ANXⅠ在原发性肺癌及BEP2D转化细胞系中的表达(英文)

[目的]体内、外的许多感染模型证实 ,ANXⅠ介导糖皮质激素的抗炎症效应 ,被认为是糖皮质激素抗炎症效应中的第二信使。然而 ,ANXⅠ与原发性肺癌之间的相关性尚未知晓。本文对此进行研究。[方法]采用免疫组化方法检测60例原发性肺癌标本中ANXⅠ的表达分布 ;蛋白组学方法描绘ANXⅠ在永生化、转化与恶性转化中的表达状况。[结果]ANXⅠ的表达分布与原发性肺癌的组织学分型相关 (P<0.05) ;在永生化细胞中表达丰度低 ,转化细胞较高 ,恶性转化细胞中最高。[结论]ANXⅠ可能参与原发性肺鳞癌形成的启动或促进阶段 ,对人支气管上皮细胞恶性转化具有较为重要的作用。

支气管上皮细胞系BEP2D恶性转化过程中p16基因甲基化改变研究

目的 研究人支气管上皮细胞系BEP2D恶性转化过程中p16基因甲基化改变以及 p16基因mRNA转录情况。方法 选取正常人支气管上皮细胞系BEP2D及其经α粒子照射 2 0周 (R 2 0 )、2 1周 (R 2 1)、3 5周 (T 3 5 )和 5 4周 (T 5 4)的BEP2D细胞株作为研究对象 (其中R 2 0、R 2 1未发生恶性转化 ,而T 3 5、T 5 4已发生恶性转化 ) ,采用甲基化特异性PCR(methylation specificPCR ,MSP)检测各细胞株中 p16基因的甲基化改变情况 ,再运用半定量反转录PCR (retro translationPCR ,RT PCR)检测 p16基因mRNA在各细胞株中的表达情况。结果 ①正常BEP2D细胞株 p16基因未发生甲基化 ,而R 2 0、R 2 1、T 3 5和T 5 4细胞的p16基因均发生了甲基化改变。②与正常BEP2D细胞相比 ,R 2 0、R 2 1、T 3 5和T 5 4细胞 p16基因mRNA转录水平均降低。结论 p16基因甲基化改变发生在肺癌形成的早期阶段。p16基因甲基化可导致

α粒子诱发转化人支气管上皮细胞系BEP2D中XRCC5等基因的突变检测

目的与方法 :用聚合酶链式反应 单链构象多态性分析 (PCR SSCP)方法观察α粒子诱发人支气管上皮细胞系BEP2D细胞转化过程中相关基因的改变。结果 :细胞转化过程中 ,双链断裂修复基因XRCC5发生碱基突变 ,改变从转化早期过程就持续存在 ;而p16基因exon2和hMSH2基因exon12未见变化。结论 :XRCC5基因在α粒子照射后早期发生突变 ,使细胞丧失修复双链断裂损伤的能力 ,是α粒子诱发支气管上皮细胞转化过程中的启动事件之一。

在BEP2D细胞恶性转化过程中TGF-β1对Smad7表达的调节

背景与目的:细胞逃避转化生长因子-β(TGF-β)诱导的对细胞生长、增殖的抑制是许多肿瘤发生的一个重要机制。Smad7是TGF-β信号转导通路的抑制型Smads,它可阻断TGF-β信号在胞浆内的传导,其紊乱是TGF-β信号转导通路紊乱的机制之一。本研究旨在分析在细胞恶性转化过程中,Smad7基因表达是否发生紊乱,TGF-β1对Smad7基因的调控功能有无发生变化,以探索细胞发生恶性转化的原因。方法:培养BEP2D细胞及BERP35T-2细胞,于收获前60min和90min加入不同剂量的TGF-β1,提取细胞总RNA,分别以未加TGF-β1的细胞组作为对照,用Northernblot杂交比较两组细胞Smad7mRNA表达的差异以及细胞对TGF-β1细胞因子刺激的反应性。同时提取BEP2D及BERP35T-2细胞蛋白,用Westernblot方法比较两组细胞内源性TGF-β1表达的差异。结果:Smad7mRNA表达水平恶性转化细胞高于永生化细胞;加了TGF-β1细胞因子后,BEP2D细胞Smad7mRNA表达增高,BERP35T-2细胞表达水平改变不明显。而内源性TGF-β1的表达水平,BERP35T-2细胞稍高于BEP2D细胞。结论:Smad7在辐射致肺癌细胞系中的过表达及对TGF-β1应答的降低可能是辐射诱发肺癌发生的机制之一。

