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Cloning and Sequence Analysis of Beta-actin Gene Full Length cDNA from Trachidermus fasciatus 被引量:4
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作者 薛茂云 胡承俊 +4 位作者 张营 郁建锋 卢祥云 徐建荣 顾志良 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2010年第6期121-124,共4页
[Objective] The purpose of this experiment was to reveal the sequence and characteristics of Trachidermus fasciatus beta-actin gene.[Method] Using total RNA of muscle in T.fasciatus as template,three cDNA fragments of... [Objective] The purpose of this experiment was to reveal the sequence and characteristics of Trachidermus fasciatus beta-actin gene.[Method] Using total RNA of muscle in T.fasciatus as template,three cDNA fragments of beta-actin gene in T.fasciatus were amplified by RT-PCR,5'-RACE and 3'-RACE.[Result] A full-length of 1905 bp beta-actin cDNA sequence in T.fasciatus,which includes a 1128 bp length open reading frame encoding a 375-amino acid peptide,was obtained.Sequence alignment of nucleotide and amino acid sequence revealed that T.fasciatus beta-actin shared high homology with that of Epinephelus coioides,Rachycentron canadum,Chrysophrys auratus and of relatively low homology with mammalian and bird.The phylogenetic analysis showed that T.fasciatus beta-actin had closest relationship with Epinephelus coioides.And RT-PCR analysis suggested that the beta-actin gene expressed in four tissues,i.e.,muscle,liver,intestine and brain.[Conclusion] The full length sequence of beta-actin gene with high conservation in T.fasciatus was obtained for the first time. 展开更多
关键词 Trachidermus fasciatus beta-actin Rapid amplification of cDNA end Tissue expression
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短翅豆芫菁beta-actin基因CDS区克隆与生物信息学分析
2
作者 陈强 李品明 +5 位作者 封孝兰 曾德军 罗舜 赵贵军 张承露 竭航 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期471-473,共3页
目的克隆短翅豆芫菁beta-actin基因CDS区全序列,并进行生物信息学分析。方法使用PCR克隆技术和生物信息学分析方法。结果克隆得到该基因CDS区全序列,全长1131bp(Gen Bank序列号为KU884974),包含了ATG起始密码和TAA终止密码子,共编码了37... 目的克隆短翅豆芫菁beta-actin基因CDS区全序列,并进行生物信息学分析。方法使用PCR克隆技术和生物信息学分析方法。结果克隆得到该基因CDS区全序列,全长1131bp(Gen Bank序列号为KU884974),包含了ATG起始密码和TAA终止密码子,共编码了376个氨基酸,蛋白质分子量为93.37k Da,理论等电点为5.09。该基因蛋白均位于膜外,无跨膜结构,平均疏水性(GRAVY)为0.391,该组成蛋白结构稳定。进化树分析结果表明,短翅豆芫菁与中华豆芫菁,埃及伊蚊和鼎突多刺蚁亲缘较近。结论成功克隆、分析了短翅豆芫菁beta-actin基因CDS区序列,为深入研究该基因在短翅豆芫菁体内的表达调控及短翅豆芫菁遗传与进化关系提供理论基础。 展开更多
关键词 短翅豆芫菁 beta-actin基因 克隆 生物信息学分析
