EB病毒VCA基因片段在毕赤酵母中的表达及临床应用

目的探讨EB病毒（Epstein—Barrvirus，EBV）壳抗原VCA-BALF4（S）和VCA—BFRF3重组蛋白在鼻咽癌血清学诊断中的应用。方法以EBVDNA为模板，采用PCR法扩增目的基因片段BALF4（S）和BFRF3，与毕赤酵母表达载体pPICZaA连接，转化酵母菌GS115，甲醇诱导重组蛋白表达。表达产物经SDS—PAGE、免疫印迹法鉴定后，纯化目的蛋白作为包被抗原，制备ELISA试剂检测鼻咽癌患者和正常人群EBV—IgA抗体。结果在毕赤酵母菌中成功高效地表达了分泌型的VCA-BALF4（S）和VCA—BFRF3重组蛋白，相对分子质量分别为37×10^3和18×10^3，免疫印迹证实目的带均有免疫原性，目的蛋白经纯化后作为包被抗原检测鼻咽癌患者和健康对照的敏感度和特异度分别为71．0％和91．8％（VCA-BFRF3）、88．7％和96．4％[VCA—BALF4（S）]。结论毕赤酵母系统高效分泌表达了VCA—BALF4（S）和VCA—BFRF3重组蛋白，对两种重组抗原在鼻咽癌血清筛选中的诊断价值进行了初步评估，获得了在鼻咽癌筛选中有一定应用价值的pPICZa—BALF4（S）生产酵母工程菌株。

EB病毒壳抗原、核心抗原重组蛋白的制备及在鼻咽癌血清学诊断中的应用

目的探讨EB病毒（EBV）壳抗原（VCA）-BFRF3和核心抗原（NA）1—BKRF1重组蛋白在鼻咽癌（NPC）血清学诊断中的应用。方法以EBVDNA为模版，用PCR扩增目的基因BFRF3和BKRF1，插入大肠杆菌表达载体pET．51b后转染大肠杆菌JM109，诱导重组蛋白表达。表达产物经SDS—PAGE、免疫印迹分析鉴定，金属螯合亲和层析纯化后，分别制备用BFRF3、BKRF1及BFRF3／BKRF1作为包被抗原的ELISA试剂，检测NPC患者和正常人群EBV—I外抗体。结果大肠杆菌高效表达BFRF3和BKRF1重组蛋白，表达产物相对分子质量分别为20000和29000，均有良好免疫反应性；BKRF1的NPC诊断灵敏度（71．20％，178，250）明显高于BFRF3（64．80％，162／250）（P〈0．01），但两者NPC诊断特异性差异无统计学意义（P〉0．05）。相对于单独应用1种抗原，联合2种重组抗原的方法诊断NPC具有高灵敏度（84．80％，212／250）和相对低的特异性（82．00％，328／400）俨〈0．01）。结论NA1-BKRFI诊断NPC的灵敏度高于VCA—BFRF3，两种抗原联合使用，可提高诊断灵敏度，但特异性明显降低。