理特征的关系。方法采用RT-PCR方法检测2007年1月至2007年12月在宁夏医科大学附属医院手术切除的42例乳腺癌组织、42例癌旁组织及50例乳腺良性病变中MDR1、BCRP和LRP mRNA的表达。结果乳腺癌组织中MDR1、BCRP、LRP mRNA的阳性表达率分别为40.47%、38.09%及61.90%,与癌旁组织及乳腺良性病变组织相比阳性表达率均有统计学差异(P<0.05)。MDR1mRNA表达与绝经状况呈完全正相关(r=0.398,P<0.01),与腋窝淋巴结状况呈完全正相关(r=0.398,P<0.01);BCRP mRNA表达与腋窝淋巴结状况呈正相关(r=0.355,P<0.05);LRP mRNA表达与绝经状况、年龄、腋窝淋巴结状况及肿瘤大小之间均无相关性(P>0.05);MDR1mRNA和BCRP mRNA表达呈正相关(r=0.652,P<0.01),LRP mRNA与MDR1mRNA表达无相关性(r=0.147,P>0.05);LRP mRNA和BCRP mRNA表达无相关性(r=0.111,P>0.05)。2个耐药基因共表达率为47.61%,2种或3种耐药基因共表达率为61.89%。结论乳腺癌组织中存在耐药基因MDR1、BCRP和LRP的表达,单基因和多基因协同作用,以多基因共表达为主;检测MDR1和BCRP基因表达水平可辅助临床判断乳腺癌患者的预后。

顺铂诱导耐药蛋白BCRP与EHD2表达上调并在细胞表面的富集

目的:建立顺铂耐受的人肺腺癌A549/DDP细胞株,研究EHD2(EH domain-containing protein-2)与肿瘤细胞药物耐受的潜在关系。方法:以DDP为诱导剂,采用低浓度逐步增量诱导方法建立人肺癌耐药细胞系A549/DDP,采用MTT法测定药物敏感性,免疫印迹法检测耐药蛋白BCRP及EHD2蛋白的表达水平,免疫荧光方法检测BCRP及EHD2的细胞定位。结果:成功建立DDP耐药细胞系A549/DDP,对DDP的耐药指数为7.6;免疫印迹结果显示BCRP在耐药细胞系A549/DDP中的表达明显高于其亲本细胞A549,EHD2蛋白在耐药细胞系的表达略有增高;免疫荧光成像显示EHD2蛋白在细胞膜表面富集,并与BCRP耐药蛋白共定位。结论:BCRP和EHD2在获得性耐药细胞中富集,并于细胞膜表面共定位,提示内吞蛋白EHD2可能调控耐药蛋白BCRP的膜稳定性,从而介导肿瘤细胞耐药。

BCRP基因在非小细胞肺癌组织和非癌肺组织中的表达及意义

目的：进一步研究从人类乳腺癌细胞株 (MCF-7/AdrVp)中克隆出的、对蒽环类抗癌药耐药的 BCRP基因在非癌肺组织及非小细胞肺癌组织中的表达。方法：从术后即刻获得的正常肺组织和有活力的非小细胞肺癌组织新鲜标本中及时提取细胞总 RNA，通过 RT-PCR及 PCR法获得并扩增 BCRP基因的 cDNA产物，再经凝胶电泳分离 BCRP基因 cDNA带，然后再通过转膜技术把这些 BCRP基因 cDNA产物转移到杂交膜上，用 Southern blot杂交技术检测 BCRP基因的表达程度。结果：细胞总 RNA分别从 8个只有肺癌组织标本和 12对同时获取的肺癌组织及非癌肺组织标本中成功提取，然后用变性凝胶电泳鉴定提取 RNA的质量。其中 4例标本因术中缺血时间太长，或有坏死炎症或术前放化疗等原因，所提 RNA有降解而放弃进一步的检测。通过 RT-PCR及 PCR方法从 16例可用标本中获得并扩增 BCRP基因的 cDNA产物，再通过转膜及 Southern blot杂交技术，最终发现 BCRP基因在正常肺组织中均有不同程度的表达（ 10/10），而在非小细胞肺癌组织标本中只有一半病人的标本有不同程度的表达 (8/16)。结论： BCRP基因可能是一个在非癌肺组织中常规表达的基因，而在部分病人的肺癌组织中可能此基因有缺失或被抑制。因此。

