高效液相色谱-质谱联用法测定Beagle犬血浆中黄体酮的浓度

目的 建立灵敏的高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS/MS),测定Beagle犬血浆中的黄体酮浓度。方法 选用Thermo Accucore C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,2.6μm),以0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)为流动相,采用梯度洗脱进行分离,流速为0.4 ml/min,进样量10μl。样品采用乙腈进行蛋白沉淀,通过电喷雾电离源,以多重反应监测(MRM)方式进行正离子检测,用于定量分析的离子对为m/z 315.1→109.2(黄体酮)和m/z 271.4→171.9(内标,甲苯磺丁脲)。结果 黄体酮的线性范围为0.5~100 ng/ml,定量下限(LLOQ)可达0.5 ng/ml,提取回收率(n=6)分别为95.97%,105.20%,108.09%,日内、日间精密度试验RSD均小于15%。结论 该方法操作简单,灵敏度高,准确,重现性好,适用于Beagle犬血浆样品中黄体酮的测定和药动学研究。

骨疏康干预Beagle犬磨牙压低过程中转化生长因子β1及β-连环蛋白的表达

背景:骨疏康可以有效促进破骨细胞的凋亡、提高骨密度和骨矿含量、抑制骨吸收。但骨疏康在牙根吸收方面作用的研究匮乏,其调控作用机制尚不清楚。目的:探讨骨疏康在Beagle犬正畸牙根吸收过程中的治疗效果及其对转化生长因子β1、β-连环蛋白表达的影响。方法:将16只Beagle犬随机分为正常对照组(n=4)、蒸馏水组(n=6)与骨疏康组(n=6),正常对照组不进行任何干预,蒸馏水组与骨疏康组建立上颌第一磨牙压低模型,造模后分别每天灌胃蒸馏水与骨疏康(2.1 g/kg)。干预6,9,12周,收集上颌第一磨牙牙根和牙周组织,采用苏木精-伊红染色观察病理变化,免疫组化检测转化生长因子β1、β-连环蛋白的表达水平。结果与结论:(1)第一磨牙随时间推移有明显压低现象出现,在第12周效果最为明显;(2)苏木精-伊红染色显示,蒸馏水组磨牙组织随着加力时间周期的不断延长,破骨细胞数量呈上升趋势,骨吸收现象不断加重;骨疏康组磨牙的根吸收程度轻于蒸馏水组,骨修复能力和牙周组织的改建能力优于蒸馏水组;(3)蒸馏水组磨牙组织转化生长因子β1和β-连环蛋白的表达量显著低于正常对照组(P<0.05);骨疏康组磨牙组织中转化生长因子β1和β-连环蛋白的表达水平随时间推移呈上升趋势,在9周和12周的表达水平显著高于蒸馏水组(P<0.05);(4)结果表明,骨疏康可能通过激活调节转化生长因子β1和β-连环蛋白,促进Beagle犬磨牙骨组织的成骨分化。

盐酸氯卡色林渗透泵控释片在Beagle犬中的血药浓度测定方法的建立及其药代动力学研究

目的建立UPLC-MS/MS法测定Beagle犬血浆中盐酸氯卡色林的浓度,并用于盐酸氯卡色林渗透泵控释片在Beagle犬体内的药代动力学研究。方法采用随机交叉法设计实验,以卡马西平为内标,利用乙腈沉淀血浆中的蛋白进行血浆样品处理。色谱柱为Phenomenex Polar C_(18)柱(100 mm×2.1 mm,3μm),流动相是乙腈-水(含10 mmol·L^(-1)醋酸铵和0.1%甲酸)(40∶60)。采用电喷雾离子源,正离子、多反应监测方式进行定量,盐酸氯卡色林和卡马西平的检测离子对分别为m/z 196.2→129.1、m/z 237→194.1。结果盐酸氯卡色林的线性范围为1~500μg·L^(-1)(r=0.9992),提取回收率为87.70%~89.10%,批内、批间的精密度RSD≤9.7%,准确度、基质效应均符合要求,盐酸氯卡色林分别在-20℃冰箱保存45 d、反复冻融3次、室温放置24 h、以及处理后的样品在自动进样器中放置6 h的稳定性均良好。控释片和速释片的药动学参数T_(max)分别为(8.0±1.27)h和(1.0±0.13)h,C_(max)分别为(70.56±3.73)μg·L^(-1)和(176.33±16.73)μg·L^(-1),AUC_(0-t)分别为(966.33±37.56)μg·h·L^(-1)和(973.05±69.09)μg·h·L^(-1)。结论建立的UPLC-MS/MS方法,可用于Beagle犬血浆中盐酸氯卡色林药代动力学研究,渗透泵控释片具有缓释作用。