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相对定量RT-PCR法中内对照基因表达水平的稳定性及其应用评价 被引量:1
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作者 梁志超 陈江华 +3 位作者 刘志安 刘敏 蒋明 赵建华 《中国实验诊断学》 北大核心 2009年第6期716-720,共5页
目的评价相对定量RT-PCR方法中不同内对照基因表达水平的稳定性及其对靶基因预后判断的影响程度。方法以36例食管癌患者为例,收集其手术前(B-1)、手术刚结束时(B0)和术后第三天(B+3)的外周血样品。利用实时定量RT-PCR技术,分别检测内对... 目的评价相对定量RT-PCR方法中不同内对照基因表达水平的稳定性及其对靶基因预后判断的影响程度。方法以36例食管癌患者为例,收集其手术前(B-1)、手术刚结束时(B0)和术后第三天(B+3)的外周血样品。利用实时定量RT-PCR技术,分别检测内对照基因Beta-actin和GAPDH在不同时间的表达水平,并以CEA mRNA作为靶基因,比较基于这两种内对照得出的靶基因相对定量结果用于患者预后判断的差异;标准化的绝对定量结果被作为"预后判断的参照标准"。结果在三个取样时间点,两种内对照基因表达水平的标准偏差依次分别为Beta-actin mR-NA:1.44,1.56和1.92;GAPDH mRNA:3.16,3.28和4.04;两者的总体变异程度分别为9.9%和17.3%。术后一年的复发结果表明,绝对定量法和基于Beta-actin mRNA的相对定量法在预后判断中能够得到一致的结果,而GAPDH mRNA的相对定量结果与复发之间未显示统计学意义的相关性(P>0.05)。结论相对定量RT-PCR法中内对照基因表达水平的变异程度低于10%时,才能保证内对照的有效性以及靶基因测定结果的可比性。基因表达研究时应对所用的内对照基因表达稳定性进行前期评估。 展开更多
关键词 食管癌 内对照基因 beta-actin MRNA GAPDH MRNA 实时定量RT-PCR
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CircACTR2调节miR-23a-3p/TBL1X轴对高糖诱导的滋养层细胞损伤的影响
4
作者 黄春艳 向汨 +1 位作者 费志医 高琴 《天津医药》 CAS 北大核心 2023年第10期1048-1054,共7页
目的探讨环状RNA肌动蛋白相关蛋白2(circACTR2)调节miR-23a-3p/转导素β1X连锁蛋白(TBL1X)轴对高糖诱导的滋养层细胞损伤的影响。方法将人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo分为NG组(5.5 mmol/L葡萄糖)、HG组(25 mmol/L葡萄糖)、si-NC组(25 m... 目的探讨环状RNA肌动蛋白相关蛋白2(circACTR2)调节miR-23a-3p/转导素β1X连锁蛋白(TBL1X)轴对高糖诱导的滋养层细胞损伤的影响。方法将人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo分为NG组(5.5 mmol/L葡萄糖)、HG组(25 mmol/L葡萄糖)、si-NC组(25 mmol/L葡萄糖+转染si-NC)、si-circACTR2组(25 mmol/L葡萄糖+转染si-circACTR2)、si-circACTR2+inhibitor-NC组(25 mmol/L葡萄糖+si-circACTR2和inhibitor-NC共转染)、sicircACTR2+miR-23a-3p inhibitor组(25 mmol/L葡萄糖+si-circACTR2和miR-23a-3p inhibitor共转染)。实时荧光定量PCR(qPCR)检测细胞中circACTR2、miR-23a-3p的表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移;酶联免疫吸附试验检测丙二醛(MDA)水平和乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western blot检测细胞中TBL1X、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、胱天蛋白酶3(caspase-3)的表达。双萤光素酶报告基因实验分别验证circACTR2、TBL1X和miR-23a-3p的靶向关系。结果与NG组相比,HG组HTR-8/Svneo细胞miR-23a-3p表达、增殖能力、划痕愈合率、PCNA、MMP-2、MMP-9表达、SOD活性降低,circACTR2、TBL1X和caxpase-3表达、MDA含量、LDH活性、凋亡率升高(P<0.05);与HG组和si-NC组相比,si-circACTR2组HTR-8/Svneo细胞中miR-23a-3p表达、增殖能力、划痕愈合率、PCNA、MMP-2、MMP-9表达、SOD活性升高,circACTR2、TBL1X和caxpase-3表达、MDA含量、LDH活性、凋亡率降低(P<0.05);在敲低circACTR2的基础上,下调miR-23a-3p可明显减弱circACTR2敲低对高糖诱导的HTR-8/Svneo细胞的增殖和迁移的促进作用,增强细胞凋亡和氧化应激能力。双萤光素酶报告基因实验结果显示,circACTR2靶向负调控miR-23a-3p表达,miR-23a-3p靶向负调控TBL1X表达。结论敲低circACTR2可调控miR-23a-3p/TBL1X轴,进而通过抑制高糖诱导的滋养层细胞损伤来发挥保护作用。 展开更多