c-erbB-2与BCRP在脑胶质瘤中的表达及与临床分期的关系

目的探讨脑胶质瘤患者组织中原癌基因c-erbB-2、乳腺癌耐药相关蛋白(BCRP)的表达及临床意义。方法选择2016年6月年至2017年8月在我院手术切除的脑胶质瘤标本62例作为观察组,另选同期颅脑外伤的正常脑组织12例为对照组。应用免疫组织化学SP法检测两组标本中的c-erbB-2和BCRP的阳性率表达,分析与患者临床病理特征的关系。结果观察组c-erbB-2、BCRP阳性表达率分别为41.94%(26/62)和46.77%(29/62),均明显高于对照组;脑胶质瘤组织c-erbB-2、BCRP阳性率与患者病理分期、分化程度具有关联性,病理分期越高,c-erbB-2和BCRP阳性率越高;而分化程度越低,c-erbB-2和BCRP阳性表达率越高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论脑胶质瘤组织中c-erbB-2和BCRP均呈高表达,其表达水平与患者病理分期呈正相关。

非小细胞肺癌组织BCRP、LUNX mRNA表达变化及意义

目的观察非小细胞肺癌(NSCLC)组织中乳腺癌耐药蛋白(BCRP)、肺组织特异度蛋白X(LUNX)mRNA表达变化,并探讨二者在NSCLC诊断、疾病进展评估及预后判断中的作用。方法选取NSCLC组织54例份作为观察组,正常肺组织24例份作为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测两组组织BCRP、LUNX mRNA相对表达量,分析观察组中二者的相关性及其在NSCLC诊断中的价值。比较观察组不同临床病理参数患者癌组织中的BCRP、LUNX mRNA相对表达量,随访并比较BCRP、LUNX高低表达患者的中位生存时间。结果观察组与对照组BCRP mRNA相对表达量分别为0.60±0.27、0.19±0.09,LUNX mRNA相对表达量分别为12.94±2.10、9.41±4.25;两组比较P均<0.05。观察组BCRP、LUNX mRNA相对表达量呈正相关关系(r=0.426,P<0.01)。BCRP、LUNX联合诊断NSCLC的曲线下面积(AUC)为0.824,均高于LUNX、BCRP单独诊断的0.792、0.761,联合诊断的灵敏度为70.37%、特异度为83.33%。观察组中、低分化者BCRP mRNA相对表达量低于高分化者(P<0.05);观察组不同性别、年龄、组织学分型、临床分期、分化程度、淋巴结转移者的BCRP、LUNX mRNA相对表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。BCRP、LUNX高表达患者的中位生存时间均短于低表达患者(P均<0.05)。结论 NSCLC组织中BCRP、LUNX表达均升高,且BCRP高表达与肿瘤分化程度有关,二者联合检测有助于NSCLC患者的诊断和预后判断。

ABCG2/Bcrp1转运蛋白:侧群干细胞的表型标记与功能调控蛋白

在骨髓、骨骼肌及神经组织均发现侧群干细胞 (SPSCs)。ABC转运蛋白ABCG2 /Bcrp1基因在不同来源侧群 (SP)干细胞均呈高表达 ,且该基因表达与SP细胞表型密切相关。SP细胞能向不同类型或不同胚层的组织细胞分化 ,很可能代表了一群更原始的干细胞 ,且与干细胞可塑性相关。而ABCG2 /Bcrp1在造血及神经等组织来源的SP干细胞中的特异表达 ,使得该转运蛋白成为从不同组织中分选多潜能干细胞的一种新的表型标记。