葛根素及其磷脂复合物在Beagle犬体内的药动学比较

目的研究葛根素及其磷脂复合物中葛根素在B eag le犬体内药动学。方法采用HPLC法测定犬血中葛根素,以同组犬(3只,雄性)交叉口服葛根素及其磷脂复合物,药-时曲线数据经3P 97药动学计算程序处理。结果分别以葛根素及其磷脂复合物给B eag le犬口服(剂量为葛根素52.5 m g/kg),葛根素的药-时过程符合开放型双室一级动力学模型,葛根素口服的AUC、Cm ax、tm ax分别为(10.91±4.83)m g.h/L、(3.00±1.13)m g/L、(1.62±0.30)h,而葛根素磷脂复合物的AUC、Cm ax、tm ax分别为(13.67±2.72)m g.h/L、(1.91±0.51)m g/L、(2.38±1.27)h,统计结果表明AUC之间差异有显著性。结论形成磷脂复合物可提高葛根素在B eag le犬体内的吸收。

聚山梨酯80及其配制的鱼腥草注射液致Beagle犬类过敏反应实验研究

目的评价多种聚山梨酯80及其配制的鱼腥草注射液静脉给药对Beagle犬的致敏性。方法 Beagle犬是类过敏反应的敏感动物,以动物反应症状与血浆组胺升高为判断标准,综合判定类过敏反应。Beagle犬随机分为18组,每组3只,分别静脉注射不同厂家0.25%、0.10%、0.05%浓度的聚山梨酯80灭菌水溶液,或分别含0.25%、0.30%不同厂家聚山梨酯80的鱼腥草注射液。给药体积10mL/kg,前肢静脉恒速注射(速度5mL/min)。观察给药前至给药后24h每只犬的变化,记录症状出现、消失时间,并根据反应症状的轻重判定级别。给药前及停药后10min取血,ELISA方法检测血浆组胺含量,并结合反应症状级别,综合判定致敏性。结果各厂家、各浓度(0.05%、0.10%、0.25%)聚山梨酯80灭菌液以及各组鱼腥草注射液,均未导致Beagle犬出现典型的类过敏反应症状及血浆组胺升高1倍以上。综合判定,各组受试液均未诱发Beagle犬出现典型的类过敏反应。结论控制聚山梨酯80质量,并将使用浓度限定在0.30%或0.25%以下,可以在保证药物增溶效果的同时避免类过敏反应的发生。

HPLC-MS法测定Beagle犬血浆中氧化苦参碱及其药代动力学

目的 :建立Beagle犬血浆中氧化苦参碱的LC MS测定法 ,测定它的绝对生物利用度。方法 :Beagle犬 6只 ,随机分为 2组 ,采用单剂量双周期自身交叉设计 ,分别给犬单剂量静脉注射或灌胃氧化苦参碱 ,用LC MS法测定给药后的血浆中药物浓度。结果 :氧化苦参碱在 2～ 5 0 0 0 μg·L-1的范围内呈良好的线性关系 (r =0 .9990 ) ,最低检出限达0 .6 μg·L-1,日内和日间误差均小于 4 .2 % ,方法回收率大于 96 .7% ;氧化苦参碱的药 时数据符合二室模型 ,Cmax为 2 .4 2± 0 .97μg·L-1,Tmax为 1.0± 0 .3h ,T1 2 β为 5 .5 4± 1.5 8h ,AUC0→∝ 为 6 .12± 1.0 8μg·L-1·h-1,绝对生物利用度为 (19.4± 9.0 1) %。结论 :该法灵敏、简单 ,专属性强 ;

