反向挤压对Mg-1Bi-0.5Gd合金耐蚀性的影响

镁合金因其密度低、比强度高等优点,在航空航天、汽车工业和电子产品中得到广泛应用。然而,镁合金的耐蚀性能较差,限制了其应用。为改善镁合金的耐蚀性,本文采用Bi和Gd元素进行合金化处理,并通过反向挤压工艺制备了Mg-1Bi-0.5Gd(0.94%Bi,0.53%Gd,质量分数)合金。通过XRD、OM、SEM、析氢实验和电化学测试,研究了挤压前后Mg-1Bi-0.5Gd合金的微观组织和腐蚀行为的变化。结果表明,与均匀态合金相比,挤压态Mg-1Bi-0.5Gd合金表现出更高的腐蚀电位和更低的腐蚀电流密度,显示出更优异的耐蚀性。这是由于挤压工艺细化了合金的晶粒组织,显著提升了耐蚀性能。

富血小板血浆联合膝痹1号方治疗寒湿痹阻型膝骨关节炎临床研究

目的 观察富血小板血浆(PRP)联合膝痹1号方治疗寒湿痹阻型膝骨关节炎的临床疗效。方法 将90例寒湿痹阻型膝骨关节炎患者随机分为A、B、C组,A组予以PRP关节腔内注射联合膝痹1号方治疗,B组单纯PRP关节腔注射治疗,C组膝痹1号方治疗。于治疗前及治疗1、3、6个月比较3组膝关节疼痛视觉模拟量表(VAS)评分、西安大略和麦克马斯特大学(WOMAC)骨关节炎指数量表评分、Lysholm量表评分、临床疗效。结果 治疗后,三组VAS评分比较,差异有统计学意义(P<0.05);与治疗前比较,三组VAS评分均降低(P<0.05);治疗3、6个月,A组VAS评分均低于B组(P<0.05);治疗6个月,A组VAS评分低于C组(P<0.05)。治疗后,三组WOMAC评分比较,差异有统计学意义(P<0.05);治疗1、3、6个月,A、C组WOMAC评分均低于治疗前(P<0.05),B组治疗6个月WOMAC评分低于治疗前(P<0.05);与B组比较,治疗后3、6个月,A组WOMAC评分均低于B组(P<0.05);与C组比较,治疗3、6个月,A组WOMAC评分均低于同期C组(P<0.05)。治疗后,三组Lysholm评分比较,差异有统计学意义(P<0.05);治疗3、6个月,三组Lysholm评分均高于治疗前(P<0.05);与B组比较,治疗3、6个月,A组Lysholm评分均高于同期B组(P<0.05);与C组比较,治疗3、6个月,A组Lysholm评分均明显高于同期C组(P<0.05)。A组治疗后临床总有效率86.67%,B组总有效率76.67%,C组总有效率73.33%,三组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 采用PRP关节腔注射联合膝痹1号方与单纯PRP关节腔注射、膝痹1号方治疗寒湿痹阻型膝骨关节炎,均能缓解膝关节疼痛和促进膝关节功能恢复,但联合治疗的疗效优于单一治疗。

bi-1短发夹状RNA重组真核表达质粒对鼻咽癌和卵巢癌细胞增殖的影响

目的以真核表达质粒pmU6为基础,针对bi-1基因构建在细胞内表达短发夹状RNA(shR-NA)的质粒载体,并观察它们对CNE-2Z、CNE-1、HO8910PM、HO8910细胞株生长增殖的影响。方法人工合成bi-1寡核苷酸链,退火、定向克隆入pmU6载体中产生重组质粒,将重组质粒转染到细胞中,MTT比色法观察转染试剂及质粒载体对细胞生长增殖的影响。结果与未处理组相比,bi-1shR-NA对CNE-2Z、CNE-1、HO8910PM细胞株的生长增殖有明显的抑制作用,而对HO8910细胞株的生长增殖无明显抑制作用。结论重组质粒能在细胞内表达shRNA,产生RNA干扰(RNA interference,RNAi)效应并特异性抑制靶细胞的生长增殖,为质粒介导的RNAi技术应用于鼻咽癌和卵巢癌的基因治疗提供一定的理论依据。

