BGJ398对猪孤雌胚胎早期发育的影响

为了研究FGF信号通路对猪胚胎早期胚层分化的影响,试验采用QRT-PCR方法检测FGF信号通路抑制剂BGJ398处理后猪孤雌囊胚多能性及胚层标志基因SOX2、OCT4、KLF4、CDX2、NANOG和GATA4的表达变化。结果表明:BGJ398促进了多能性和滋养层标志基因的表达,SOX2、OCT4、KLF4和CDX2的相对表达量分别是对照组的4.13,3.25,33.06,2.59倍,但未显著影响原始外胚层标志基因NANOG和内胚层标志基因GATA4的表达。说明BGJ398并未显著影响内外胚层的分化,因此推断FGF信号通路对于猪胚胎早期胚层分化可能并不是必需的。

BGJ398与顺铂单独或联合作用对宫颈癌He La细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及其机制研究

目的探讨成纤维细胞生长因子受体抑制剂BGJ398与顺铂单独或联合作用对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及可能的作用机制。方法培养宫颈癌HeLa细胞,分别用不同浓度的BGJ398(0、10、20、30、40μmol/L)和顺铂(0、10、20、30、40、50μmol/L)处理24、48、72h。采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖抑制率,根据结果选择12.5μmol/L作为实验药物浓度,将宫颈癌HeLa细胞分为对照组(无BGJ398和顺铂的培养基)、BGJ398组(含有12.5μmol/L BGJ398的培养基)、顺铂组(含有12.5μmol/L顺铂的培养基)、联合组(同时含有12.5μmol/L BGJ398和12.5μmol/L顺铂的培养基),进行后续实验,再次用CCK-8试剂盒检测各组细胞的增殖抑制率,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Transwell小室检测细胞侵袭能力,采用Westernblotting法检测细胞增殖、凋亡、侵袭相关蛋白的表达以及PI3K/AKT和MEK/ERK信号通路蛋白的表达。结果 BGJ398组、顺铂组、联合组的细胞增殖抑制率高于对照组,联合组的细胞增殖抑制率高于BGJ398组、顺铂组,差异均有显著性(P<0.05)。BGJ398组、顺铂组、联合组的细胞凋亡率高于对照组,联合组的细胞凋亡率高于BGJ398组、顺铂组,差异均有显著性(P<0.01)。BGJ398组、顺铂组、联合组穿膜细胞个数低于对照组,联合组的穿膜细胞数低于BGJ398组、顺铂组,差异均有显著性(P<0.01)。BGJ398组、顺铂组、联合组细胞的PCNA、MMP-2表达量低于对照组,Bax、E-cadeherin表达量高于对照组,差异均有显著性(P<0.01)。联合组PCNA、MMP-2表达量低于BGJ398组、顺铂组,Bax、E-cadeherin表达量高于BGJ398组、顺铂组,差异均有显著性(P<0.01)。BGJ398组p-ERK1/2、p-AKT表达量低于对照组(P<0.01),ERK1/2、AKT表达量与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。结论 BGJ398与顺铂单独或联合作用均能抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖和侵袭能力,促进细胞凋亡,其机制可能与抑制p-AKT、p-ERK1/2、PCNA、MMP-2蛋白表达及促进Bax、E-cadeherin蛋白表达有关。

BGJ398治疗FGFR改变晚期胆管癌

对于一线吉西他滨治疗失败的胆管癌患者尚无标准治疗方法。FGFR融合/易位约在13%~17%肝内胆管癌中出现。BGJ398是一种口服的选择性pan-FGFR酶抑制剂,在临床前实验中对FGFR改变肿瘤具有治疗效果。JCO近期发表了一篇文章,研究BGJ398治疗FGFR改变胆管癌患者的临床疗效。研究纳入的患者为接受过治疗且疾病出现进展的晚期或转移性含有FGFR2融合或其他FGFR改变的晚期或转移性胆管癌患者,评估BGJ398在这些患者中的抗肿瘤活性。

酪氨酸激酶抑制剂BGJ398对人肝癌Huh-7细胞增殖、凋亡及迁移的影响及其作用机制

目的 评价酪氨酸激酶抑制剂BGJ398对人肝癌Huh-7细胞增殖、凋亡和迁移的影响,并探讨其作用机制。方法 MTT法检测10种酪氨酸激酶抑制剂对Huh-7细胞存活的影响,并分别采用单靶点动力学公式和双相动力学公式分析Huh-7细胞对BGJ398的敏感性。将10、30和90 nmol/L BGJ398分别加入Huh-7细胞,同时设对照组(不加药物),37℃培养24 h,流式细胞术检测BGJ398对Huh-7细胞凋亡和周期的影响;划痕试验检测BGJ398对Huh-7细胞迁移能力的影响;Western blot法检测BGJ398对Huh-7细胞多条通路相关蛋白表达水平的影响。结果 10种酪氨酸激酶抑制剂均可抑制Huh-7细胞增殖,其中Huh-7细胞对BGJ398最敏感,IC50为(0.020±0.013)μmol/L;Huh-7细胞对BGJ398的反应由两相组成,其中F1相占92.8%(Kd1为36 nmol/L),F2相占7.2%(Kd2>1 000μmol/L)。与对照组比较,30和90 nmol/L BGJ398组Huh-7细胞凋亡率及处于G1期的细胞百分比均显著上升(t=-6.407~-4.459,P均<0.05),10、30和90 nmol/L BGJ398组处于S期的细胞百分比明显减少(t分别为2.982、7.859和12.425,P均<0.05);划痕24及48 h后,30、90 nmol/L BGJ398组划痕面积均明显减小(t=5.376~18.197,P均<0.05);30、90 nmol/L BGJ398组磷酸化成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factor receptor,FGFR)及磷酸化胞外信号调节激酶1/2(Erk1/2)蛋白的表达水平均明显下降(t=4.015~6.729,P均<0.01)。结论 BGJ398能够抑制人肝癌Huh-7细胞增殖和迁移,诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞,可能是通过抑制FGFR磷酸化及MAPK信号通路实现的,BGJ398有望成为治疗肝癌的潜在药物。