去势Beagle犬前列腺增生模型的建立

目的 :利用Beagle犬建立前列腺增生模型。 方法 :2年龄雄性Beagle犬 2 4只 ,随机分成对照组和 3个剂量的实验组共 4组 ,每组 6只 ,去势 2个月后 ,肌注给药。实验组分别给予丙酸睾酮 (TP) 0 .8、2 .5、7.5mg/kg ,对照组给予等体积溶剂。 2个月后 ,处死 12只动物 ,取前列腺组织 ,称重测量体积 ,放免法测定血清及前列腺组织中双氢睾酮 (DHT)水平 ,组织切片观察前列腺腺腔面积及腺上皮细胞高度。B超测量去势前、后 2个月及给予TP 2个月时犬前列腺体积。 结果 :B超结果显示 ,去势 2个月后 ,各组犬前列腺体积较去势前均明显缩小 (P均 <0 .0 1) ;给予TP 2个月后 ,各实验组犬前列腺体积明显大于对照组 (P均 <0 .0 1)。各实验组犬前列腺湿重及实际体积与对照组相比 ,均明显增重增大 (P均 <0 .0 5 ) ,并存在剂量依赖关系。犬血清及前列腺中DHT含量随TP剂量的增大而增加。显微图像分析结果显示 ,犬前列腺腺腔面积随TP剂量增大而增加 ,腺上皮细胞高度也随TP剂量增大而增高。 结论 :给予去势Beagle犬TP 2个月后 ,可成功建立前列腺增生模型。

UPLC-MS/MS同时测定Beagle犬血浆中原儿茶酸、异荭草素和野黄芩苷

目的建立Beagle犬血浆中同时测定原儿茶酸、异荭草素和野黄芩苷的超高效液相色谱-串联质谱分析方法。方法 Beagle犬单次股静脉注射88 mg.kg-1的注射用复方荭草(冻干粉针),分时取血处理。色谱采用Waters BEH C18反相柱,流动相为乙腈-水(含0.1%甲酸)梯度洗脱,质谱采用多反应离子监测(MRM)方式进行检测,用于定量分析的离子对分别为原儿茶酸m/z109.0→m/z152.8、异荭草素m/z449.2→m/z299.1、野黄芩苷m/z463.1→m/z287.1。结果原儿茶酸、异荭草素和野黄芩苷的线性范围分别为0.002～0.569、0.022～5.450和0.024～5.860 mg·L-1,方法的准确度,日内、日间精密度和稳定性均符合要求。结论该方法快速、灵敏、专属性强,可用于原儿茶酸、异荭草素和野黄芩苷的药代动力学研究。

丹参葡萄糖注射液对Beagle犬的长期毒性研究

目的 在动物体内验证丹参葡萄糖注射液 (丹参 )临床毒副反应及性质。方法 以丹参 0 .8、2 .0、5 .0 g/(kg·d)对Beagle犬连续静脉缓慢注射 15 0d及 180d ,观察用药期间毒性反应及停药 2 1d期间恢复情况。结果 丹参高剂量组用药 30～ 15 0d、中剂量组 4 5d、135d及 15 0d动物体重增长明显减慢 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 ) ;用药期及恢复期各组动物进食量、心电图、血液学、尿液等各项指标均在正常值范围内 ;丹参高剂量组用药 180d ,凝血时间延长 ,高、中剂量组用药 180d ,AST明显升高 ,白蛋白降低 ;高剂量组部分动物有不同程度的肝脂肪变性及肝细胞水肿 ,但停药 2 1d基本恢复正常。结论 丹参高剂量长期应用对Beagle犬肝细胞有一定毒性 ;其无毒反应剂量大约为 2 .0g/ (kg·d)

