大蒜素对胃癌BGC823细胞株PPARγ基因的影响

目的观察大蒜素对胃癌BGC823细胞生长以及对PPARγmRNA表达的影响,探讨大蒜素抑制BGC823细胞增殖的可能作用机制。方法不同浓度的大蒜素处理胃癌BGC823细胞,MTT法观察细胞增殖抑制作用;RT-PCR法检测胃癌BGC823细胞中PPARγmRNA表达的变化。结果大蒜素抑制BGC823细胞增殖,呈浓度和时间依赖性;大蒜素作用72h后明显抑制胃癌BGC823细胞PPARγmRNA表达,呈浓度依赖性。结论大蒜素可能通过下调PPARγmRNA表达抑制胃癌BGC823细胞增殖,发挥抗肿瘤作用。

姜黄素联合奥沙利铂对人胃癌BGC-823细胞的作用

目的观察姜黄素联合奥沙利铂增强对人胃癌BGC823细胞生长抑制及杀伤作用,并探讨其与Fas蛋白的关系。方法采用不同浓度姜黄素和奥沙利铂单独或联合作用于BGC-823胃癌细胞,分别应用CCK-8法检测细胞生长抑制率,Annexin V-FITC/PI双染色检测BGC-823细胞凋亡率,流式细胞术检测Fas蛋白表达及采用分光光度法检测Caspase-3酶活性变化。结果姜黄素和奥沙利铂明显抑制细胞的增殖,呈剂量依赖性,联合作用组显著高于单独用药组;两药均可增强胃癌BGC-823细胞凋亡率,联合作用组显著高于单独用药组;两药均可增强Fas蛋白表达。联合作用组显著高于单独用药组;两药均可增强Caspase-3酶活性,联合作用组显著高于单独用药组。结论姜黄素联合奥沙利铂可显著增强对BGC823胃癌细胞的增殖抑制作用,并可增强诱导细胞凋亡作用,其机制可能与上调Fas蛋白的表达、增强Caspase-3活性有关。

白头翁诱导胃癌细胞凋亡的研究

目的研究中药白头翁对诱导胃癌BGC823细胞株凋亡过程的影响作用,探讨白头翁抗肿瘤的可能机制。方法以体外培养的胃癌BGC823细胞株为研究对象,MTT法检测不同浓度白头翁对BGC823细胞活性的影响,采用流式细胞术检测不同浓度白头翁作用胃癌BGC823细胞24h后细胞凋亡率。结果 白头翁对BGC823细胞活性的抑制呈浓度依赖性,白头翁抑制BGC823细胞增殖可能由于其诱导胃癌细胞凋亡所致。结论白头翁能诱导胃癌BGC823细胞株发生细胞凋亡,有望成为胃癌的辅助治疗药物。

去甲基化作用对胃癌细胞生物学行为及xaf1基因表达的影响

目的:探讨去甲基化药物5脱-氧杂氮胞苷(5-Aza-CdR)对体外培养的胃癌BGC823细胞增殖活性、细胞周期和凋亡以及对此细胞株xaf1基因表达的影响.方法:用MTT法检测不同浓度5-Aza-CdR对细胞增殖活性的影响;PI染色和流式细胞仪检测不同浓度5-Aza-CdR处理72 h后细胞周期分布和细胞凋亡率;RT-PCR法检测用药前后xaf1基因表达的变化.结果:用1×103,5×103,10×103nmol/L的5-Aza-CdR处理BGC823细胞6 d后,试验组细胞增殖抑制率较对照组明显升高(P<0.05),并呈剂量依赖关系;流式细胞仪分析表明,各药物浓度处理72 h后凋亡率明显增加:试验组凋亡率分别为(4.53±0.21)%,(8.11±1.01)%和(11.56±0.86)%,与对照组(0.51±0.01)%相比较差异显著(P<0.05).在5-Aza-CdR处理前,未检测到BGC823细胞株xaf1基因mRNA表达,经过5-Aza-CdR处理后,xaf1mRNA重新表达.结论:5-Aza-CdR可抑制BGC823细胞增殖;促进细胞凋亡;使xaf1基因甲基化状态得到逆转,而重新表达.