表达BCRP的卵巢癌耐药细胞系3AO/BCRP的建立及其生物学特征

目的探讨乳腺癌耐药蛋白(BCRP)在卵巢癌中的作用和逆转其介导的MDR,建立表达BCRP的耐药细胞系3AO/BCRP。方法提取MCF-7细胞的总RNA,设计BCRP基因上下游引物,RT-PCR克隆出BCRP基因全长并连接到pcDNA3.1(-)上,转染3AO细胞后以G418筛选存活细胞。采用米托蒽醌外排实验、细胞毒性实验、细胞群体倍增时间、定量PCR、Western blot等方法鉴定构建的耐药细胞系。结果3AO/BCRP对米托蒽醌耐药指数增加至11.58;耐药细胞外排米托蒽醌的作用增强;细胞中BCRPmRNA的水平升高,细胞能表达一定量的BCRP。结论3AO/BCRP细胞具有BCRP的耐药表型,可作为进一步研究BCRP的生物学特性以及建立其介导的耐药逆转模型。

宫颈癌Hela细胞株中Bcrp1^+表型细胞的侵袭力

目的探讨Bcrp1+宫颈癌Hela细胞的侵袭及转移能力。方法采用免疫荧光标记物流式细胞仪分选HeLa细胞系中Bcrp1+表型细胞,并利用Boden小室侵袭试验检测两组Bcrp1+表型及Bcrp1-表型细胞的侵袭能力。结果 Hela细胞系中存在Bcrp1+细胞,比例为7.1%。Bcrp1+表型组侵袭过人工基底膜的细胞数为99±14.2,侵袭深度为(365.61±52.32)μm;Bcrp1-表型组侵袭过人工基底膜的细胞数为57±13.3,侵袭深度(301.04±53.81)μm。Bcrp1+亚群细胞穿透人工基底膜的细胞数及穿透深度均明显强于Bcrp1-亚群,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Bcrp1+表型Hela细胞具备较强的侵袭转移能力,其中可能含有宫颈癌干细胞,Bcrp1可能成为宫颈癌干细胞标记物。

球虫感染对蛋鸡肝脏和肠道mdr_1、mrp_2和bcrp mRNA表达水平的影响

为探索球虫感染对蛋鸡肝脏和肠道组织中多药耐药蛋白基因(mdr1)、多药耐药相关蛋白基因(mrp2)和乳腺癌耐药蛋白基因(bcrp)mRNA表达的影响,采用荧光定量PCR方法,以β-actin为内参,对球虫感染蛋鸡以及健康蛋鸡的肝脏、十二指肠、空肠、回肠中的mdr1和mrp2及bcrp mRNA进行相对定量测定。结果表明:与健康对照鸡比较,球虫感染导致mdr1 mR-NA表达水平在十二指肠中有显著上调(P=0.043),而在其他组织中mRNA表达水平均无显著差异(P>0.05);mrp2 mR-NA表达水平在健康和球虫感染蛋鸡的肝脏及肠道中均无显著差异(P>0.05);bcrp mRNA表达在肝脏(P=0.021)、回肠(P=0.021)、空肠(P=0.021)中均出现显著性下调,在十二指肠中则变化不显著。结论:球虫感染可使蛋鸡组织中的部分ABC(ATP-binding cassette)转运子的mRNA表达水平发生变化,但是不同基因在不同组织的变化趋势不同。提示:疾病期间用药可能会对药物的吸收和排泄有影响。