慢病毒表达系统介导的RNAi技术靶向沉默Bi-1基因对鼻咽癌细胞生物学特性的影响

目的探讨Bi-1基因的生物学功能及其与鼻咽癌发生与发展的相关性。方法首先构建以Bi-1为靶基因的RNA干扰(RNAi)质粒载体,采用慢病毒表达系统将其导入细胞,利用RNAi技术在细胞内诱导特异序列的基因沉默以观察对鼻咽癌细胞生长增殖的影响。结果靶向Bi-1沉默的慢病毒感染鼻咽癌细胞后能有效抑制细胞的生长增殖并诱导其凋亡,在荧光显微镜下可见经靶向Bi-1沉默的慢病毒处理后的鼻咽癌细胞呈现出细胞皱缩、核固缩、核断裂等典型的凋亡细胞形态,而且DNA凝胶电泳图谱呈现"梯状"现象;此外,Bi-1基因的沉默可有效地抑制裸鼠鼻咽癌移植瘤的生长。结论靶向沉默鼻咽癌细胞中的Bi-1表达,可抑制细胞生长增殖,并诱导细胞发生凋亡。

乳腺癌中BI-1基因与ER PR表达的关系及意义

目的:探讨乳腺癌BI-1基因与雌孕激素受体表达的关系及意义。方法:采用免疫组化S-P法检测48例乳腺癌及配对正常组织中BI-1的表达,并分析与ER、PR受体的关系。结果:乳腺癌及配对正常组织中BI-1表达阳性率分别为77.08%、18.75%,两组间相比有显著性差异(P<0.05)。ER阴性组BI-1表达阳性率高于ER阳性组,阳性率分别为94.74%和65.52%差异有显著性(P<0.05);PR阳性和阴性组之间的表达差异无显著性(P>0.05);淋巴结转移组BI-1表达率高于未转移组(P<0.05)。结论:BI-1与ER的联合检测是判断乳腺癌患者预后的重要指标。

靶向Bi-1基因的重组慢病毒载体构建及其在NIH3T3细胞中的表达

目的慢病毒载体技术已被广泛应用于基因功能分析、信号转导通路和基因治疗的研究。文中应用慢病毒系统构建凋亡抑制基因Bi-1的慢病毒表达载体并检测其在NIH3T3细胞中的表达,为后续的以Bi-1基因为靶点的肿瘤基因治疗研究奠定基础。方法根据慢病毒表达载体酶切位点的特征序列设计PCR扩增引物并扩增人Bi-1 cDNA,并采用DNA重组技术定向克隆至pLCMV-IG质粒中,构建重组慢病毒载体质粒pLCMV-IG-Bi-1,经PCR、双酶切和测序鉴定后,包装慢病毒感染至小鼠成纤维细胞株NIH3T3中,RT-PCR及Western-blot分别检测NIH3T3细胞中Bi-1基因和蛋白的表达。结果 PCR、酶切及测序结果表明重组慢病毒载体构建成功;NIH3T3细胞感染重组载体包装的慢病毒后出现明显的Bi-1基因高表达。结论成功构建靶向Bi-1基因的重组慢病毒载体,为进一步研究Bi-1基因对细胞生长转化的影响提供了实验依据。

陆地棉两个GhBI-1基因的生物信息学分析

BI-1基因是广泛存在于真核生物、原核生物和病毒中的一个保守性基因,具有抑制细胞凋亡的作用。本研究对克隆到的两个陆地棉BI-1基因——GhBI-1a和GhBI-1b进行生物信息学分析,发现其与拟南芥BI-1有很高的同源性,尤其羧基尾极为相似。GhBI-1a有6个跨膜区域,GhBI-1b有7个跨膜区域,它们的二级结构也与其他物种的BI-1相似,跨膜区域基本都是α螺旋。