新酪氨酸激酶抑制剂BGJ398对白血病细胞株KG-1细胞的抑制效应研究

【摘要】目的探讨针对FGFRl的酪氨酸激酶抑制剂BGJ398对人急性髓系白血病细胞株KG-1细胞的影响及可能的作用机制。方法CCK-8法检测BGJ398对KG-1细胞增殖的影响；流式细胞术AnnexinV／PI双重染色法检测BGJ398对细胞凋亡的影响；RQ．PCR检测细胞凋亡相关基因的表达；Westernblot法检测凋亡相关蛋白、FGFRlOP2-FGFRl融合蛋白及信号通路分子磷酸化水平的表达变化。结果BGJ398能有效抑制KG-1细胞增殖，抑制率呈剂量依赖性升高，并能诱导细胞凋亡。BGJ398作用KG．1细胞48h后，与对照组比较凋亡相关基因Bcl。2表达下降（0．342±0．054对1．026±0．165，t=3．94，P=0．017），caspase．3表达上调（0．456±0．189对1．008±0．091，t=16．44，P〈0．001），差异均有统计学意义。与对照组相比，BGJ398作用组caspase-3活化蛋白表达增加，同时Bcl-2蛋白表达下凋；FGFRlOP2-FGFRl融合蛋白水平及AKT、S6K1磷酸化水平下捌，差异均有统计学意义∽值均〈0．01），但ERK磷酸化表达水平无明显改变。结论BGJ398能有效抑制KG-1细胞增殖并诱导细胞凋亡，其机制可能与抑制FGFR1表达、下调Bcl-2水平、促进Caspase-3活化及抑制AKT和S6K磷酸化有关。

成纤维细胞生长因子受体抑制剂BGJ398对胶质瘤生物学特性的影响

目的探究成纤维细胞生长因子受体（FGVR）抑制剂BGJ398对胶质瘤细胞生长、迁移和侵袭的抑制作用。方法（1）将体外常规培养的U87和U251细胞分为BGJ398组和对照组．分别加入含10μmol／LBGJ398的完全培养基和单纯的完全培养基处理，用CCK-8和克隆形成实验检测2组细胞的增殖能力；处理2d后用划痕实验、Transwell迁移实验分别检测2组13251细胞、U87细胞的迁移能力；Transwell侵袭实验检测2组细胞的侵袭能力，Westernblotting检测2组细胞磷酸化（p）FGFR和Vimentin蛋白的表达；（2）将200μLU87细胞（1×10^7个）注入8只BALB／c裸鼠腹部两侧皮下并将裸鼠按随机数字表法分为BGJ398组（n=4）和对照组（n=4）。BGJ398组裸鼠每天口服BGJ398生理盐水溶液（20mg／kg），对照组裸鼠口服等量生理盐水。连续服用15d后比较2组小鼠移植瘤的质量；免疫组化染色检测移植瘤组织Vimentin的表达。结果（1）培养3、4、5d时BGJ398组U87细胞的吸光度值低于对照组：培养2、3、4、5d时BGJ398组U251细胞的吸光度值低于对照组；培养10d后BGJ398组U87细胞和U251细胞形成克隆的数量明显少于对照组；划痕后48hBGJ398组U251细胞的迁移距离比对照组明显减少；培养24h后BGJ398组迁移的U87细胞数较对照组明显减少；培养48h后BGJ398组穿过孔膜的U87细胞和U251细胞较对照组明显减少：BGJ398组U87细胞和U251细胞中pFGFR和Vimentin蛋白的含量明显少于对照组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。（2）BGJ398组裸鼠皮下肿瘤的质量[（0，186±0．064）鲥较对照组[（0．450±0．106）g]明显减轻；BGJ398组裸鼠皮下移植瘤Vimentin的表达（2．503±0．359）较对照组（4．125±1．155）明显下降，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论体内外实验均证实BGJ398可以抑制胶质瘤细胞的生长、迁移和侵袭，提示FGFR是治疗胶质瘤的有效靶点之一。

靶向成纤维细胞生长因子受体抑制胶质瘤中血管生成拟态的生成

目的:探索成纤维细胞生长因子受体(FGFR)抑制剂BGJ398对胶质瘤细胞形成血管生成拟态(VM)的影响。方法:运用Western blot检测BGJ398处理后人胶质瘤细胞株U87MG和U251MG中磷酸化成纤维细胞生长因子受体(p FGFR)的数量,以及基质金属蛋白酶2和14(MMP2和MMP14)的表达量;在体外应用小管形成实验观察U87MG细胞形成小管的能力;用CD34/PAS免疫组化双染法计数皮下胶质瘤模型中VM的数量;用免疫组织化学染色检测皮下移植瘤中MMP2和MMP14的表达量。结果:Western blot显示BGJ398实验组中p FGFR的数量较对照组显著减少,差异有统计学意义(P<0.05);Western blot与免疫组化染色结果显示实验组MMP2和MMP14的表达明显下调;小管形成实验中实验组中胶质瘤细胞小管周长和交点数较对照组明显减少;皮下瘤模型中实验组中VM的数量(13.85±3.96)较对照组(26.40±5.06)明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:体内外实验证实BGJ398通过抑制FGFR的激活可以抑制胶质瘤细胞形成VM,提示FGFR信号通路具有调节VM形成的作用。