关键词 肌动蛋白相关蛋白质2 妊娠特异性β1糖蛋白质类 滋养层 细胞凋亡 miR-23a-3p 高糖 人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo
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近江牡蛎等7种养殖鱼虾贝类参照基因β-肌动蛋白cDNA序列的克隆与比较分析 被引量:8
5
作者 林群 梁旭方 +2 位作者 王琳 李光照 胡永乐 《生态毒理学报》 CAS CSCD 2008年第3期256-261,共6页
为进一步研究水产养殖动物功能基因的表达调控,采用RT-PCR及RACE法,分离、克隆了近江牡蛎(Crassostrea ariakensis)肝脏β-肌动蛋白基因cDNA全序列.结果表明,近江牡蛎β-肌动蛋白基因cDNA全长1343bp,其中5′、3′非翻译区(UTR)分别长68b... 为进一步研究水产养殖动物功能基因的表达调控,采用RT-PCR及RACE法,分离、克隆了近江牡蛎(Crassostrea ariakensis)肝脏β-肌动蛋白基因cDNA全序列.结果表明,近江牡蛎β-肌动蛋白基因cDNA全长1343bp,其中5′、3′非翻译区(UTR)分别长68bp、144bp,开放阅读框(ORF)为1131bp,编码376个氨基酸.实验同时成功获得了中华圆田螺(Cipangopaludina cahayensis)、日本沼虾(Macrobrachium nipponensis)、斑鳢(Channa maculata)、胡子鲶(Clarias fuscus)、鳙鱼(Aristichthys nobilis)、鲮鱼(Cirrhinus molitorella)6种重要淡水养殖动物肝脏β-肌动蛋白基因cDNA的核心序列及氨基酸序列.所获基因与其它动物类群的β-肌动蛋白基因氨基酸同源性高达96%以上,表明软体类、节肢类、鱼类、两栖类、鸟类和哺乳类等不同类群动物β-肌动蛋白基因在生物进化过程中高度保守.系统发育分析显示软体类、节肢类、鱼类、两栖类、鸟类和哺乳类脊椎动物β-肌动蛋白分类与传统的分类基本一致. 展开更多
关键词 β-肌动蛋白基因 基因克隆 序列分析 近江牡蛎(Crassostrea ariakensis)
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大黄鱼β-actin抗体的制备与组织表达谱分析 被引量:5
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作者 董乐 姚丽梅 +3 位作者 戴聪杰 张乐 黄苹苹 王建颖 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期22-28,共7页
为探讨大黄鱼(Larimichthys crocea)β-actin基因(Lc Actb)作为内参基因进行相关研究的可行性,从转录和翻译水平研究其组织表达谱,作者以大黄鱼肝脏为材料,扩增Lc Actb的开放阅读框序列,并将其亚克隆至原核表达载体p ET32a(+)。酶切、... 为探讨大黄鱼(Larimichthys crocea)β-actin基因(Lc Actb)作为内参基因进行相关研究的可行性,从转录和翻译水平研究其组织表达谱,作者以大黄鱼肝脏为材料,扩增Lc Actb的开放阅读框序列,并将其亚克隆至原核表达载体p ET32a(+)。酶切、测序结果表明,p ET32a-Lc Actb构建成功。将p ET32a-Lc Actb转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行优化表达,表达蛋白经纯化后进行Western blotting验证;原核表达结果表明,IPTG可诱导一个分子量约45 ku的特异蛋白,且主要以包涵体的形式存在,优化表达条件为:28℃、0.4mmol/L IPTG、200 r/min诱导表达5 h。用表达蛋白作为抗原,免疫新西兰白兔制备抗Lc Actb的多克隆抗体;用纯化的多抗进行Western blotting的结果表明,获得了特异性的Lc Actb抗体;通过实时荧光定量RT-PCR检测大黄鱼多种组织m RNA的表达,其次,制备了多种组织匀浆蛋白,使用纯化的抗体进行Western blotting分析,结果显示,Lc Actb在大黄鱼成体各组织中转录和翻译水平的表达差异均不显著,可做为研究大黄鱼成体组织中其他基因表达和翻译水平的内参标准。 展开更多
关键词 大黄鱼β-arimichthys crocea) beta.肌动蛋白 原核表达 抗体 组织表达谱
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松江鲈β-肌动蛋白基因全长cDNA的克隆和序列分析 被引量:3
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作者 薛茂云 胡承俊 +4 位作者 张营 郁建锋 卢祥云 徐建荣 顾志良 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第32期18229-18232,共4页