乳癌组织中BI-1、Bcl-2和Bcl-xl蛋白的表达

目的:检测乳癌组织中Bax inhibitor-1(BI-1)、Bcl-2和Bcl-xl蛋白的表达,探讨可能的抗凋亡机制。方法:采用Western blot检测42例乳癌及配对正常乳腺组织中BI-1蛋白的表达;采用免疫组织化学方法检测42例乳癌组织中Bcl-2与Bcl-xl的表达。结果:乳癌组织中BI-1蛋白的相对表达量明显高于配对正常乳腺组织,P<0.05;乳癌组织中BI-1的表达与Bcl-2和Bcl-xl均呈正相关(r=0.356和0.375,P均<0.05)。结论:BI-1的过度表达可能促进了乳癌的发生。Bcl-2和Bcl-xl均参与了BI-1的抗凋亡过程。

BI-1作为酵母双杂交系统诱饵的载体构建

目的研究BI-1完整编码区能否在酵母细胞中表达,排除自身激活作用,并验证它能否用于酵母双杂交系统。方法以人正常肺组织cDNA为模板,扩增BI-1完整编码区,经EcoRⅠ、SalⅠ双酶切后克隆到酵母双杂交系统诱饵载体pGBKT7上,构建诱饵蛋白载体pGBKT7-BI-1,转化酵母细胞,通过β-半乳糖苷酶活性分析验证有无自激活,Western印迹验证其表达。结果DNA测序显示BI-1编码区内无突变,β-半乳糖苷酶活性分析显示转入pGBKT7-BI-1和阴性对照的酵母菌落没有激活报告基因LacZ,而阳性对照菌落呈现蓝色。结论含有BI-1完整编码区的诱饵载体不存在自身激活作用,并能在酵母细胞中表达BI-1蛋白,能够应用于酵母双杂交系统筛选相互作用蛋白。

BI-1蛋白及其相关调控因子在非小细胞肺癌细胞系中的表达研究

目的研究凋亡抑制因子BI-1及其相关调控因子Bcl-2、Bcl-XL在非小细胞肺癌细胞系中的表达差异,分析BI-1与Bcl-2、Bcl-XL的相互作用关系。方法以9种非小细胞肺癌细胞系(NSCLC)为实验材料,采用RT-PCR和Western印迹技术在cDNA和蛋白水平检测3种基因的表达。结果发现BI-1在NSCLC中高表达,Bcl-2表达较低(在A549、PAa、GLC-82和SPC-1-A几乎检测不到),Bcl-XL表达较稳定,且明显高于Bcl-2。结论在NSCLC细胞中,BI-1主要与Bcl-XL形成蛋白复合体作用于凋亡通路。

抑制人BI-1基因表达shRNA重组慢病毒表达载体的构建(英文)

背景:慢病毒介导的RNAi技术以其专一性、抑制效率高、作用持久等优点已广泛应用于基因功能研究中。该技术病毒包装、转染、以及shRNA序列设计都会对抑制效率产生影响。因此实验以人的Bax抑制子1(BI-1)为目的基因进行RNA干扰实验来探讨其影响因素。目的:为了利用慢病毒Lentivirus介导的RNAi技术寻找抑制人BI-1基因表达的siRNA。设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-09/2008-12在北京大学医学部基础医学院医学遗传学系完成。材料:293T细胞、SH-SY5Y细胞为实验室保存;用Ambion公司(www.ambion.com)提供的网络在线工具设计了4个shRNA。方法:构建带有绿色荧光蛋白(EGFP)标签的、针对人BI-1基因不同区域设计的shRNA重组表达载体,然后与包装蛋白表达载体共转染293T细胞以包装成4种shRNA病毒粒子。通过流式细胞仪检测GFP的表达情况来摸索最佳包装条件。Real-timePCR以β-肌动蛋白mRNA被用作内参,将4种重组病毒和对照组病毒上清液侵染SH-SY5Y,检测内源性BI-1基因的敲低效率,筛选到最佳RNAi有效序列。主要观察指标:被不同包装病毒侵染的细胞内GFP的表达率。结果:pLentiLox3.7、rev、vsvg、rre等4质粒包装系统的最佳包装比例为2:1:1:1,包装48h收获的病毒粒子的感染效率最高,并且在包装后的24h之后换液会提高包装效率。靶定到人BI-1基因-2-17核苷酸(起始编码区域)的shRNARNA干扰效率最高。能够抑制40%正常基因表达。结论:实验摸索出Lentivirus介导的RNAi技术病毒包装的重要影响因素。为建立稳定的人BI-1基因表达敲低的神经细胞模型和研究BI-1异常表达参与的神经元凋亡疾病的病理研究打下基础。