^(238)Puα粒子诱发人支气管上皮细胞BEP2D转化的初步研究

目的 建立氡及其子体诱发细胞转化的模型 ,模拟氡致肺癌的过程。方法 利用2 3 8PuO2 释放的α粒子 ,照射体外培养的人支气管上皮细胞系BEP2D ,诱发转化。结果 1.5Gy单次照射的R15H细胞在连续培养 2 2周后获得了转化 ,转化细胞逐步发生生长动力学和形态学的改变 ,生长失去接触抑制 ,ConA凝集现象明显 ,获得对血清诱导末端分化的抗性和锚着独立性生长能力 ,与对照细胞相比均有统计学意义上的增强。结论 从BEP2D到α粒子转化的R15H细胞能够在一定程度上模拟体内肿瘤的发生发展过程 ,可以为深入了解肺支气管肿瘤发生多阶段过程中的细胞和分子机理提供研究模型。

α-粒子诱发人BEP2D恶性转化细胞的亚克隆及DNA链断裂修复研究

目的 :建立α 粒子诱发人支气管上皮细胞 (BEP2D)恶性转化细胞的克隆细胞系 ,研究其核型和DNA链断裂修复能力。方法 :1.5Gyα 粒子照射的BEP2D细胞传 35代后接种裸鼠成瘤 ,取出瘤细胞进行亚克隆 ,挑出单个克隆扩大培养 ,G带显示分析细胞核型 ,脉冲电场凝胶电泳法检测DNA双链断裂。结果 :亚克隆了 5个恶性转化细胞系 (RP35T 1, 2 , 4 , 5 , 6 ) ,核型基本与BEP2D细胞相近 ,但有着不同的染色体缺失 ,其中 2株细胞 (RP35T 2和RP35T 4 )多倍体高达 40 %,明显高于BEP2D细胞。恶性转化细胞RP35T 1和RP35T 4的DNA双链断裂重接修复缺陷。结论 :建立了α 粒子诱发人BEP2D恶性转化细胞的克隆细胞系 ,DNA链断裂修复缺陷可能是α 粒子致癌的一个重要特点。

α粒子诱发人支气管上皮细胞恶性转化不同时期差异表达基因cDNA文库的构建

目的 :建立α粒子诱发人支气管上皮细胞恶性转化不同时期差异表达基因的文库。方法 :抑制消减杂交法 (SSH)。 结果 :建立了 3个人支气管上皮细胞恶性转化不同时期差异表达基因的cDNA文库。其中 ,A差减文库 (永生化人支气管上皮细胞BEP2D的cDNA为tester,α粒子照射BEP2D细胞后 35代恶性转化细胞R15Hp35的cDNA为driver)有 416个克隆 ,B差减文库 (α粒子照射BEP2D细胞后 2 0代转化细胞R15Hp2 0的cDNA为tester,BEP2D和R15Hp35细胞的cDNA混合后为driver)有 30 1个克隆 ,C差减文库 (R15Hp35细胞的cDNA为tester,BEP2D细胞的cDNA为driver)有 5 86个克隆。,对文库中 70个cDNA克隆单向测序后发现 :6 1个cDNA为己知基因 ,9个cDNA在GenBank中无法查到对应的同源序列 ,可能代表了新基因。结论 :3个差减文库的cDNA可能代表了α粒子诱发人支气管上皮细胞恶性转化不同时期差异表达的基因 ,此为进一步研究α粒子诱导肺癌发生的分子机制奠定了基础。

NNK诱发人支气管上皮细胞恶性转化及氧化损伤机理研究

本文研究ＮＮＫ诱发人支气管上皮细胞（ＢＥＰ２Ｄ）恶性转化及其氧化损伤机理。结果表明，５００μｇ／ｍｌ的ＮＮＫ作用后的第５代细胞具有抗血清生长能力，第１５代细胞具有锚着独立生长特性，第２５代细胞具有裸鼠体内成瘤性，提示ＮＮＫ诱发ＢＥＰ２Ｄ细胞发生了恶性转化。ＮＮＫ作用后，ＢＥＰ２Ｄ细胞产生的过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）、超氧阴离子（Ｏ÷２）和羟自由基（·ＯＨ），以及８－羟基脱氧鸟嘌呤（ＯＨ８ｄＧ）含量均显著增高，提示ＮＮＫ致ＢＥＰ２Ｄ细胞恶性转化过程中涉及到氧化损伤的机理。

α粒子诱发转化人支气管上皮细胞BEP2D中p53基因的突变特点

目的 观察α粒子诱发BEP2D细胞转化过程中p5 3基因的改变。方法 聚合酶链式反应 单链构象多态性分析 (PCR SSCP)。结果 分析发现在细胞转化过程中 ,p5 3基因发生重要改变 ,照射后早期传代细胞中 ,p5 3外显子 7就发生碱基突变 ,经酶切分析为 2 49密码子的改变 ,外显子5 6在照后 2 0代细胞内开始丢失 ,并经Southern杂交证实 ,以上改变均在转化过程中持续存在 ;而外显子 8 9未见变化。结论 p5 3基因外显子 5、6、7是α粒子对DNA损伤的重要靶位点 。