[目的]获得松江鲈β-肌动蛋白基因cDNA全长序列,并检测松江鲈β-肌动蛋白在组织中的表达。[方法]以松江鲈肌肉总RNA为模板,采用RT-PCR、5′-RACE和3′-RACE的方法扩增β-肌动蛋白基因cDNA片段,用RT-PCR方法检测组织表达。[结果]获得了... [目的]获得松江鲈β-肌动蛋白基因cDNA全长序列,并检测松江鲈β-肌动蛋白在组织中的表达。[方法]以松江鲈肌肉总RNA为模板,采用RT-PCR、5′-RACE和3′-RACE的方法扩增β-肌动蛋白基因cDNA片段,用RT-PCR方法检测组织表达。[结果]获得了松江鲈β-肌动蛋白基因cDNA的3个片段,测序后拼接得到1 905 bp全长cDNA序列,其包含了1 128个核苷酸的开放性阅读框,翻译编码375个氨基酸。核苷酸和氨基酸同源性分析发现,松江鲈β-肌动蛋白基因序列与点带石斑鱼、军曹鱼、红鲷鱼等同源性相对较高,与哺乳动物和鸟类同源性相对较低;系统发育分析表明,松江鲈β-肌动蛋白与点带石斑鱼关系最近。RT-PCR分析表明,该基因在检测的肌肉、肝脏、肠和脑4种组织均有表达。[结论]首次得到了β-肌动蛋白基因cDNA全长序列,并证明了松江鲈的β-肌动蛋白基因非常保守。 展开更多
关键词 松江鲈 Β-肌动蛋白 RACE 组织表达
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兔骨组织总蛋白的提取和在免疫印迹法中的应用 被引量:5
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作者 王簕 裴国献 《生命科学研究》 CAS CSCD 2009年第2期137-141,共5页
探讨快速有效的骨组织总蛋白提取法和利用该方法进行免疫印迹研究.采用单纯研磨法、单纯锤击法和锤击研磨法分别对兔骨组织蛋白进行提取,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳对蛋白进行分离,利用免疫印迹法检测骨组织中beta-actin的表达,比较3种骨... 探讨快速有效的骨组织总蛋白提取法和利用该方法进行免疫印迹研究.采用单纯研磨法、单纯锤击法和锤击研磨法分别对兔骨组织蛋白进行提取,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳对蛋白进行分离,利用免疫印迹法检测骨组织中beta-actin的表达,比较3种骨组织蛋白提取法.发现3种蛋白提取法均可满足免疫印迹研究要求,但是锤击研磨法提取的蛋白含量比单纯锤击法高,并能更好的保留49kDa以下的蛋白,而且该操作法比传统的单纯研磨法更为方便、快捷,还能节省液氮用量.锤击研磨法可作为提取骨组织蛋白的一种理想方法. 展开更多
关键词 骨组织 蛋白提取 免疫印迹 肌动蛋白
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结缔组织生长因子在单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中的表达 被引量:10
9
作者 张海燕 李幼姬 +4 位作者 侯赛云 祝胜郎 余学清 孔耀中 叶任高 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期427-430,共4页
目的:检测大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型不同时期,肾组织中结缔组织生长因子(CTGF)、转化生长因子β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,观察比较在间质纤维化不同阶段,3者的动态变化及关系。方法:采用雄性SD大鼠36只,分为假... 目的:检测大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型不同时期,肾组织中结缔组织生长因子(CTGF)、转化生长因子β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,观察比较在间质纤维化不同阶段,3者的动态变化及关系。方法:采用雄性SD大鼠36只,分为假手术组和模型组,模型组行左侧输尿管结扎术,再分3、7、14、21和28d共6组,每组6只,于各时点处死大鼠,取肾组织,常规HE、Masson染色,按小管间质损害的特征进行半定量评分。免疫组化检测CTGF、TGF-β1和α-SMA表达。结果:随梗阻时间的延长,小管间质纤维化加重,28d间质已基本被纤维化组织所代替。随间质纤维化程度的加重,CTGF和α-SMA表达逐渐增加,两者与小管间质损害积分呈正相关,CTGF与α-SMA的表达之间也呈正相关。TGF-β1表达在7-14d达高峰后,逐渐减少,但仍高于对照组。结论:UUO致CTGF表达增加可能与TGF-β升高有关,CTGF可能通过促进间质中肌成纤维细胞的形成而参与肾间质纤维化。 展开更多
关键词 结缔组织生长因子 转化生长因子Β 平滑肌肌动蛋白
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糖尿病大鼠肾小球蛋白激酶Cα表达与肾病发病关系的研究 被引量:9
10
作者 贾忠辉 张国忠 +2 位作者 郭兵 桂华珍 万昌武 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期1238-1241,T006,共5页
