基于3种抗原以IgM捕获酶联免疫吸附试验对登革病毒血清分型[英]／Shu PY…／／J Chin Microbiol

登革热是由黄病毒科的登革病毒引起，并影响全世界热带和亚热带城镇的地方性病毒流行病。近年来，登革热及更严重的登革出血热和登革休克综合征已成为分布更广的公共卫生问题和重点流行病。登革病毒有4个不同血清型，初次感染后，对同型登革病毒可导致终身保护性免疫，而对再次感染其他3型登革病毒，

用抗原捕获酶免试验检测CSFV抗原

加拿大学者Clavijo等建立了一种抗原捕获酶免疫试验(EIA),直接检测10％组织悬液中古典猪瘟(CSF)病毒抗原,并与病毒分离和PCR比较。该试验所用的是用生物素标记的单克隆抗体作背景,链霉胺包被微量反应板,猪抗CSF病毒抗体和兔抗猪HRPO结合物为检测系统。

BED捕获酶免疫试验方法检测HIV-1新发感染的系统评价

目的 分析BED捕获酶免疫试验（BED-CEIA）是否适合在大范围人群内应用,对BED-CEIA与队列研究获取HIV-1新发感染率的一致性和BED-CEIA错分现象对新发感染率结果影响进行系统评价.方法 利用系统评价的方法分析符合纳入标准的文献,其中10篇入选BED-CEIA与队列研究获取HIV-1新发感染率一致性的探讨,11篇文献入选BED-CEIA的错分现象研究.结果 BED-CEIA计算的HIV-1新发感染率与队列观察的新发感染率一致性与研究地区、研究设计相关,非洲地区的一致性较差,BED-CEIA的样本采集时间与队列随访同步研究获取的新发感染率一致性较好.BED-CEIA的错分现象研究共收集到7303份长期感染者（LTI）样本,错分为新近感染的样本数为432,错分粗率为5.9%,其95%CI：5.36～6.44.BED-CEIA的错分率与HIV-1感染时间和CD4＋T淋巴细胞计数相关,而与人群（中国女性性工作者、静脉吸毒人群）和地区（中国与非洲地区）无显著相关.结论 BED-CEIA计算的HIV-1新发感染率与队列研究观察的新发感染率,其一致性随研究地区和研究设计的不同而有差异;BED-CEIA错分现象与HIV-1感染者的免疫状况相关.

用基于重组抗原的捕获酶联免疫试验检测HIV-1新发感染

目的探讨基于重组抗原的捕获酶联免疫试验(RCEIA)检测HIV-1新发感染的可行性。方法使用来自队列研究的HIV-1抗体阳转系列样品,包括来自40名HIV-1感染者的140份血浆样品,用RCEIA试验检测,获得吸光度(OD)值和标准化吸光度(ODn)值。作折线图观察ODn值与阳转时间的关系;用SPSS 22.0软件作ROC曲线,获得RCEIA试验的临界值(cutoff值)与平均新发感染期(MDRI);作散点图比较RCEIA试验与BED HIV-1捕获酶联免疫试验(BED试验)检测结果的相关性。结果14板RCEIA试验的检测结果显示,校准品和3份阳性对照OD值的变异系数为7.0%~8.9%,阳性对照ODn值的变异系数为3.1%~7.7%。针对HIV-1阳转系列样品,反映特异性IgG占总IgG比例的RCEIA试验的ODn值随阳转时间的推移呈上升趋势,但存在个体差异。初步得到RCEIA试验的最佳cutoff值为0.8,平均新发感染期为197天,假新发感染比例与BED试验的差异无统计学意义(P=1.000)。RCEIA试验与BED试验检测结果ODn值的相关性较好(r=0.907)。结论基于重组抗原的RCEIA操作稳定性好,可以在群体水平区分HIV-1新发感染与长期感染,其最佳cutoff值及用于HIV-1新发感染率估算的技术参数(平均新发感染期和假新发感染率)有待通过增加样品量进一步测算。