低强度脉冲超声波对Beagle犬Ⅱ度根分叉病变的辅助效应

背景:低强度脉冲超声波主要用于促进骨折愈合及提高新生骨组织密度,尚未见其对Ⅱ度根分叉病变组织学修复效应的报道。目的:观察低强度脉冲超声波对Ⅱ度根分叉病变的组织学修复效应。方法:5只Beagle犬各取2颗下颌第4前磨牙颊侧作为实验区,建立Ⅱ度根分叉病变模型,分别分为超声组和对照组并在颊侧缺损龈方根面制备切迹作为参照点,高糖饲养8周。超声组行根面平整术,术后1周行低强度脉冲超声波(90mW/cm21.5MHz,200μs,1kHz)处理20min/d,对照组行根面平整术和假处理。6周后取实验区域组织制备脱钙切片,苏木精伊红染色、Masson染色行根分叉区域组织测量分析。结果与结论:超声组根分叉区新生牙槽骨沿根面生长,根分叉区可见牙龈上皮;对照组根分叉区以结缔组织生长为主,可见大量牙龈上皮和少量新生骨组织。超声组新生牙槽骨胶原呈"红-蓝"相间,以红染为主;对照组呈现蓝染,即超声组的新生牙槽骨胶原较对照组成熟。超声组牙槽骨、牙骨质、牙周膜新生量均大于对照组(P<0.05)。提示90mW/cm2低强度脉冲超声波可促进根分叉病变新生牙槽骨胶原成熟和改建。

LC-MS法测定Beagle犬血浆中苦参碱及其药代动力学

目的 :建立Beagle犬血浆中苦参碱的LC MS测定法 ,测定其药物动力学及绝对生物利用度。方法 :采用LichrospherC18柱 ,2 5 0mm× 4 .6mm (ID) ,5 μm,柱温 :2 5℃ ;流动相 :10mmol·L-1醋酸胺水溶液 甲醇 (2 5 75 ) ,流速 :1ml·min-1。电喷雾离子化 (ESI)方式 ,采用选择性离子检测 ,检测离子为正离子 ,苦参碱的离子是 [M +H]+ ,m z 2 4 9.2。结果 :苦参碱在 2～ 5 0 0 0 μg·L-1的范围内呈良好的线性关系 (r =0 .9975 ) ,最低检出限达 0 .3μg·L-1。日内和日间误差均小于 4 .5 % ,方法回收率大于96 .6 % ;药 时数据符合二室模型 ,Cmax 为 382 1±70 5 μg·L-1,Tmax为 0 .4± 0 .1h ,T1 2 β为 11.2± 2 .1h ,AUC0→∝ 为 74 46± 14 5 6 μg·h·L-1,绝对生物利用度为(6 0 .1± 19.0 ) %。结论 :该法灵敏、快速、简单 ,专属性强 ,苦参碱在Beagle犬体内有较高的绝对生物利用度。

化州柚提取物对Beagle犬心血管系统和呼吸系统的影响

目的研究化州柚提取物对Beagle犬心血管系统和呼吸系统的影响。方法采用生理记录仪观察灌胃给药前后Beagle犬血压、呼吸频率、呼吸幅度、Ⅱ导联P、R、T、QRS波、PR、QT间期等指标的变化。结果给药后各时间点的指标与给药前相比,无显著性差异(P>0.05)。结论单次经口给予化州柚提取物5、50、300mg/kg,对Beagle犬心血管系统和呼吸系统无不良影响。