目的 :观察四氧嘧啶诱发的糖尿病大鼠肾小球中蛋白激酶Cα(PKCα)、转化生长因子 - β1(TGF - β1)和α-平滑肌肌动蛋白 (α -SMA)表达的动态变化 ,探讨 3者之间相互关系以及与肾损害之间的关系。方法 :将大鼠随机分为正常对照组 (A组 ... 目的 :观察四氧嘧啶诱发的糖尿病大鼠肾小球中蛋白激酶Cα(PKCα)、转化生长因子 - β1(TGF - β1)和α-平滑肌肌动蛋白 (α -SMA)表达的动态变化 ,探讨 3者之间相互关系以及与肾损害之间的关系。方法 :将大鼠随机分为正常对照组 (A组 ) ,糖尿病 1周组 (B组 ) ,糖尿病 1月组 (C组 )和糖尿病 2月组 (D组 )。用免疫组化和Western印迹法检查PKCα ,TGF - β1和α -SMA在肾小球的表达情况。光镜观察肾组织的形态改变 ,生化法测定大鼠血糖 ,血脂 ,血尿肌酐以及尿蛋白。结果 :糖尿病各组肾小球PKCα和TGF - β1的表达多于正常组 (P <0 0 5 ) ,糖尿病各组PKCα,TGF - β1和α -SMA 3者间呈正相关 ,并且与肾脏病变程度呈正相关。结论 :糖尿病早期肾组织PKCα表达持续增加 ,可使肾小球滤过率和滤过膜通透性增加 ,参与了肾病早期蛋白尿的发生机制 ,使TGF - β1增多并诱导α-SMA的表达 ,标志着肾脏固有细胞激活及表型转变和肾脏组织学改变。 展开更多
关键词 蛋白激酶C 转化生长因子-Β 平滑肌肌动蛋白 肾小球 糖尿病 大鼠
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β-胡萝卜素对肝纤维化大鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白和转化生长因子-β_1表达的影响 被引量:7
11
作者 刘恒兴 邵锋 +1 位作者 王环震 韩金红 《新乡医学院学报》 CAS 2008年第1期5-9,共5页
目的探讨β-胡萝卜素对肝纤维化大鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法将48只大鼠随机分为对照组、肝纤维化模型组和肝纤维化β-胡萝卜素干预组,SABC法免疫组织化学染色显示α-SMA及TGF-β1... 目的探讨β-胡萝卜素对肝纤维化大鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法将48只大鼠随机分为对照组、肝纤维化模型组和肝纤维化β-胡萝卜素干预组,SABC法免疫组织化学染色显示α-SMA及TGF-β1,HE染色显示肝的显微结构,透射电镜观察肝超微结构。结果肝纤维化模型组、对照组和β-胡萝卜素干预组α-SMA和TGF-β1表达的平均灰度值比较均有显著性差异(P<0.01)。电镜结果显示,对照组肝星形细胞内充满脂滴,其周围无明显胶原纤维沉积;肝纤维化组肝星形细胞内的脂滴较对照组减少;肝纤维化β-胡萝卜素干预组肝星形细胞内脂滴的量介于对照组与肝纤维化组之间。结论β-胡萝卜素抑制α-SMA和TGF-β1的表达,能降低由CC l4诱导的大鼠肝纤维化的程度,其作用途径与抑制肝脏星形细胞中的脂滴丢失有关。 展开更多
关键词 肝纤维化 Β-胡萝卜素 Α-平滑肌肌动蛋白 转化生长因子-Β1 大鼠
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先天性肾发育不良TGF-β_1和α-SMA表达的研究 被引量:3
12
作者 周鸿敏 袁继炎 王涛 《临床小儿外科杂志》 CAS 2002年第3期178-180,196,共4页
目的检测先天性肾发育不良患肾组织转化生长因子β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达并探讨其意义。方法应用免疫组织化学方法对14例先天性发育不良肾、5例正常肾组织TGF-β1和α-SMA的表达进行检测。结果患肾TGF-β1及α-SM... 目的检测先天性肾发育不良患肾组织转化生长因子β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达并探讨其意义。方法应用免疫组织化学方法对14例先天性发育不良肾、5例正常肾组织TGF-β1和α-SMA的表达进行检测。结果患肾TGF-β1及α-SMA表达均较对照组明显增高(t值分别为6.46、8.86,P<0.01)。前者主要位于原始肾小管上皮细胞,少数位于肾小球囊上皮细胞、系膜细胞;后者除在血管组织呈强阳性外,原始小管上皮细胞、基膜,少数肾小球系膜细胞亦有中等程度表达。结论TGF-β1、α-SMA蛋白表达的异常参与先天性肾发育不良的发病机制。 展开更多
关键词 畸形 转化生长因子Β 分析 肌动蛋白类 分析
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Rg1对环孢素A慢性肾毒性大鼠肾脏肾小管上皮-间充质细胞转分化的抑制作用 被引量:10
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作者 刘其锋 郁丽霞 +2 位作者 李莎莎 顾晓霞 叶建明 《中国药物与临床》 CAS 2014年第6期736-738,共3页
目的探讨人参皂苷Rg1(G-Rg1)对环孢素A(CsA)慢性肾毒性大鼠肾脏肾小管上皮-间充质细胞转分化(EMT)的抑制作用。方法雄性SD大鼠24只,随机分为3组:正常组、模型组、G-Rg1干预组,采用低盐饮食加CsA灌胃的方法建立CsA慢性肾纤维化模型,CsA... 目的探讨人参皂苷Rg1(G-Rg1)对环孢素A(CsA)慢性肾毒性大鼠肾脏肾小管上皮-间充质细胞转分化(EMT)的抑制作用。方法雄性SD大鼠24只,随机分为3组:正常组、模型组、G-Rg1干预组,采用低盐饮食加CsA灌胃的方法建立CsA慢性肾纤维化模型,CsA剂量为25 mg·kg-1·d-1。观察G-Rg1对大鼠尿量、肾功能、肾脏病理及肾脏转化生长因子(TGF)-β1、E-钙黏素、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)表达的影响。结果 G-Rg1能抑制CsA慢性肾毒性大鼠肾脏纤维化,下调TGF-β1、α-SMA在肾组织的表达,同时上调肾组织E-钙黏素的表达。结论 G-Rg1对CsA慢性肾毒性大鼠具有保护作用,其机制可能是抑制了肾组织的EMT途径。 展开更多