奈达铂联合BI-1基因沉默对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究奈达铂联合靶向沉默BI-1基因对鼻咽癌细胞CNE-2增殖和凋亡的影响。方法采用MTT法检测奈达铂联合靶向沉默BI-1基因对鼻咽癌细胞CNE-2增殖的抑制作用。采用流式细胞技术检测奈达铂联合靶向沉默BI-1基因对鼻咽癌细胞CNE-2凋亡的影响。结果奈达铂联合靶向沉默BI-1基因呈时间和剂量依赖性抑制鼻咽癌细胞株CNE-2的增殖,奈达铂联合靶向沉默BI-1基因呈剂量依赖性诱导鼻咽癌细胞CNE-2的凋亡。结论研究结果证实奈达铂联合靶向沉默BI-1基因能有效抑制鼻咽癌细胞CNE-2的增殖,并能诱导鼻咽癌细胞CNE-2的凋亡。这种化疗联合靶向治疗的模式以期为鼻咽癌的治疗提供一种新的高效低毒的治疗模式。

乳癌组织中BI-1和P53蛋白的表达

目的:探讨乳癌组织中凋亡相关基因BI-1及P53的表达。方法:采用免疫组化SP法检测64例乳癌及配对的正常乳腺组织中BI-1、P53蛋白的表达。结果:乳癌组织中BI-1、P53蛋白的阳性表达率分别为76.6%和46.9%,高于正常乳腺组织中2者的阳性表达率(3.1%和4.7%,χ2分别为72.002,29.765,P均<0.05)。不同的组织学分级和临床分期之间BI-1蛋白的表达差异无统计学意义(P>0.05),而P53蛋白的阳性表达率随组织学分级和临床分期的增高而增加(P<0.05)。淋巴结转移乳癌组织中BI-1和P53蛋白的表达阳性率均高于未转移组(P<0.05)。在乳癌组织中BI-1与P53蛋白的表达呈正相关(r=0.672,P<0.05)。结论:乳癌组织中BI-1与P53蛋白的联合检测对揭示乳癌的发病原因、判断预后及乳癌的早期诊断和基因治疗具有重要的指导意义。

先进制造封装中Sb掺杂64Sn-35Bi-1Ag钎焊腐蚀和电化学迁移

采用动电位扫描结合SEM和XRD等技术研究先进电子制造封装过程中Sb掺杂对64Sn-35Bi-1Ag钎焊料在3%(wt.)NaCl溶液中腐蚀和电化学迁移行为影响。结果显示:Sb掺杂前后腐蚀电流密度(Icorr)随着Sb含量增加而有较显著的变化。其中当Sb含量小于1%时,随着Sb含量增加,其腐蚀电流密度(Icorr)减小。当Sb含量大于1%时,其腐蚀电流密度(Icorr)随着Sb含量的增大而增大;不论掺杂多少量,Sb掺杂后,钎料的腐蚀速率显著的增大,说明Sb掺杂后64Sn-35Bi-1Ag更易被腐蚀。电化学迁移结果显示,Sb掺杂前后,枝晶生长的速率显著不同,且枝晶成份有较大差异,掺杂后大于掺杂前,说明Sb掺杂不利于先进电子制造和封装技术。

双靶点沉默hTERT和Bi-1基因诱导人鼻咽癌细胞凋亡的初步研究

目的利用RNA干扰阻抑hTERT和Bi-1基因的表达并诱导人鼻咽癌细胞的凋亡。方法收集CNE-2Z细胞,设未处理组、Lip组、pcDNA3.1(+)/Lip对照组、TR/Lip组、TRs/Lip组、Bi-1/Lip组、Bi-1s/Lip组、TR-Bi-1/Lip组和TRsBi-1s/Lip组,采用MTT法观察质粒载体及转染试剂对CNE-2Z细胞生长增殖的影响;采用流式细胞术检测CNE-2Z细胞凋亡,Hoechst 33258染色,采用荧光显微镜观察鼻咽癌细胞形态学的变化。结果 TR、Bi-1和TR-Bi-1组的CNE-2Z细胞增殖能力显著降低,且TR-Bi-1组的生长增殖能力最低(P<0.05);凋亡细胞有所增加。转染TR、Bi-1和TR-Bi-1重组质粒48 h后,荧光显微镜下可见部分鼻咽癌细胞出现典型的凋亡形态学变化;而pcDNA3.1(+)、TRs、TRs-Bi-1s、Lip和未处理组则无明显变化。结论双基因表达载体可以同时特异、有效地沉默hTERT和Bi-1两种基因,与沉默单基因的效果相比较,双基因沉默组鼻咽癌CNE-2Z细胞的增殖率受到明显抑制。