BEP2D细胞恶性转化不同时期差异表达基因的筛选

目的 筛选并鉴定α粒子辐射诱发永生化人支气管上皮细胞 (BEP2D)恶性转化不同时期差异表达的基因。方法 抑制消减杂交 (SSH) ,cDNA芯片。结果 利用SSH构建了BEP2D细胞 3个恶性转化不同时期差异表达基因的文库 ,BEP2D细胞的文库有 4 16个克隆 ,R15H2 0细胞的文库有 30 1个克隆 ,R15H35细胞的文库有 5 86个克隆 ,经cDNAMicroarray验证发现 :BEP2D细胞文库来源的芯片与 3代细胞探针杂交后的阳性信号率为 90 4 %、2 1 6 %和 19 7% ;R15H2 0细胞文库来源的芯片的阳性信号率为 8 6 %、93 8%和 31 6 % :R15H35细胞文库来源的芯片的阳性信号率为 2 3 5 %、18 2 %和 90 7%。结论 联合应用SSH和cDNAMicroarray是筛选和鉴定不同样本中差异表达基因的快速和有效方法 ;经cDNAMicroarray鉴定出的 3个文库中差异表达的cDNA可能代表了α粒子诱发人支气管上皮细胞恶性转化相关的基因。

辐射诱发BEP 2 D恶性转化中Smad 7对TGF-β/SMADs信号通路的调控

目的 研究BEP 2D细胞经辐射诱发恶性转化过程中 ,作为SMAD蛋白家族的抑制分子 ,Smad 7对TGF β SMAD介导信号通路的调控。 方法 用Northernblot检测TGF β刺激之后 ,永生化BEP 2D细胞及辐射诱发恶性转化的BERP 35T 2细胞中Smad 7mRNA的表达水平。人工合成SMAD结合元件 (SBE)重复序列 ,同报告基因碱性磷酸酶融合。构建好的载体同Smad 7真核表达载体共转染 ,TGF β刺激 ,通过报告基因的表达丰度来检测Smad 7对TGF β SMADs介导的信号通路的调控。结果 Northern杂交结果表明 ,永生化细胞Smad 7基因对TGF β刺激的应答正常 ,恶性化细胞的应答降低。基因转染的结果表明 ,永生化细胞中SBE的基础活性较恶性化细胞高 ;TGF β刺激之后 ,永生化细胞中SBE活性显著增强 ,恶性化细胞变化不明显 ;同Smad 7真核表达载体共转染之后 ,两种细胞中SBE活性均显著降低。结论 在辐射诱发细胞发生恶性转化过程中 ,Smad 7基因对TGF β信号通路的反馈调节作用发生紊乱 ,使TGF β信号通路持续处于抑制状态 ,TGF β对细胞的负性调控作用减弱 ,细胞进一步向恶性化发展。

α粒子诱发永生化人支气管上皮细胞恶性转化过程中DNA甲基化的变化

目的分析α粒子辐射诱发永生化人支气管上皮细胞恶性转化过程中DNA甲基化谱的变化。方法分别提取α粒子诱发永生化人支气管上皮恶性转化细胞BERP35T4和对照细胞BEP2D的基因组DNA，用非甲基化敏感酶MseI对基因组DNA进行酶切，然后在酶解后的片段两端连接上连接臂，再用甲基化敏感内切酶进行消化，最终消化产物进行PCR扩增和荧光标记，最后与甲基化芯片进行杂交。杂交结果进行扫描，并对芯片图像进行分析，对芯片上的数据进行归一化处理，最后以差异倍数为1．5的标准来确定差异表达基因。结果α粒子辐射诱发永生化人支气管上皮细胞恶性转化后，有16个基因发生了甲基化的改变，其中，甲基化上调基因有9个，下调基因7个。鞘氨酸激酶SKIP，蛋白质磷酸酶PPP3CC，蛋白激酶MAP2K6，杀伤细胞免疫球蛋白受体KIR2DLl、KIR2DL4、KIR3DPI，锌指蛋白ZNF493、ZNFl00，转录因子NKX2—5、TFAP2D、DR1，钾离子通道KCNJl6，肉瘤抗原CCDCl8，以及甘油甲酸酯结合蛋白FNBPlL、同源异形蛋白IRX4、HSF蛋白片段EPB41L3、TCPl0蛋白等都发生了甲基化改变。结论证实了电离辐射能够通过改变细胞的表观遗传修饰而在肿瘤发生中发挥一定的作用。