抗EB病毒口服液对Beagle犬的长期毒性研究

目的评价抗EB病毒口服液的长期毒性作用,为临床实验提供安全性依据。方法将Beagle犬分为抗EB病毒口服液76.41、25.47、8.49g生药/kg3个剂量组及空白对照组,每组6只,♀♂各半,每天灌胃给药1次,每周连续给药6d,共26wk,检查各指标并进行恢复性观察。结果给药期间高剂量组犬出现明显呕吐症状,中剂量组犬也出现相同胃肠道刺激症状,但反应较轻。恢复期高剂量组1只犬出现尿蛋白强阳性,中剂量组1只犬出现尿潜血强阳性。各剂量组犬的体重、体温、食量和心电图、血液学、血液生化学、眼科、骨髓、尿常规、病理组织学检查等均未见与药物有关的明显毒性反应。结论抗EB病毒口服液对Beagle犬的无毒反应剂量为8.49g生药/kg。

Beagle犬牙龈成纤维细胞的体外分离培养

背景:Beagle犬性情温和、遗传背景明确,且牙周结构与人类相似,是研究牙周疾病的常见大型动物模型。目的:体外分离、培养、纯化Beagle犬牙龈成纤维细胞。设计、时间及地点:观察对比实验,于2006-09/2007-02在福建医科大学附属口腔医院中心实验室和解放军南京军区福州总院比较医学科完成。材料:Beagle犬5只,12月龄,体质量10～13kg,雄性。方法:基础麻醉下,切取Beagle犬游离龈。使用半消化+改良组织块法分离、培养、纯化Beagle犬牙龈成纤维细胞;手术及组织学观察确定组织块来源。以经成骨诱导的骨髓基质干细胞作为阳性对照组,试剂盒内标准品作为标准组,蒸馏水作为空白组。主要观察指标:免疫细胞化学及碱性磷酸酶检测明确细胞来源;四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖状况。结果:未经胰酶处理的组织块边缘锐利,组织致密;上皮细胞迅速增殖,呈鹅卵石样占满组织块周边。经胰酶处理过的组织块疏松,其周围上皮细胞少,成纤维样细胞游出迅速。波形丝蛋白染色阳性,角蛋白染色阴性。结果证实所取组织块为Beagle犬游离龈;免疫细胞化学证实细胞源于中胚层。此成纤维样细胞基本不表达碱性磷酸酶,细胞增殖状况良好。结论:使用半消化+改良组织块法能够分离、纯化Beagle犬牙龈成纤维细胞。

参麦注射液活性成分在正常和心肌缺血Beagle犬体内的药动学研究

目的:研究参麦注射液活性成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Re在正常和心肌缺血Beagle犬体内的药动学。方法:取6只Beagle犬sc盐酸异丙肾上腺素(1.1 mg/kg)以复制心肌缺血模型(模型组),另取6只犬sc等体积生理盐水(2.2 ml/kg)作为对照组。两组犬分别于第1天上午8:00、下午13:00和第2天上午8:00给药。第2天给药后1 h,各组犬iv参麦注射液(1.6 ml/kg),在1h左右滴注完成。各组犬于iv开始后0、0.25、0.5、0.75、1(iv结束)、1.5、2、3、4、6、8、12、24 h取血。采用液相色谱-质谱联用法测定人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的血药浓度,Win Nonlin 6.3软件计算药动学参数并进行比较。结果:人参皂苷Re在模型组犬体内的t_(1/2)为(2.69±1.12)h,AUC_(0-24 h)为(2 060.78±812.18)h·μg/L,V_z为(46.16±20.98)ml,CL为(9.02±4.45)ml/h;与正常组比较,AUC_(0-24 h)显著升高,V_z、CL显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。而两组犬人参皂苷Rg_1的药动学参数无显著性差异(P>0.05)。结论:心肌缺血会影响Beagle犬体内人参皂苷Re的消除,对人参皂苷Rg_1药动学过程无明显影响。