靶基因Bi-1RNAi重组慢病毒载体的构建与鉴定

目的构建靶向人Bax Inhibitor-1(Bi-1)基因的shRNA慢病毒重组载体。方法借助siRNA设计工具,并结合文献资料选取Bi-1基因编码序列中有效的干扰靶点,根据连接载体中的酶切位点自行设计并人工合成干扰靶点的一对反义脱氧寡核苷酸链,先定向克隆到pU6载体(pU6-Bi-1-shRNA),再经双酶切后克隆到慢病毒包装质粒LunIG,得到靶向Bi-1基因沉默的慢病毒包装重组质粒LunIG-Bi-1。重组质粒经PCR法进行初筛后,再通过双酶切电泳和目的基因沉默效果的检测保证插入序列的正确性。结果靶向沉默Bi-1基因的shRNA序列成功插入到慢病毒包装质粒LunIG中。结论靶向Bi-1基因沉默的慢病毒shRNA包装重组质粒构建成功。

利用瞬时表达技术分析小麦抗白粉病相关基因CAF1、BI-1和DAD1的功能

利用小麦离体叶片瞬时表达技术分析了3个小麦抗白粉病相关基因CAF1、BI-1和DAD1的功能。根据小麦响应白粉菌侵染的差异表达基因芯片检测结果,筛选出表达差异的抗病相关基因CAF1和BI-1,并挑选与植物程序性死亡相关的基因DAD1,将克隆到的这3个小麦基因全长ORF序列构建入超表达载体pAHC25中,利用瞬时表达技术检测目标基因和GUS基因共转化的阳性小麦叶片表皮细胞中白粉菌成功侵入并形成吸器的细胞比例(侵入频率),研究目标基因的超表达后对白粉菌入侵及吸器形成产生的影响。结果表明,小麦CAF1基因在感病小麦品种叶片中的瞬时表达,对白粉病侵入和吸器形成具有一定的抑制作用(侵入频率为(37.37±3.2)%,对照为(54.75±0.6)%),在一定程度上增强了表达细胞对白粉菌的抗性;表达DAD1基因则可能在一定程度上有利于白粉菌吸器的形成(侵入频率为(57.34±1.1)%,对照为(50.93±1.3)%);而在感病叶片中表达基因BI-1对白粉菌吸器形成没有明显影响(侵入频率为(54.31±1.7)%,对照为(52.37±1.8)%)。