HIV-1新发感染捕获酶联免疫试验重组抗原的研究

目的构建、表达1型艾滋病病毒(HIV-1)重组蛋白,并尝试用于HIV-1新发感染捕获酶联免疫试验。方法设计、合成1种HIV-1重组蛋白(编号HIV-Ag-R03)的核酸序列,将它与pET30a-trx载体骨架连接、构建重组质粒。将重组质粒转化BL21(DE3)细胞,经异丙基硫代半乳糖苷诱导表达蛋白质。用重组蛋白包被酶标板,检测48份血浆样品(其中HIV-1抗体阳性、HIV阴性各24份),分析蛋白质的抗原性。将HIV-Ag-R03标记辣根过氧化物酶(HRP)后,取代BED捕获酶联免疫试验(BED CEIA)试剂盒中的BED肽及后续组分,比较2种方法检测18份HIV-1阳性样品的结果相关性。结果成功构建了HIV-Ag-R03的重组质粒,核酸序列确认无误。获得了包涵体表达的蛋白质,经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析大小与预测值一致。使用包被HIV-Ag-R03的间接酶联免疫试验检测48份1∶101稀释血浆样品,结果HIV-1抗体阳性样品的吸光度(OD)值(1.513±0.991)显著高于HIV阴性样品的OD值(0.022±0.008),差异有统计学意义(t=7.336,P<0.01)。用HIV-Ag-R03-HRP取代BED CEIA试剂盒中的BED肽及后续组分,调试HIV-Ag-R03-HRP的最佳稀释度为1∶2 500,18份HIV-1阳性样品的检测结果ODn值与BED CEIA的ODn值相关性好(r=0.939,P<0.01)。结论获得了1种具有抗原性的重组蛋白并成功标记HRP,建立了检测HIV-1新发感染的新模式。

用快速敏感的抗原捕获ELISA法定量检测肌红蛋白

纯化肌红蛋白(Mb)是骨胳肌、心肌细胞的构成蛋白,血清Mb升高是肌细胞损伤的早期标志之一。心肌梗塞(AMI)时血Mb的升高与峰值常早于多种酶与同工酶,故可作为重要的辅助诊断指标。检测Mb国内已有放射免疫药盒,但放免法有着众所周知的局限性。我们建立的反向血凝技术也难以推广。国外有关ELISA检查Mb的技术均很复杂,现将我们建立的一种抗原捕获ELISA法报告如下。本法灵敏度、准确性、精密度均符合常规试验要求,可在2小时内发出报告。材料与方法 (一)Mb与抗Mb抗体制备同以往方法。Mb自手术切除的人胸肌提取,浓度9.2mg/

捕获ELISA可用于鉴定鸡细小病毒特异性抗体

最近，美国农业部农业研究服务处的科研人员开发了一种酶联免疫吸附试验（ELISA）用来检测鸡血清中的特异性细小病毒抗体。他们采用重组杆状病毒载体对鸡细小病毒的结构性蛋白2（VP2）在昆虫细胞中进行了表达。

酶联免疫吸附试验间接抗体夹心检测SARS-CoV抗原方法的建立和应用

目的制备和鉴定严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARSCoV)核衣壳(N)蛋白单克隆抗体(mAb)和多克隆抗体建立SARSCoVN抗原捕获抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)方法用于SARSCoV感染的早期诊断。方法用基因重组SARSCoVN蛋白免疫BALB/c小鼠和新西兰大白兔制备mAb和多克隆抗体,采用ELISA间接法、免疫荧光和免疫印迹进行筛选和鉴定,用单克隆抗体与兔多克隆抗体进行配对试验,建立抗原捕获抗体夹心ELISA法测定SARSCoVN抗原。结果获得9株特异性针对SARSCoVN蛋白的mAb和高效价的兔多克隆抗体,通过高亲和力的mAb与兔多抗的配对试验,筛选出3株单抗N1E8、N8E1和N10E4混合作为捕获抗体,与兔多克隆抗体和辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG组合作为测定抗体,建立了抗体夹心ELISA法,测定重组SARSCoVN蛋白最高灵敏度为50pg/ml,特异性达99.86%,测定420份血清学确诊的SARS患者血清,其中发病1-10天阳性检出率为90.1%,11-20天检出率为23%,21天以上均为阴性,与其他呼吸道病毒和冠状病毒无交叉反应。结论获得特异性好、亲和力高的单克隆抗体和高效价的兔多克隆抗体,经过抗体的配对和优化,建立了一种灵敏度高、特异性强的SARSCoV抗原的ELISA捕捉法,可应用于SARS早期诊断、溯源及流行病学研究。