关键词 人参皂甙类 环孢菌素 转化生长因子β Α平滑肌肌动蛋白 钙黏着糖蛋白类
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糖尿病心肌病心肌细胞纤维化的病理改变 被引量:12
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作者 解辉 潘晓黎 吴伟 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2008年第5期374-376,共3页
目的研究糖尿病(DM)大鼠不同病程心肌纤维化及其相关病理变化。方法选取18只DM心肌模型后大鼠随机分为DM大鼠1个月组(DM1组)、3个月组(DM3组)、6个月组(DM6组),每组6只。另选18只健康大鼠作为对照组。采用氯胺T法测定羟脯氨酸含量,为心... 目的研究糖尿病(DM)大鼠不同病程心肌纤维化及其相关病理变化。方法选取18只DM心肌模型后大鼠随机分为DM大鼠1个月组(DM1组)、3个月组(DM3组)、6个月组(DM6组),每组6只。另选18只健康大鼠作为对照组。采用氯胺T法测定羟脯氨酸含量,为心肌胶原总含量。免疫组织化学染色测定心肌胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ和心肌细胞心肌型α肌动蛋白(α-actin)及转化生长因子β1(TGF-β1)平均积分吸光度(A)。光镜和透射电镜下观察心肌病理变化。结果DM6组心肌胶原总含量明显高于DM1组和DM3组(P<0.01)。与对照组比较,DM3组心肌胶原蛋白Ⅰ表达伴随TGF-β1的表达开始明显增加(P<0.01)。心肌细胞心肌型α-actin表达较对照组明显减少(P<0.01)。各组大鼠心肌横切面可见粗大胶原纤维相互连接成网状,排列紊乱,分布不匀。α-actin表达明显减少,有糖原沉积现象。结论胶原蛋白Ⅰ呈现持续性增加是DM大鼠心肌纤维化的主要原因。TGF-β1参与了心肌纤维化发生的早期过程。糖原沉积和心肌细胞心肌型α-actin表达减少是DM心肌病的病理基础。 展开更多
关键词 糖尿病 心肌疾病 肌动蛋白类 转化生长因子Β 免疫组织化学
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NF-κB、α-SMA及TGFβ1在实验性肝损伤中的表达 被引量:5
15
作者 李亚萍 党双锁 +5 位作者 翟嵩 贾晓黎 王媛 王秀芳 王文俊 李梅 《临床肝胆病杂志》 CAS 2011年第11期1207-1210,共4页
目的探讨肝组织核转录因子-κB(NF-κB)、α-平滑肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子(TGF)β1在实验性肝损伤大鼠不同时期的免疫组化表达及其定位情况,探讨其在肝损伤过程中的变化规律及相互关系。方法采用四氯化碳(CCl4)复合因素诱发大鼠... 目的探讨肝组织核转录因子-κB(NF-κB)、α-平滑肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子(TGF)β1在实验性肝损伤大鼠不同时期的免疫组化表达及其定位情况,探讨其在肝损伤过程中的变化规律及相互关系。方法采用四氯化碳(CCl4)复合因素诱发大鼠肝纤维化模型。50只SPF级SD大鼠随机分为2组:对照组20只、造模组(CCl4诱导)30只。造模组首次皮下注射40%CCl4橄榄油溶液2 ml/kg,以后每周2次背部皮下注射40%CCl4橄榄油溶液1.5 ml/kg,30%乙醇6 ml/kg隔日灌胃并给予高脂饮食连续造模10周;对照组首次皮下注射橄榄油2 ml/kg,以后每周2次皮下注射橄榄油1.5 ml/kg,正常饮水饮食连续10周。分别于实验第2、6、10周处死大鼠,进行HE染色及VG染色病理检查,采用免疫组化、计算机图像分析等技术,动态观察NF-κB、α-SMA及TGFβ1在对照组及肝损伤造模组不同时期的表达和定位特点,各组间进行统计学分析。结果肝损伤造模组NF-κB、α-SMA及TGFβ1表达均明显高于正常对照组(P<0.01),在实验性肝损伤不同发展阶段,三种蛋白的表达逐渐增高,差异有显著性(P<0.05)。NF-κB、TGFβ1、α-SMA三者之间的表达呈高度正相关(r1=0.961,P1<0.01;r2=0.923,P2<0.01;r3=0.953,P3<0.01)。结论 NF-κB、α-SMA及TGFβ1在实验性肝损伤发展过程中,起重要促进作用,三者之间可能存在相互协同致肝纤维化作用,可以作为评价肝纤维化严重程度的重要指标之一,同时也为今后以NF-κB、α-SMA及TGFβ1为靶点的肝纤维化治疗提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 肝硬化 实验性 NF-ΚB 肌动蛋白类 转化生长因子Β1
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TGF-β、Smad信号通路蛋白及α-SMA在糖尿病肾病患者肾组织中的表达和意义 被引量:19
