巴马猪BECN2基因的克隆及其mRNA组织表达分析

为了探究巴马猪BECN2基因编码蛋白的生物学特性及其mRNA在巴马猪不同组织中表达水平,试验采用PCR方法扩增并克隆巴马猪BECN2基因CDS全长序列;通过生物信息学方法对其编码蛋白进行分析并构建系统进化树;应用实时荧光定量PCR方法检测巴马猪BECN2基因mRNA在不同组织中表达情况。结果表明:经PCR扩增巴马猪BECN2基因CDS全长序列大小为1302 bp;巴马猪BECN2蛋白是一种结构较不稳定的亲水性蛋白,由433个氨基酸组成,亮氨酸含量最高,占比为13.2%。巴马猪BECN2蛋白二级结构主要由α-螺旋、无规则卷曲、β-折叠和β-转角构成,占比分别为50.04%、34.41%、10.16%、1.39%,其氨基酸主要存在于细胞膜外;亚细胞主要定位在细胞核和线粒体中,占比为56.5%和21.7%;存在16个磷酸化位点,分别为10个丝氨酸、5个苏氨酸、1个酪氨酸位点,在第1~20个编码氨基酸位点可能存在信号肽结构。巴马猪BECN2基因核苷酸序列与江豚、海豚的同源性较高,为84.3%。巴马猪BECN2蛋白氨基酸序列与牛和羊的遗传距离较近。BECN2基因mRNA在巴马猪不同组织中均有表达,且在卵巢、肺脏、心脏、睾丸、空肠、大脑、小脑、胃、皮肤、骨骼肌组织中表达量较高。说明巴马猪BECN2基因在细胞中发挥关键作用。