免疫毒素BDI-1-PEA膀胱灌注预防膀胱癌术后复发的临床研究

目的 应用新型免疫毒素BDI- 1-PEA膀胱灌注 ,探讨其对预防人膀胱癌术后复发的作用。方法 12例膀胱移行细胞癌术后患者应用 10 0倍半细胞致死剂量浓度 (1× 10 - 7mol L)抗人膀胱癌免疫毒素BDI- 1-PEA5 0ml行膀胱内灌注 ,药物在膀胱内保留 1h后排出 ,每周灌注 2次 ,10次为一疗程。同期随机 8例膀胱移行细胞癌术后患者应用丝裂霉素 2 0mg膀胱灌注作为对照 ,每周灌注 1次 ,8次后改为每月 1次 ,10次为 1疗程。每 3个月复查膀胱镜或B超检查。结果 免疫毒素组用药后随访 7～ 16个月 ,平均 12个月 ;12例病人均无复发 ,多次膀胱镜检查未见异常。丝裂霉素组随访 9～ 15个月 ,平均 11个月 ;2例复发。结论 免疫毒素BDI- 1-PEA对预防膀胱癌术后复发有较好疗效。

^(131)I-BDI-1在荷人膀胱癌裸鼠体内的生物分布研究及辐射剂量评估

目的探讨131I-BDI-1在荷人膀胱癌裸鼠模型中的体内生物分布和对肿瘤的靶向定位性能以及其生物安全性,并由此估算131I-BDI-1在人体内主要脏器的内照射吸收剂量和人体有效剂量。方法通过氯胺-T法用131I溶液直接标记抗人膀胱癌单克隆抗体BDI-1,制备131I-BDI-1,荷人膀胱癌EJ细胞裸鼠尾静脉注射222kBq131I-BDI-1后,于不同时刻处死动物,取感兴趣器官和组织,称重并测量放射性计数,计算131I-BDI-1在荷瘤裸鼠中的标准摄取值和靶/非靶组织比值。利用标准的MIRD数据表计算人体的%ID/g,通过MIRDOSE3.1软件估算131I-BDI-1对人体各个器官的辐射吸收剂量及有效剂量。结果生物分布数据示131I-BDI-1血液清除缓慢,肿瘤部位放射性明显持续滞留,除血液外,具有较高的靶/非靶组织比值。131I-BDI-1人体内照射的有效剂量为1.46×10-2mGy/MBq。结论131I-BDI-1对肿瘤有良好的靶向性,有望成为一种新型的针对人膀胱癌肿瘤的诊治药物,其辐射吸收剂量较低,作为肿瘤治疗药物是安全的。

抗人膀胱癌单克隆抗体BDI-1的扩增和鉴定

目的制备纯化的抗人膀胱癌单克隆抗体BDI-1。方法给Balb/c小鼠腹腔注射BDI-1杂交瘤细胞,收集的腹水过Protein G-agaros亲和层析柱即得到人膀胱癌BDI-1单克隆抗体。采用ELISA法、间接免疫荧光法、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法和点印迹法鉴定单克隆抗体。结果每毫升腹水可以得到1-1.5mg的高效价(106)的纯化抗体。结论该方法可以扩增高效价的单克隆抗体.

直接还原法标记^(99m)Tc与抗人膀胱癌单克隆抗体BDI-1

通过２ － 巯基乙醇直接还原法将抗人膀胱癌单克隆抗体 Ｂ Ｄ Ｉ－ １ 与核素９９ｍ Ｔｃ 进行标记， 制备９９ ｍ Ｔｃ － Ｂ Ｄ Ｉ－ １ ． 优化条件后进行标记并进行一系列检测． 结果： 标记率为７２ ％ ， 经 Ｓｅｐｈａｄｅｘ 柱纯化后标记抗体的放化纯度高于９５ ％ ； 标记抗体的免疫活性分数为８７ ％ ， 与 Ｅ－ Ｊ细胞的结合率为９０ ％ ； 无毒、无菌、无热原． 结果表明： ２ － 巯基乙醇直接还原法将抗人膀胱癌单克隆抗体 Ｂ Ｄ Ｉ－ １ 与核素９９ ｍ Ｔｃ 进行标记为进一步进行膀胱癌的放射免疫显像诊断奠定了基础．