LC/APCI/MS/MS测定Beagle犬口服雷公藤片后血浆中雷公藤甲素

目的建立LC／APCI／MS／MS法测定Beagle犬血浆中雷公藤甲素，研究Beagle犬单剂量口服雷公藤片后体内雷公藤甲素药动学。方法血浆样品经乙酸乙酯提取，色谱柱为AgilentZORBAXSBC18（3．0mm×100mm，3．5μm），运用甲醇～醋酸铵缓冲液梯度洗脱，多反应监测（MRM）雷公藤甲素（[M＋H]＋，m／z378．5／361．3）和内标泼尼松龙（[M＋H]＋，m／z361．3／147．0）。Beagle犬单剂量口服雷公藤片（1片／kg）后，采用该方法测定血浆中雷公藤甲素，DAS（1．0）软件对雷公藤甲素药-时曲线进行拟合，并计算药代动力学参数。结果在0．16—20．55μg·L^-1内，雷公藤甲素与内标的峰面积比值与浓度的线性关系良好，日内日间精密度小于6．15％，提取回收率大于79．14％。Beagle犬口服雷公藤片后，雷公藤甲素主要药动学参数为：Cmax／μg·L^-1：2．78±0．387；Tmax／h：1．75±0．76；T1/2／h：2．59±0．60；CL／L·kg^-1·h^-1：2．768±0．606；AUC（0～9）／μg．L^-1．h：11，539±1．491；AUC（0-∞）／μg·L^-1·h：13．185±1．686。结论建立的LC／APCI／MS／MS分析方法准确灵敏，适用于雷公藤片中雷公藤甲素在Beagle犬体内的药代动力学研究。

龙胆苦苷在Beagle犬体内药代动力学研究

目的建立龙胆苦苷在Beagle犬血清中的含量测定方法,研究龙胆苦苷在Beagle犬体内的动力学规律。方法建立快速敏感的高效液相色谱检测方法,使用外标法,以龙胆苦苷静脉注射给药,Beagle犬含药血清样品经液-液萃取后在C18反相色谱柱上进行分离测定。结果龙胆苦苷血药浓度在0.1343～687.375μg·mL-1浓度范围内线性关系良好(r2=0.99993)。方法回收率为81.15%～97.99%,最低检测限为0.1343μg·mL-1。结论龙胆苦苷在Beagle犬体内的药动学过程表现为静脉内给药一房室模型,其中平均半衰期t1/2=1.1324h,消除速率常数Ke=0.5811h-1,表观分布容V=0.5316L·kg-1,消除率CL=0.3274L·kg-1·h-1。提示龙胆苦苷在体内经历了迅速分布、消除过程,在体内不易蓄积。

电针刺激对Beagle犬展神经损伤修复的研究

目的建立展神经损伤电针刺激的动物模型,研究电针刺激对展神经损伤修复的疗效。方法 24只Beagle犬随机均分为单纯损伤组（对照组）及损伤后电针刺激组（实验组）。行展神经脑池段压榨损伤,展神经刺激电极及外直肌记录电极植入。于术后1-12周,测量2组瞳孔中心至外眦内侧缘距离。结果所有Beagle犬均能耐受手术,颅内刺激电极和外直肌记录电极成功植入;术后1-2周,2组Beagle犬瞳孔中心至外眦内侧缘距离比较差异无统计学意义,术后4-12周,实验组Beagle犬瞳孔中心至外眦内侧缘距离小于对照组（P〈0.01）。结论成功建立应用于展神经损伤电针刺激的动物模型,电针刺激可以明显促进损伤的展神经恢复。

实验Beagle犬血液学及血液生物化学参考值的探讨

目的了解不同产地、不同年龄Beagle犬血液学及血液生物化学的参考值,使实验结果更加准确。方法利用法国产BSAIC半自动血液生化分析仪和德国产全自动血球计数仪Medicon4000对不同产地、两个年龄段Beagle犬10项血液生化值和9项血液常规值进行测定。结果与文献报道的结果一致;与正常人参考值比较,除ALP较高外,结果均在正常范围内波动。结论建议在实验选择动物时,要密切注意实验动物的来源及年龄的一致性。

Beagle犬的生物学特性及在药理毒理试验中的应用

对国内Bealge (比格 )犬的体长、体重、血液学、血液生化学、心血管系统和呼吸系统的生物学特性进行了评价 。