胸膜肺炎放线杆菌毒素ⅠBD基因特异性片段的克隆及表达

以胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清1型标准菌株基因组为模板,用PCR扩增ApxⅠBD基因的特异性片段;对PCR产物纯化回收后与载体pMD 18-T进行连接、转化,经酶切和序列分析鉴定后亚克隆到原核表达载体pET28a中,构建重组表达质粒pETⅠBD;转入大肠埃希氏菌BL21中,以IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE电泳。结果,从APP中克隆的ApxⅠBD DNA序列与已发表序列的同源性为100%,长1 447 bp,编码482个氨基酸,所表达的融合蛋白相对分子质量约54ku,与预期的大小相符。结果表明,含有ApxⅠBD基因特异性片段的重组表达载体pETⅠBD已成功构建。

一种快速构建集胞藻6803 petBD必需基因定点突变株的方法

集胞藻6803(Synechocystis sp.Strain PCC 6803)是能够进行光合自养的原核生物,因其遗传背景清楚,特别是它具有天然的同源重组转化能力,是研究光合作用的模式生物之一[1—3]。以集胞藻进行分子生物学研究,最常用的方法是基因敲除,即基于同源重组原理,利用抗生素的抗性基因插入到目的基因内部,使其功能丧失[4];如进行定点突变常规的方法是首先构建一个缺失质粒。