荧光报告系统验证miR-142-5p的靶基因Becn1

目的验证miR-142-5p的靶基因——自噬相关基因Becn1。方法生物信息学预测miR-142-5p与Becn1的结合位点,构建含有结合位点的Becn1基因3＇UTR野生型和突变型质粒,将重组质粒与miR-142-5p-mimics或miR-NC共转染C2C12细胞,检测荧光素酶活性。结果 miR-142-5p与Becn1的3＇UTR存在一个结合位点（123~129）;成功构建野生型重组质粒p GL3-Becn1-3＇UTR和靶位点含3个碱基突变的重组质粒Mut-3＇UTR;与共转染p GL3-Becn1-3＇UTR和miR-NC组相比,共转染p GL3-Becn1-3＇UTR和miR-142-5p-mimics组荧光素酶活性显著下降,约为41.2%（P〈0.01）;而与对照组相比,共转染Mut-3＇UTR和miR-142-5p-mimics组的荧光素酶活性下降不明显（P〉0.05）。结论初步验证自噬相关基因Becn1是miR-142-5p的靶基因。

蛇六谷石油醚提取物对BECN1基因敲减的人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响

目的应用RNA干扰(RNAi)技术干扰BECN1基因的表达,探讨蛇六谷石油醚提取物对BECN1基因敲减的人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响。方法用前期实验构建成功的GV112(LV-BECN1-RNAi)重组慢病毒表达载体转染人胃癌SGC-7901细胞。MTT法检测蛇六谷石油醚提取物抑制胃癌细胞增殖的有效浓度,确定实验药物浓度。每24h(共120h)用CCK法检测人胃癌SGC-7901细胞KD+蛇六谷(BECN1基因敲减组)、NC+蛇六谷(阴性对照组)、CON+蛇六谷(空白组)的细胞活性。结果蛇六谷石油醚提取物能有效抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,且呈明显的浓度依赖性(P<0.01);当人胃癌SGC-7901细胞BECN1基因敲减时则会降低其抑制作用(P<0.05)。结论BECN1基因敲减能减弱蛇六谷石油醚提取物抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖的能力,这可能是通过调节BECN1基因的表达诱导细胞自噬,从而抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖。

平喘颗粒对哮喘大鼠肺组织Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达的影响

目的:通过测定Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达,探讨平喘颗粒对哮喘大鼠自噬的抑制机理。方法:随机将30只Wistar大鼠分为3组,正常组、模型组、平喘颗粒组,每组10只。在第2次致敏后第4天开始给予给与中药药液灌胃。平喘颗粒组按体质量给予平喘颗粒溶液1 mL/100 g灌胃,激发阶段则每次激发前1h灌胃;正常组与模型组均予等量生理盐水灌胃。各组均于末次激发24 h后处死,取肺组织,光镜下观察肺组织的病理学改变。采用免疫组化SP法检测肺组织Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达。结果:平喘颗粒组和模型组大鼠肺组织Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达均高于正常组,差异有统计学意义(P<0.01);平喘颗粒组Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白的表达较模型组明显受到抑制,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:平喘颗粒能减轻哮喘后的炎症反应,并且可抑制细胞自噬信号通路,从而保护肺部组织细胞,减轻哮喘发作。