复发性卵巢上皮癌干细胞标志物BCRP与相关因子的表达及其临床意义

目的:探讨肿瘤干细胞标志物及相关因子在复发性卵巢上皮性癌中的表达及意义。方法:免疫组化检测30例同一位卵巢癌患者初治与复发时手术切除的配对组织标本中干细胞标志物乳腺癌耐药蛋白(BCRP)及相关因子、P糖-蛋白(P-gp)、肺耐药蛋白(LRP)、蛋白激酶B(PKB/Akt)的表达,结合临床病理及随访资料进行分析。结果:(1)BCRP过度表达与卵巢癌复发明显相关(P<0.05),而P-gp、LRP和Akt过度表达与卵巢癌复发无显著相关性(P>0.05);(2)与初发癌相比,复发卵巢癌低分化癌构成比显著上升(P<0.05);(3)BCRP的表达与患者病理分级显著相关(P<0.05),而P-gp、LRP、和Akt与患者病理分级无关(P>0.05);(4)BCRP、P-gp、LRP和Akt表达阴性患者化疗反应率明显高于表达阳性的患者(P<0.05);(5)在复发卵巢癌组织中BCRP与P-gp、LRP、Akt表达均呈正相关关系(rs=1.0,P<0.01)。结论:BCRP表达与卵巢癌复发、获得性耐药显著相关,与卵巢癌的失分化程度亦密切相关,提示肿瘤干细胞持续存在与增长可能是导致卵巢癌复发的主要原因。

乳腺癌耐药蛋白(BCRP/ABCG2)的研究进展

肿瘤细胞的多药耐药严重影响肿瘤化疗的疗效,研究肿瘤细胞耐药相关蛋白的生理功能及其转运药物的机制,寻找高效的多药耐药蛋白抑制剂是提高肿瘤化疗效果的重要途径。乳腺癌耐药蛋白(BCRP/ABCG2)是一种介导乳腺癌细胞耐药的重要蛋白,在乳腺癌细胞多药耐药的形成中起关键作用。本文将就BCRP/ABCG2蛋白的结构特点、生理功能、在多药耐药中的作用及其抑制剂等方面的研究进展作一综述。

BCRP/ABCG2的结构功能及相关抑制剂研究

化学治疗是临床上治疗癌症的一种主要方式。研究发现多重耐药菌（multi—drug resistance，MDR）主要是由一类被称为ABC转运蛋白超家族（ATP binding cassette transporters）的膜蛋白所引起的，它们能够利用ATP水解提供的能量将化学治疗药物排出细胞外，导致肿瘤细胞呈现抗药性。

乳腺癌耐药蛋白BCRP表达与化疗药物敏感性的关系

目的探讨乳腺癌组织中乳腺癌耐药蛋白表达与临床常用化疗药物敏感性之间的关系。方法选取42例乳腺癌组织标本,采用免疫组织化学S-P法检测标本中BCRP表达,对同一标本应用胶滴肿瘤药敏检测技术进行体外药物敏感性试验。结果乳腺癌组织中BCRP阳性表达率为33.33%(14/42),BCRP阳性表达者中5-氟尿嘧啶、阿霉素耐药组所占比例明显高于BCRP阴性组(P<0.05)。结论 BCRP蛋白表达可以作为预测化疗效果的一个重要参考指标,根据药物敏感试验结果进行药物筛选,实现乳腺癌化疗的个体化,对于提高患者生存质量,具有十分特殊的意义。

MDR1、BCRP、CXCR4在耐药白血病中的表达研究

目的本研究选择与白血病耐药密切相关的MDR1、BCRP及CXCR4为研究对象,在临床病例中进行检测,为指导治疗和判断预后提供临床依据。方法采用荧光定量RT-PCR方法检测白血病化疗耐药、白血病化疗敏感患者及正常人MDR1、BCRP及CXCR4的表达。结果 MDR1、BCRP、CXCR4基因的表达量在耐药组、敏感组及正常对照组间有显著性差异,P<0.05;CXCR4与MDR1基因的表达量有显著正相关性,R值为0.366;BCRP基因的表达量在ALL患者中高于AML患者,P<0.05;MDR1基因的表达量在老年组高于儿童少年组,P<0.05。结论联合检测MDR1、BCRP、CXCR4对于指导白血病治疗和判断预后具有重要意义。