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作者 房勃龙 韩鸿玲 +1 位作者 张鹏 崔瑾 《天津医药》 CAS 北大核心 2013年第11期1067-1069,I0002,共4页
目的检测转化生长因子(TGF)-β、Smad信号通路蛋白和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在糖尿病肾病(DN)患者肾活检组织中的表达,探讨DN的发病机制。方法收集DN肾组织标本28例(DN组);非DM行肾切除的正常肾组织10例为对照组。应用免疫组化方法检... 目的检测转化生长因子(TGF)-β、Smad信号通路蛋白和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在糖尿病肾病(DN)患者肾活检组织中的表达,探讨DN的发病机制。方法收集DN肾组织标本28例(DN组);非DM行肾切除的正常肾组织10例为对照组。应用免疫组化方法检测TGF-β1、TGF-β受体(R)Ⅰ、TGF-βRⅡ、Smad2/3、α-SMA在肾组织中的表达。结果 (1)TGF-β1、TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、Smad2/3在DN组和对照组中均有表达,前者高于后者,DN组早期光镜下肾组织未见明显异常时即有明显的高表达,而随着疾病的进展未见表达增高的现象。肾小球、肾小管出现纤维化后并不表达上述因子。(2)对照组的α-SMA仅表达于肾血管、肾小球和肾小管,而肾间质未见α-SMA表达,而DN组α-SMA在上述组织中均有表达。结论TGF-β及Smad信号转导通路参与了DN的发病,DN可能与免疫复合物性肾小球肾炎具有相似的发病机制。 展开更多
关键词 糖尿病肾病 转化生长因子β Smad2蛋白质 Smad3蛋白质 肌动蛋白类 信号传导 活组织检查 免疫组织化学 Α-平滑肌肌动蛋白
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肝细胞生长因子在大鼠肾小管间质纤维化中的表达及意义 被引量:7
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作者 李暖 陈新德 +2 位作者 杨达胜 赵德安 毕凌云 《新乡医学院学报》 CAS 2006年第5期472-474,共3页
目的探讨肝细胞生长因子(HGF)在肾小管间质纤维化过程中的表达及意义。方法雄性3月龄SD大鼠60只,随机分为对照组和模型组各30只,以腺嘌呤灌胃法建立大鼠肾小管间质纤维化模型,对照组以等体积的2%淀粉溶液灌胃,分别于实验第7周、12周、1... 目的探讨肝细胞生长因子(HGF)在肾小管间质纤维化过程中的表达及意义。方法雄性3月龄SD大鼠60只,随机分为对照组和模型组各30只,以腺嘌呤灌胃法建立大鼠肾小管间质纤维化模型,对照组以等体积的2%淀粉溶液灌胃,分别于实验第7周、12周、17周时随机处死10只大鼠,进行血肌酐(Cr)、血尿素氮(BUN),24 h尿蛋白定量和尿NAG酶检测,光镜下观察肾组织的病理变化及免疫组织化学法检测肾脏HGF、转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(-αSMA)的表达情况。结果与对照组比较,模型组各时相点大鼠尿蛋白、尿NAG酶、血Cr及血BUN均升高(P<0.01);7周时模型组即有肾小管间质损害,随着病程进展,肾小管间质损害逐渐加重;肾脏HGF表达7周、12周时增加,17周时降低;与TGF-β1、α-SMA表达呈负相关(r=-0.999,P<0.01;r=-0.980,P<0.01)。结论肾小管间质纤维化过程中,肾脏HGF的表达早期上升是一种有益的防御反应。HGF抑制TGF-β1、α-SMA的表达,发挥其抗纤维化作用。 展开更多
关键词 肾小管间质纤维化 肝细胞生长因子 转化生长因子-Β Α-平滑肌肌动蛋白
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雌激素对宫腔粘连纤维化进程及叉头框F2表达的影响 被引量:8
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作者 陈思萍 何援利 +3 位作者 蔡慧华 刘丽敏 张冬梅 孙冬华 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期326-330,共5页
目的探讨雌激素对宫腔粘连纤维化进程及叉头框(Fox)F2表达的影响。方法采用0.2%Ⅰ型胶原酶消化-筛网过滤-差时贴壁分离法获取原代人子宫内膜基质细胞(HESCs)并进行鉴定。采用10ng/ml转化生长因子β_1(TGF-β_1)作用于HESCs 48h建立宫腔... 目的探讨雌激素对宫腔粘连纤维化进程及叉头框(Fox)F2表达的影响。方法采用0.2%Ⅰ型胶原酶消化-筛网过滤-差时贴壁分离法获取原代人子宫内膜基质细胞(HESCs)并进行鉴定。采用10ng/ml转化生长因子β_1(TGF-β_1)作用于HESCs 48h建立宫腔粘连细胞模型。以0、10–6、10–8、10–10、10–12mol/L雌二醇(E2)作用于模型组48h,采用qPCR及Western blotting检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)及FoxF2的mRNA和蛋白表达。结果免疫细胞化学法检测显示HESCs波形蛋白阳性,角蛋白18阴性。