血清AQP-1联合脑电双频指数对颅脑损伤患者病情严重程度和预后的评估

目的探讨血清水通道蛋白-1(AQP-1)联合脑电双频指数(BIS)对颅脑损伤(TBI)患者病情严重程度和预后的评估价值。方法选取2018-01—2021-12赤峰市医院收治的125例TBI患者为TBI组,根据格拉斯哥昏迷量表(GCS)分为轻度组51例,中度组42例,重度组32例,根据90 d格拉斯哥预后量表分为预后不良组和预后良好组,选取同期60名健康体检者为对照组。收集TBI患者临床资料,检测血清AQP-1水平和监测BIS。分析TBI患者血清AQP-1水平和BIS与GCS评分的相关性及AQP-1水平和BIS与TBI患者预后的不良关系和评估价值。结果TBI组血清AQP-1水平高于对照组(P<0.05)。轻度组、中度组、重度组血清AQP-1水平依次升高,BIS依次降低(P均<0.05)。Spearman相关性分析显示,TBI患者GCS评分与血清AQP-1水平呈负相关,与BIS呈正相关(rs=-0.829、0.855,P均<0.001)。随访90 d,125例TBI患者预后不良发生率为26.40%(33/125)。多因素Logistic回归分析显示,GCS评分(OR=0.697,95%CI:0.569~0.854)、BIS(OR=0.705,95%CI:0.590~0.843)增加为TBI患者预后不良的独立保护因素,中线移位≥5 mm(OR=4.568,95%CI:1.200~17.387)、基底池异常(OR=3.620,95%CI:1.092~12.002)和AQP-1(OR=1.115,95%CI:1.023~1.215)升高为其独立危险因素(P均<0.05)。ROC曲线分析显示,血清AQP-1联合BIS(AUC=0.837,95%CI:0.760~0.897)评估TBI患者预后不良的曲线下面积(AUC)大于AQP-1(AUC=0.759,95%CI:0.674~0.831)、BIS(AUC=0.769,95%CI:0.685~0.840)单独评估(P均<0.05)。结论血清AQP-1水平升高和BIS降低与TBI患者病情加重和预后不良有关,血清AQP-1联合BIS评估TBI患者预后不良的价值较高。

栉孔扇贝BI-1基因的克隆与表达分析

本研究采用RT-PCR和RACE技术首次获得了栉孔扇贝(Chlamys farreri)BI-1基因(Cf BI-1)c DNA全长序列,长度957bp,5′和3′非编码区长度分别为48bp和195bp,开放阅读框为714bp,预测编码一个含有237个氨基酸的蛋白质,分子量为27k Da;结构预测显示,Cf BI-1蛋白包含6个跨膜结构域。同源和分子进化聚类分析显示,Cf BI-1蛋白序列与其他一些物种中的BI-1蛋白序列相似性很高,表明BI-1具有很高的保守性。通过荧光定量PCR的方法检测了Cf BI-1 m RNA在栉孔扇贝正常组织中和在干露、脂多糖以及扇贝急性病毒性坏死症病毒刺激之后的表达水平的变化。结果表明,Cf BI-1在栉孔扇贝各组织中广泛分布,其中闭壳肌中的表达量最高,血淋巴中的表达量最低。在干露和病毒刺激以后,Cf BI-1基因表达水平较对照组都有显著上调(P<0.05),表明Cf BI-1基因可能参与了干露刺激和急性病毒性坏死症病毒感染后的细胞应激响应及其诱导的细胞凋亡过程。综合上述分析,我们认为Cf BI-1基因在栉孔扇贝细胞凋亡调控过程中可能起到重要作用,可为栉孔扇贝凋亡相关基础研究提供参考。

过表达Bax抑制子1(BI-1)通过内质网IRE1-JNK通路抑制蛛网膜下腔出血大鼠海马神经元凋亡

目的探讨慢病毒介导Bax抑制子1(BI-1)过表达对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠海马神经元保护作用以及与内质网膜蛋白肌醇酶1-c-Jun氨基末端激酶(IRE1-JNK)信号通路的关系。方法制备BI-1过表达慢病毒并经侧脑注射,24 h后采用血管内穿刺法建立SAH大鼠模型。于造模后24 h,对大鼠进行神经行为学评估和脑含水量检测,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)观察大鼠海马神经元凋亡情况,Western blot法检测BI-1蛋白以及内质网应激标志蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和IRE1蛋白水平。采用IRE1α特异性抑制剂KIRA6处理SAH后大鼠,Western blot法检测BI-1过表达对IRE1-JNK信号通路相关蛋白磷酸化的IRE1(p-IRE1)、磷酸化的JNK(p-JNK)及凋亡相关蛋白Bax、Bcl2和caspase-3蛋白水平的影响。结果过表达BI-1提高SAH模型大鼠的神经行为学评估得分,降低SAH模型大鼠的脑含水量和海马神经元凋亡率,并且BI-1过表达可以下调SAH后大鼠海马神经元中GRP78和IRE1蛋白水平。KIRA6处理和BI-1过表达均可抑制p-IRE1、p-JNK、Bax的表达和caspase-3的活化,促进Bcl2的表达。结论过表达BI-1可通过阻断IRE1-JNK通路抑制SAH后大鼠海马神经元凋亡。