BDH2基因过表达对啤酒酵母双乙酰代谢的影响

利用基因工程手段,采用PCR技术扩增啤酒酵母S2中的双乙酰还原酶基因BDH2,构建了BDH2基因整合过表达的重组酵母菌株B2Z。利用real-time PCR的方法对酵母BDH2基因的表达水平进行了检测,相比于出发菌株,其BDH2基因的表达水平提高到原来的7.35倍。啤酒发酵实验表明,BDH2基因的过表达对双乙酰的降低有效果,B2Z双乙酰的峰值和双乙酰最终含量比出发菌株S2分别降低42.61%和32.73%,其他啤酒指标如酒精度、发酵度、残糖和风味物质与出发菌株略有变化,但各物质的浓度都在优质啤酒建议的范围之内,符合啤酒发酵的指标要求。

BDH2基因对肝癌细胞增殖能力的抑制作用及机制

目的探讨β-羟丁酸脱氢酶2(BDH2)基因对肝癌细胞增殖能力的抑制作用及其机制。方法合成表达BDH2的慢病毒载体,构建稳定表达BDH2的肝癌细胞株HepG2-BDH2(实验组)和对照细胞株HepG2-Vector(对照组)。RT-PCR检测两组细胞中BDH2 m RNA表达水平。采用CCK-8法检测两组肝癌细胞的增殖能力,平板克隆实验观察两组细胞的克隆形成能力。Western blot检测BDH2蛋白和Bcl-2细胞凋亡相关蛋白的表达。实验数据比较采用t检验。结果实验组BDH2 mRNA表达量为(2.20±0.10)×10^(-3),明显高于对照组的(0.20±0.01)×10^(-3)(t=34.95,P<0.05)。实验组细胞培养3、4、5、6、7 d的A_(450)值分别为0.55±0.20、0.73±0.02、1.26±0.12、1.62±0.14、2.19±0.12,明显低于对照组的0.70±0.06、1.13±0.08、1.77±0.15、2.45±0.12、3.02±0.15(t=-5.19,-11.34,-5.96,-10.35,-9.54;P<0.05)。细胞生长曲线显示实验组肝癌细胞的增殖能力明显弱于对照组。平板克隆实验结果显示,实验组细胞克隆形成数目为(184±7)个,明显少于对照组的(429±15)个(t=-25.84,P<0.05)。与对照组相比,实验组的BDH2、cleaved caspase-3蛋白表达明显升高,而Bcl-2蛋白表达明显降低。结论 BDH2基因可抑制肝癌细胞增殖,其机制可能是通过Bcl-2信号通路促进肝癌细胞的凋亡。