BDI-1-MT治疗膀胱癌及预防其术后复发的临床观察

目的 通过临床应用膀胱腔内灌注抗人膀胱癌免疫毒素 (BDI- 1-MT) ,观察治疗膀胱癌和预防膀胱癌术后复发的效果及毒副反应。方法 对 18例术后和 5例未手术的膀胱癌病人 ,膀胱腔内灌注BDI- 1-MT 1个疗程以上 ,观察疗效、复发情况及毒副反应。结果 术后 18例随访 6～ 2 0个月未见复发 ,未手术 5例随访 6～ 2 1个月 ,其中 3例显效 ,2例有效。所有病例均无明显毒副反应。结论 膀胱腔内灌注BDI- 1-MT治疗膀胱癌和预防膀胱癌术后复发有良好效果 ,是一种值得推广的新方法。

膀胱癌、输尿管癌导向诊断与导向治疗的临床基础研究

膀胱癌和输尿管癌在我国是泌尿系统发病率较高的恶性肿瘤.膀胱癌常规诊断方法包括:尿细胞学检查、影像学检查:B超、CT及MRI、膀胱尿道镜检加组织活检.膀胱尿道镜检加组织活检目前被作为膀胱癌诊断的"金标准",但该方法有一定创伤性,且对于原位癌、扁平癌以及早期肿瘤诊断灵敏度较低.对于膀胱癌远处转移与输尿管癌尚缺乏高特异性与高灵敏度的诊断方法.膀胱癌治疗方法主要有经尿道切除、放化疗及卡介苗膀胱内灌注治疗,经尿道切除适合于表浅肿瘤,且术后复发率高,放化疗及卡介苗膀胱内灌注治疗均有较大的副作用.为开辟膀胱癌和输尿管癌诊断和治疗的新途径,我院研制出了抗膀胱癌单克隆抗体BDI-1.本项目对放射性核素或免疫毒素偶联的BDI-1对膀胱癌、输尿管癌进行导向诊断与导向治疗研究,以期将该抗体应用于临床.

抗膀胱癌免疫毒素导向治疗膀胱癌及预防膀胱癌复发

用抗膀胱癌免疫毒素（BDI-1-MD）行膀胱癌灌注20例，治疗膀胱癌及预防膀胱癌复发，其中16例（Ⅰ组）于术后进行灌注，4例多发性膀胱肿瘤（Ⅱ组）直接行灌注。Ⅰ组中，膀胱肿瘤Ⅰ级4例，Ⅰ～Ⅱ级5例，Ⅱ级4例，Ⅱ～Ⅲ级3例。初发肿瘤13例，复发肿瘤3例。Ⅱ组中，Ⅲ～Ⅲ级1树，Ⅲ级3例。初发肿瘤3例，复发肿瘤1例。平均随访12．3个月，Ⅰ组仅1例8个月后复发（复发率6．3％）。Ⅱ组中，有效2例，弱效2例。未见灌注引起的毒副反应，免疫指标无异常。表明BDI-1-MD对膀胱肿瘤有强杀伤能力和高度特异性，而对正常组织无损伤。提示此免疫毒素对治疗膀胱癌及预防术后复发有良好的作用。

抗人膀胱癌单克隆抗体重链可变区基因的克隆及其原核表达载体的构建

目的 克隆抗人膀胱癌单克隆抗体重链可变区基因(VH)，并构建其原核表达载体。方法从能分泌抗人膀胱癌单克隆抗体的杂交瘤细胞BDI-1中提取总RNA，通过RT-PCR扩增出VHcDNA。用HindⅢ和XhoⅠ酶切纯化的RT-PCR产物和原核表达载体pET28a(+)，在T4DNA连接酶作用下室温连接。重组质粒经酶切鉴定，阳性克隆测序并进行序列分析。结果扩增出VHcDNA片段，大小约为370bp，重组质粒的酶切鉴定结果与预期一致。VH基因序列长度为366bp，编码122个氨基酸。VH基因属于鼠免疫球蛋白重链11亚类。结论成功克隆出抗人膀胱癌单克隆抗体重链可变区基因，并成功构建其原核表达载体。