沉默BECN1对人三阴性乳腺癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨沉默人三阴性乳腺癌(TNBC)细胞MDA-MB-231中beclin 1(BECN1)基因后其生物学特性的变化。方法:设计3组沉默BECN1基因的慢病毒(干扰组1、干扰组2和干扰组3)以及阴性对照慢病毒(NC组)分别转染MDA-MB-231细胞,空白组不做处理。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测BECN1 mRNA表达,蛋白免疫印迹(WB)实验检测各组细胞BECN1蛋白与自噬标志蛋白LC3B的表达,筛选出抑制率最高的一组用于后续实验。细胞计数试剂8(CCK-8)检测各组细胞的增殖情况、Transwell实验检测各组细胞的迁移及侵袭能力、流式细胞术检测各组细胞凋亡率与周期分布情况。结果:慢病毒感染细胞后,干扰组2中BECN1的信使核糖核酸(mRNA)与蛋白的表达量最低(P<0.05),WB结果显示干扰组2的LC3B蛋白中LC3-Ⅱ/LC31-Ⅰ的比值明显低于空白组和NC组(均P<0.05),选取干扰组2用于后续实验。沉默BECN1基因后细胞的增殖、迁移和侵袭能力均明显降低(均P<0.05);流式细胞术结果显示干扰组2、NC组与空白组的凋亡率没有明显差异;相比于空白组与NC组,干扰组2处于G0/G1期的比例升高(P<0.05)。结论:BECN1基因沉默可以降低细胞的自噬水平,抑制TNBC MDA-MB-231细胞增殖、迁移与侵袭能力。

蛇六谷石油醚提取物对BECN1基因敲减的人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响

目的应用RNA干扰(RNAi)技术干扰BECN1基因的表达,探讨蛇六谷石油醚提取物对BECN1基因敲减的人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响。方法用前期实验构建成功的GV112(LV-BECN1-RNAi)重组慢病毒表达载体转染人胃癌SGC-7901细胞。MTT法检测蛇六谷石油醚提取物抑制胃癌细胞增殖的有效浓度,确定实验药物浓度。每24h(共120h)用CCK法检测人胃癌SGC-7901细胞KD+蛇六谷(BECN1基因敲减组)、NC+蛇六谷(阴性对照组)、CON+蛇六谷(空白组)的细胞活性。结果蛇六谷石油醚提取物能有效抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,且呈明显的浓度依赖性(P<0.01);当人胃癌SGC-7901细胞BECN1基因敲减时则会降低其抑制作用(P<0.05)。结论BECN1基因敲减能减弱蛇六谷石油醚提取物抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖的能力,这可能是通过调节BECN1基因的表达诱导细胞自噬,从而抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖。

BECN1基因在绵羊皮肤毛囊上表达的研究

BECN1基因是细胞自噬的启动基因之一。检测该基因在细毛羊不同发育时期皮肤毛囊上的表达规律,可为细毛羊皮肤毛囊发育是否存在细胞自噬提供参考。利用实时荧光定量、免疫组化及免疫印迹法对BECN1基因分别在细毛羊休止期、生长期、退行期皮肤毛囊上的定位和表达进行了研究。结果表明,BECN1基因在细毛羊各个时期皮肤毛囊的内根鞘、外根鞘以及毛母质中均有阳性表达,但以退行期最为显著;在细毛羊各个时期的毛囊中均检测到BECN1基因的转录与蛋白表达,均以退行期表达量最高,且显著高于休止期和生长期(P<0.05),而生长期与休止期间的表达量无明显差异(P>0.05)。上述结果间接表明,细毛羊的毛囊周期中均存在细胞自噬现象,并以退行期最为明显。