2009～2014年陕西省艾滋病哨点监测重点人群 HIV 感染和新发感染检测分析

目的：了解2009-2014年陕西省哨点监测6类重点人群的 HIV 感染率，并估算其 HIV-1新发感染率。方法使用酶联免疫吸附试验（ELISA）和蛋白免疫印迹试验（WB）对2009-2014年陕西省艾滋病哨点监测6类重点人群共计77778人进行 HIV 抗体筛查和确证检测，再应用 BED HIV-1捕获酶联免疫测定法检测其中的确证阳性样品，从而估算其HIV-1新发感染率。结果2009-2014年男男同性性行为人群的 HIV 感染率分别为3.75％，8.77％，3.50％，5.00％，6.20％和5.75％，且呈缓慢上升趋势；HIV-1新发感染率分别为5.04％，8.96％，5.01％，5.95％，4.68％和6.39％，整体呈下降趋势。青年学生、吸毒者、暗娼、孕产妇和性病门诊男性就诊者五类人群的 HIV 感染率和 HIV-1新发感染率均保持较低水平，但性病门诊男性就诊者的 HIV 感染率和 HIV-1新发感染率呈缓慢上升趋势。结论陕西省男男同性性行为人群 HIV 感染率和 HIV-1新发感染率较高，但 HIV-1新发感染率呈缓慢下降趋势，应该继续加大对该人群的干预力度，其他监测人群相对较低，但也有个别人群呈上升趋势，需采取必要的应对方法。

抗人巨细胞病毒重组抗原gp52单克隆抗体的研制及应用研究

目的 :为了获得抗人巨细胞病毒 (HCMV)单克隆抗体 (McAb) ,并将其用于人HCMV感染后的抗体检测。方法 :采用杂交瘤技术获得抗重组HCMV(rhCMV)gp 5 2蛋白的McAb。并用抗人 μ链抗体包被、rhCMVgp5 2蛋白作抗原和HRP -McAb作标记抗体 ,建立了检测抗HCMV抗体的捕获ELISA。用该法检测献血员、病毒性肝炎患者及疑似CMV感染的肝炎综合征患者血清共计 939份。结果 :最终获得 4株 (3E9,5A6 ,4G1 2 ,2H2 )能稳定分泌高效价抗rhCMVMcAb的杂交瘤细胞。它们分别识别gp5 2蛋白上的 2个不同抗原表位 ,2H2识别gp5 2蛋白上的一个表位 ,3E9,5A6和 4G1 2则共同识别另一个表位。用其建立的捕获ELISA ,gp5 2蛋白抗原最佳浓度为1 μg·mL- 1,酶标单抗的工作浓度为 1 :1 6 0 0 ,批内平均变异系数 3.7% ,批间平均变异系数 7.9%。6 34例献血员IgM抗体阳性 1 7例 (2 .7% ) ;2 88例病毒性肝炎患者 ,阳性 1 0例 (3.5 % ) ;1 7例肝炎综合征患者 ,阳性 1 1例 (6 4.7% )。均经免疫印迹法证实。结论 :用gp5 2蛋白及其单抗建立的捕获ELISA ,特异性强 ,灵敏度高 ,不受类风湿因子的影响 ,结果可靠 ,优于全病毒抗原构成的检测试剂 。

两种血小板抗体检测方法的比较

血小板抗体可以引起多种临床疾病或症状，如同种或自身免疫性血小板减少症、输血后紫癜、血小板输注无效等。目前，血小板抗体的检测方法，已报道的有多种，如血小板免疫荧光试验、固相红细胞粘附试验（SPRCA）、单克隆抗体特异性血小板抗原固定术（MAIPA）、改进的抗原捕获酶联免疫吸附试验（MACE）等。笔者以流式细胞术法作为参考方法，

EV71-IgM抗体的检测方法的比较

目的 比较酶联免疫吸附试验（ELISA）间接法和抗体捕获法检测肠道病毒71型-IgM（EV71-IgM）抗体的特异性.方法 分别建立ELISA间接法和抗体捕获法,并对EV71阳性血清、阴性血清进行测定,利用已建立的两种方法对CoxA16阳性血清进行检测,比较两种方法的特异性.结果 ＂间接法＂检测CoxA16阳性血样,以灭活的EV71病毒颗粒作为抗原包被,假阳性检测率100%;改换VP1蛋白包被,虽然特异性有所提高,但是仍有50% 假阳性;抗体捕获法检测CoxA16阳性血样,假阳性检测率为0%.结论 针对EV71-IgM抗体的特异检测,抗体捕获法克服了特异IgG的竞争,特异性更好.

