欧美杨107杨β-1,3-葡聚糖酶(BG2)基因遗传转化及对溃疡病的抗性分析

以欧美杨107杨为受体材料,利用根癌农杆菌介导法转化β-1,3-葡聚糖酶基因(BG2),经卡那霉素筛选,PCR和Southern检测显示有4个转基因阳性株系,初步证明外源目的基因已整合到107杨基因组中。离体抑菌试验表明转基因107杨(T-107杨)细胞粗提液的抑菌能力明显强于未转基因对照107杨(C-107杨)。在接种杨树溃疡病菌的培养基上培养,T-107杨长势明显强于C-107杨;T-107杨可明显抑制丙二醛(MDA)在植物体内的快速积累,其苯丙氨酸解氨酶(PAL)含量也明显高于C-107杨,PAL含量T-107杨和C-107杨都有先升后降的趋势;15天后C-107杨完全死亡,T-107杨仍能生存。试验结果表明BG2基因的表达提高了107杨对杨树溃疡病的抗性。

β-1,3-葡聚糖酶基因高效表达载体的构建及对小麦的转化

利用PCR方法设计引物 ,进行特异扩增 ,在得到的BG2基因片段的两端引入可以与表达载体多克隆位点相匹配的酶切位点 ,将该基因插入高效表达载体质粒pATC94 0中 ,获得表达质粒pATCBG2。通过基因枪转化法 ,将pATCBG2转化优质小麦品种龙辐麦 10、龙辐麦 3号 ,获得抗卡那霉素 (Kanamycin)的再生植株 ,经PCR ,PCR Southern和Dot blotting检测 ,结果表明 ,有 5个转基因植株在以上各项检测中全为阳性 ,证明目的基因已整合入这些转基因小麦基因组中。田间接菌发病检测结果表明 ,转基因植株比对照的抗病性提高 1～ 2级。

农杆菌介导的β-1,3-葡聚糖酶基因转化花生的研究

以花育22号成熟胚萌发5-7 d的幼叶为外植体,以农杆菌为介导将含有β-1,3-葡聚糖酶基因的表达载体pATC940转入花生,获得转基因植株。结果表明,外植体经预培养1-2 d,于OD600为0.5-1.0之间的农杆菌菌液中浸泡10-15 min,再共培养3 d,有利于提高转化率。并对再生的抗性植株进行了PCR检测。