调控胃癌BGC823细胞PTEN和Livin基因表达的生物学效应

目的 观察在体外培养胃癌BGC823细胞中增加FTEN基因表达,同时沉默Livin基因表达,对胃癌细胞增殖、细胞凋亡以及侵袭转移能力的影响.方法 将已构建的表达FTEN基因的真核表达载体pCL-neo-PTEN、沉默Livin基因的siRNA载体pRNAT-U6.1-Livin、既表达PTEN又沉默Livin重组载体pCL-neo-PTEN-siLivin脂质体包裹后分别转染入胃癌BGC823细胞.逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot检测PTEN和Livin mRNA和蛋白表达;测定细胞生长曲线和Caspase-3、9活性;检测细胞凋亡和体外侵袭能力.结果 转染pCL-neo-PTEN-siLivin的胃癌BGC823细胞PTENmRNA（0.897±0.112）和蛋白都呈高表达,Livin mRNA（0. 071±0.009）和蛋白都呈表达沉默.调控组细胞增殖速度减缓、穿透Matrigel的细胞数下降（23.1±3.5）;凋亡率（16.72±1.84）、Caspase-3、9活性增加（1.88±0.21、1.07±0.18）,与对照组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）;对BGC823细胞增殖和转移的抑制效果均优于单独增加PTEN基因表达和单独沉默Livin基因表达的效果.结论 同时增加PTEN基因表达和沉默Livin基因表达可有效抑制胃癌BGC823细胞的生长和转移.

RNA干扰Chk1/2调控二烯丙基二硫诱导的G2/M期阻滞作用及相关周期蛋白表达

在细胞周期检测点信号传导通路中,Chkl和Chk2起着重要作用,主要参与G2/M期细胞周期检测点信号传导.首先采用RNAi技术在BGC823细胞中将Chk1、Chk2基因沉默,Chk1、Chk2 siRNA转染BGC823细胞后24h加入15mg/L二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS),接着通过Real-timePCR、Western blot分析Chk1、Chk2基因在转染前后的表达差异,然后运用流式细胞术和Western blot分析Chk1、Chk2基因沉默后对DADS诱导的细胞周期G2/M期阻滞作用及相关周期蛋白CDC25C和cyclinB1表达的影响.实验结果表明,与未转染对照组相比,转染Chk1、Chk2siRNA后BGC823细胞中Chk1、Chk2表达明显被抑制,二者的mRNA表达分别下降84.7%和69.0%,蛋白质水平分别下降73.4%和78.5%.流式细胞术分析结果发现,ChklsiRNA转染的BGC823细胞在15mg/LDADS处理24h后,G2/M期比例由单纯DADS处理组的58.1%降至10.4%(P<0.05).但Chk2 siRNA转染后加入15mg/LDADS,与单独15mg/LDADS作用相比,细胞周期G2/M期比例差异不明显(P>0.05).Chk1和Chk2下游分子的改变显示,DADS可抑制BGC823细胞中CDC25C和cyclinB1表达(P<0.05),但Chk1基因沉默后加入DADS,CDC25C和cyclinB1表达却不被抑制(P>0.05),Chk2基因沉默后对DADS抑制CDC25C和cyclinB1表达的作用无影响.由此得出结论,Chkl基因沉默可消除DADS诱导BGC823细胞G2/M期阻滞作用,DADS阻滞G2/M期可能是通过Chk1/CDC25C/cyclinB1信号通路起作用.

白头翁皂苷体外抗肿瘤试验研究

为研究白头翁皂苷体外抗肿瘤活性,从白头翁中提取有效成分皂苷,对大肠癌HT29细胞和人胃癌细胞株BGC823进行体外培养,用MTT法测定白头翁皂苷对2种肿瘤细胞增殖反应的影响。结果表明:白头翁皂苷对两种肿瘤细胞增殖有较强的抑制作用,并表现一定的剂量关系,白头翁皂苷浓度为6μg.mL-1时,对人胃癌细胞株BGC823细胞生长的抑制率达到了80.71%,效果较好。因此,白头翁皂苷作为抗肿瘤药物有效成分的开发和利用有待于进一步深入研究。