非洲猪瘟病毒(ASFV)结构蛋白p54的表位定位研究

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,对全球养猪业造成严重威胁,给中国以及东南亚在内的一些国家造成了严重的经济损失。急性型ASF感染的猪只在感染后的临床表现为昏睡、厌食、高烧和死亡;在慢性型ASF中,猪只临床症状要轻得多。由于现今没有有效的非洲猪瘟疫苗对猪只进行免疫来避免该病毒的感染。

猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒的研制及初步应用

用PCV2 Cap蛋白单克隆抗体预包被酶标板,将杆状病毒表达系统表达的PCV2 Cap蛋白作为检测用抗原,利用捕获包被法建立了间接ELISA法用于猪圆环病毒2型抗体的检测。通过优化ELISA条件,研制试剂盒并应用于圆环病毒2型疫苗的免疫效果检验。利用研制的试剂盒与IFA、商品化进口和国产同类试剂盒对178份猪血清进行平行检测,总符合率分别为96.63%、97.75%和84.27%,与其他几种常见猪病毒抗体阳性血清无交叉反应。试剂盒批内、批间变异系数分别为2.35%～4.06%和4.87%～6.54%,2～8℃保存15个月稳定,适合于对不同来源猪圆环病毒2型疫苗人工免疫猪血清抗体进行检测。

抗原捕获ELISA检测卡波济肉瘤相关疱疹病毒的方法建立

目的建立检测卡波济肉瘤相关疱疹病毒（KSHV）的抗原捕获ELISA方法，初步探讨其临床应用的可行性。方法以纯化的抗gpK8．1单克隆抗体（McAb）和多克隆抗体（PcAb）配对作为包被抗体和检测抗体，建立和优化抗原捕获ELISA检测方法，评价其敏感性、特异性和重复性，并初步用于3例已知KSHV阳性血清和257例临床血清样品中抗原的检测。结果包被的McAb浓度为5μg/ml、检测抗体浓度为1．6μg/ml时，P／N值最高，检测的敏感度为31．28ng／ml，且与EB病毒（EBV）、单纯疱疹病毒1型（HSV-1）、单纯疱疹病毒2型（HSV-2）等抗原无交叉反应，特异性高。检测3例KSHV阳性患者血清均为阳性，在257例临床血清样品中，4例捕获到KSHV抗原。结论建立了检测KSHV的抗原捕获ELISA方法，为可能的KSHV检测试剂研制提供重要实验依据。

重庆市男男性行为人群2009年HIV-1 BED发病率调查

目的采用连续横断面调查和BED-捕获酶免疫试验(BED-capture enzyme immunoassay,BED-CEIA)估算重庆市男男性行为人群(MSM)2009年艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)的发病率,分析流行趋势,讨论该方法应用于MSM人群的效率。方法利用"滚雪球"和同伴推动抽样方法(RDS),采用标准化问卷收集行为信息并采集血样,对HIV抗体确认阳性者采用BED-CEIA方法检测HIV-1新近感染,根据标准公式和2种校正公式,对该人群2009的发病率按不同年龄、寻找性伴方式、学历、收入状况等进行分层计算,与历年结果进行比较分析。结果共招募MSM志愿者942名,平均年龄为(26.32±7.11)岁,大专及以上学历者598人(63.48%);共发现HIV感染者142人,BED检测为新近感染者62人。重庆市MSM人群2009年HIV-1年发病率为15.43%(95%CI:11.59～19.28),较2008年增长了64.49%,与过去3年有显著性差异。21～30岁年龄组年发病率为15.03%(95%CI:10.42～19.42),通过网络寻找性伴组的年发病率为14.69%(95%CI:10.14～19.24),大专及以上学历组年发病率为13.74%(95%CI:9.25～18.23)。结论重庆市MSM人群HIV-1发病率呈快速上升趋势,2009年发病率校正之后的绝对值与前三年比较,结果有显著性差异;不同的校正公式得到的结果没有显著性差异,但与估计感染率之间存在令人深思的矛盾现象。

