鸡BET家族蛋白的亚细胞定位及其基因在免疫器官中的表达特征分析

为了明确鸡(Gallus gallus)溴结构域和超末端结构(bromodomain and extra terminal,BET)家族蛋白亚细胞定位及其基因在免疫器官中的表达特性,并为后续研究BET家族蛋白调控鸡相关病毒复制的作用机制提供基础,本研究将前期构建的鸡BRD2、BRD3、BRD4基因重组真核表达载体pEGFP-BRD2、pEGFP-BRD3和pEGFP-BRD4分别转染人(Homo sapiens)胚胎肾细胞(HEK-293T),利用Western blotting和荧光检测鸡BRD2、BRD3、BRD4基因的表达和蛋白的亚细胞定位情况,并利用实时定量PCR(real time quantitative PCR)技术检测1~6月龄鸡免疫器官中BRD2、BRD3和BRD4基因的表达。结果表明,鸡BET家族蛋白融合蛋白EGFP-BRD2、EGFP-BRD3和EGFP-BRD4在细胞中正确表达,且鸡BRD2、BRD3和BRD4蛋白主要定位在细胞核。实时定量PCR检测结果发现,鸡的脾脏和胸腺中BRD2基因的表达量在3月龄时最高,在法氏囊中则在4月龄时最高,表达变化均为“倒V”型;脾脏中BRD3基因的表达量在1月龄时为最高;而鸡的胸腺和法氏囊中,BRD3和BRD4基因的表达量均在6月龄时为最高,其中,BRD3基因在胸腺和法氏囊的表达变化,以及BRD4基因在法氏囊中的表达变化均为逐渐上升的“直线”型;BRD3基因在脾脏中的表达变化,以及BRD4基因在胸腺中的表达变化均为“倒N”型;脾脏中BRD4基因的表达量在3月龄时最高,其表达变化呈先上升后下降的趋势。鸡BET家族基因在不同月龄鸡的脾脏、胸腺和法氏囊中均有表达,但表达量呈现不同的变化趋势,BET家族蛋白主要定位在细胞核。