模型组α-SMA、COLⅠ、FoxF2的mRNA和蛋白表达均高于对照组(P<0.05),模型构建成功。qPCR检测结果显示,与模型组相比,10^(–6)、10^(–8)、10^(–10)mol/L E_2组α-SMA、CO LⅠ、FoxF2的mRNA表达除10^(–10)mol/L E_2组COLⅠ表达无差异外,其余各组表达均下降(P<0.05),10^(–12)mol/L E2_组α-SMA及COLⅠmRNA表达上升,但差异无统计学意义(P>0.05),FoxF2 mRNA表达下降(P<0.05)。Western blotting检测结果显示,与模型组相比,10^(–6)、10^(–8)、10^(–10)mol/L E_2组α-SMA、COLⅠ及FoxF2蛋白表达下降(P<0.05),10^(–12)mol/L E_2组α-SMA蛋白表达上升,但差异无统计学意义(P>0.05),COLⅠ及FoxF2蛋白表达下降(P<0.05)。结论 FoxF2在宫腔粘连中的表达增加。雌激素可在一定范围内逆转宫腔粘连的纤维化进程,并抑制FoxF2的表达。 展开更多
关键词 宫腔粘连 纤维化 雌激素 转化生长因子β1 Α-平滑肌肌动蛋白 Ⅰ型胶原 叉头框F2
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实时荧光定量分析SK-N-SH细胞中β-actin mRNA的半衰期 被引量:1
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作者 胡昕 吕建新 《温州医学院学报》 CAS 2006年第4期313-316,共4页
目的:探讨和分析SK-N-SH细胞中β-actinmRNA的半衰期。方法:建立包含β-actin基因片断的pMD-T载体的梯度稀释曲线,应用VIC标记的Taqman-MGB探针进行检测,用Opticon2.02软件分析结果。以不同浓度和不同时间的放线菌素D阻断SK-N-SH细胞转... 目的:探讨和分析SK-N-SH细胞中β-actinmRNA的半衰期。方法:建立包含β-actin基因片断的pMD-T载体的梯度稀释曲线,应用VIC标记的Taqman-MGB探针进行检测,用Opticon2.02软件分析结果。以不同浓度和不同时间的放线菌素D阻断SK-N-SH细胞转录,提取总RNA并予荧光定量RT-PCR检测β-actinmRNA。结果:SK-N-SH细胞中β-actinmRNA的半衰期为4h。与未处理组相比,4h组β-actin的拷贝数差异有显著性(P<0.05),12h和24h组β-actin拷贝数差异有极显著性(P<0.01)。不同浓度之间放线菌素D对β-actin拷贝数的影响差异不大(P>0.05)。结论:应用实时荧光定量RT-PCR,通过比较mRNA与总RNA的拷贝数,建立了一种准确方便地检测mRNA衰减的方法。同时β-actin不适合做放线菌素D处理实验中的内参照。 展开更多
关键词 实时荧光定量 SK-N-SH Β-ACTIN MRNA 半表期 放线菌素D
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软肝化坚颗粒对肝纤维化模型C57小鼠肝组织α-SMA、TGFβ1表达和I型胶原水平的影响 被引量:11
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作者 叶立红 王翀奎 +4 位作者 杨莉 高会霞 赵召霞 侯军良 戴二黑 《临床肝胆病杂志》 CAS 2012年第9期685-688,共4页
目的观察软肝化坚颗粒对肝纤维化模型C57小鼠肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子(TGF)β1表达和I型胶原水平的影响。方法 40只C57小鼠随机分为4组,分别为正常对照组、模型对照组、软肝化坚颗粒低剂量组及高剂量组,每组10... 目的观察软肝化坚颗粒对肝纤维化模型C57小鼠肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子(TGF)β1表达和I型胶原水平的影响。方法 40只C57小鼠随机分为4组,分别为正常对照组、模型对照组、软肝化坚颗粒低剂量组及高剂量组,每组10只。采用四氯化碳(CCl4)腹腔注射制造小鼠肝纤维化模型,通过免疫组织化学染色方法检测肝组织中α-SMA、TGFβ1和I型胶原的表达,同时进行肝组织纤维化评分(S)。结果各模型组肝组织α-SMA、TGFβ1及Ⅰ型胶原表达和纤维化评分与正常对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);软肝化坚颗粒低剂量组、高剂量组肝组织α-SMA和TGFβ1及Ⅰ型胶原评分和纤维化评分较模型对照组均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);软肝化坚颗粒低剂量组和高剂量组α-SMA、TGFβ1及Ⅰ型胶原评分及肝纤维化评分之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论软肝化坚颗粒可能通过抑制C57小鼠肝组织TGFβ1的产生,进而抑制肝星状细胞(HSC)的活化,减少细胞外基质(ECM)的合成,从而降低I型胶原增生,达到预防和治疗肝纤维化的作用。 展开更多
关键词 软肝化坚颗粒 肝硬化 α-平滑肌肌动蛋白 转化生长因子β Ⅰ型胶原
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