重庆市2006-2008年男男性行为人群HIV-1感染发病率调查

目的用连续横断面调查和BED-捕获酶联试验（BED-CEIA）估算重庆市男男性行为（MSM）人群中HIV-1的发病率及其变化趋势。方法利用“滚雪球”和“方便抽样”方法招募得到样本，用BED-CEIA进行HIV-1新近感染检测，并根据标准公式和2种校正公式估算该人群2006--2008年连续3年的发病率；比较不同抽样场所和不同年龄组所得结果，进行发病率的分层分析。结果2006—2008年调查人数分别为1000、1044和945，HIV-1年感染发病率分别为7．01％、7．98％和7．80％。不同采样场所的HIV-1感染发病率差异有统计学意义，2007年和2008年MSM发病率最高的人群分别来自浴室和通过网络寻找性伴的MSM，分别达到17．87％和12．22％；2008年21～25岁年龄组HIV-1发病率最高，达8．69％；不同方法的校正降低了对发病率的估计。结论重庆市MSM人群HIV-1新发感染维持在较高水平，但连续3年的发病率经校正后上升趋势不明显。

HIV-1新发感染快速检测方法的建立与初步评价

目的建立用于I型艾滋病病毒(HIV-1)新发感染检测的斑点金免疫渗滤快速检测方法,并研究其可行性及适用性。方法以特定浓度的HIV-1多亚型重组gp41抗原作为探针,包被硝酸纤维素膜,胶体金标记的抗人IgG作为显色试剂,建立新发感染的快速检测方法。比较该方法与BED捕获酶联法、限制性抗原亲和力方法的一致性。结果采用已知阳转时间的样本用于快速检测方法的建立,检测5例已知感染时间的样本的结果全部正确。分别用3种方法检测90例样本,快速检测方法与BED方法的符合率为88.9%(80/90),与亲和力方法的符合率为94.4%(85/90),快速检测方法与这两种方法检测结果差异均无统计学意义(P>0.05)。结论斑点金免疫渗滤法检测HIV-1新发感染具有快速、简便、经济、直观的特点,可节省检测时间和成本,提高检测效率,具有良好的适用性。

BED—CEIA估计HIV-1新发感染的文献计量分析

BED-捕获酶联免疫技术（BED—CEIA）是近年国际上研发的估计HIV-1新发感染技术，它利用人体感染HIV-1后体内特异IgG占总IgG的比例随感染时间增长而逐渐上升的原理，采用酶联免疫吸附方法将HIV感染者区分为新发感染和既往感染，从而估计HIV新发感染率水平。

不同血清学方法用于新报告HIV-1阳性横断面样本新近感染判定的比较

目的比较限制性抗原亲和力酶免试验(LAg-Avidity EIA)、BED-捕获酶免试验(BED-CEIA)和蛋白印迹(WB)试验,用于新报告1型艾滋病病毒(HIV-1)抗体阳性横断面样本新近感染的判定,分析三种方法应用于横断面样本新近感染判定和检测p31条带是否缺失的可行性。方法对2009-2016年德宏州新报告的HIV-1阳性病例,分别用LAg-Avidity EIA、BED-CEIA进行新近感染检测,统计WB检测条带中p31条带是否缺失,计算不同方法判定的新近感染比例,并对判定结果进行一致率分析。结果 LAg-Avidity EIA和BED-CEIA对8 474例新报告感染者的新近和既往判定结果的一致率为90.77%,p31条带是否缺失和LAg-Avidity EIA及BED-CEIA对新近感染判定结果的一致率仅为87.78%和82.72%。在艾滋病期样本中,LAg-Avidity EIA和BED-CEIA将样本误判为新近感染的比例分别为3.61%和7.95%,p31条带缺失的比例为11.46%。结论三种血清学方法判定横断面样本新近感染比例存在一定差异,LAg-Avidity EIA将艾滋病期样本判定为新近感染的比例较低,更能反映新发感染比例。