促凋亡蛋白Bid在子宫内膜癌中的表达及意义

目的:检测促凋亡蛋白Bid在不同子宫内膜组织中的表达,探讨其与子宫内膜病变发生、发展的关系。方法:应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接法(SP法)检测30例正常子宫内膜组织和42例子宫内膜癌组织中Bid mRNA及蛋白的表达,并分析表达量与子宫内膜癌临床病理学参数的关系。结果:Bid蛋白在子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织中的相对表达量分别为11.253±2.984和21.361±3.056,差异有统计学意义(P<0.05);Bid蛋白mRNA在子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织中的相对表达量分别为0.309±0.195和0.642±0.207,差异有统计学意义(P<0.05);在不同临床分期、不同组织学分级和肌层浸润的子宫内膜癌组织中Bid蛋白的表达量有统计学差异(P<0.05)。结论:Bid蛋白可能参与子宫内膜病变的发生发展过程。

截短型人Bid融合蛋白对HeLa细胞的促凋亡作用

目的 :观察截短型人bid及其N端融合蛋白的表达对HeLa细胞的促凋亡作用 .方法 :通过反转录PCR方法获取人全长bid基因 ,再经PCR方法克隆得到截短型bid(trun catedbid ,tbid)基因及其N端融合蛋白基因插入pcDNA3真核表达载体 ,脂质体法转染HeLa细胞 ,通过间接免疫荧光 ,电子显微镜以及流式细胞仪等方法观察被转染细胞的生长及凋亡状况 .结果 :成功获得人bid基因 ,构建了tbid基因及tbid与绿脓杆菌外毒素 (PE)转膜结构域部分肽段的融合蛋白基因的真核表达载体 (pcDNA3 tbid6 1 ,pcDNA3 PE tbid6 1 ) .与对照组相比 ,在转染后 1 2～ 4 8h内两种基因的表达均导致HeLa细胞发生凋亡 ,且两者活性相当 .结论

HL-60及其耐药细胞之间线粒体膜及线粒体中Bid差异研究

目的 研究线粒体膜及线粒体中Bid参与肿瘤耐药的机制。方法 采用紫外分光光度仪和流式细胞仪检测Ca2+ 诱导下HL- 60及其耐药细胞HL -60/E6线粒体膜通透改变孔道开放和线粒体膜电位的变化,Western blot检测线粒体中Bid表达。结果 Ca2+诱导下HL- 60/E6 细胞线粒体膜电位下降幅度和膜通透改变孔道开放程度明显低于HL -60 细胞。药物AMD作用后线粒体中Bid表达呈时间依赖性,而且在不同时间,HL- 60/E6 细胞线粒体中Bid表达均明显低于HL- 60 细胞。结论 HL -60/E6细胞耐药与Ca2+诱导下线粒体膜电位下降幅度及膜通透改变孔道开放程度的降低有关,还与线粒体上Bid表达降低有关。

Bid蛋白在瘢痕疙瘩中的高表达及其意义

目的检测促凋亡分子Bid蛋白在瘢痕疙瘩中的表达,研究其与瘢痕疙瘩发生的关系。方法用免疫组织化学法和免疫印迹法(western blotting)分别检测12例瘢痕疙瘩与12例正常皮肤组织中Bid蛋白的表达,定量分析Bid蛋白在瘢痕疙瘩中的表达。结果①Bid蛋白在瘢痕疙瘩和正常皮肤组织的角质细胞、成纤维细胞、炎症细胞以及血管内皮细胞、毛囊、汗腺、皮脂腺等细胞的胞质及部分胞核中表达。②表皮中Bid蛋白表达量两种组织差异无显著性(P>0.05);凋亡启动的细胞数量正常皮肤(1738.33±348.89/mm2)高于瘢痕疙瘩(891.67±395.00/mm2)(t=-5.565,P=0.000)。在真皮中的Bid蛋白阳性成纤维细胞数,瘢痕疙瘩(911.67±323.61/mm2)高于正常皮肤(220.00±80.00/mm2)(t=7.188,P=0.000)。免疫印迹法实验结果进一步证实Bid蛋白含量瘢痕疙瘩(0.46±0.08)高于正常皮肤(0.02±0.01)(t=18.905,P=0.000)。结论①正常皮肤表皮凋亡启动的细胞多于瘢痕疙瘩;②Bid蛋白在瘢痕疙瘩真皮组织中表达增高。

Bid蛋白在骨关节病关节软骨细胞中的表达及意义

目的研究促凋亡蛋白Bid在正常关节软骨细胞和骨关节病时关节软骨细胞中的表达,探索Bid蛋白在骨关节病发病中的作用。方法取20例髋关节骨关节病行关节置换的关节软骨标本和10例正常关节软骨标本,应用免疫组织化学方法检测Bid蛋白在软骨细胞中的表达。结果Bid蛋白表达阳性率在骨关节病关节软骨细胞中较正常关节软骨细胞高,两者有显著性差异。结论Bid蛋白可能通过参与调控关节软骨细胞凋亡,在骨关节病发病中起作用。

细胞凋亡过程中Bid蛋白在活细胞内的动态分布

当细胞暴露于凋亡诱导因子如肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)等的环境中,被激活的凋亡酶Caspase8将Bid蛋白切割成两个片断,随后其C-端片段转移到线粒体上诱发细胞色素c的释放,最终引起细胞凋亡。虽然关于Bid蛋白的研究已经取得了很大进展,但是Bid蛋白是如何转移到线粒体以及如何引起细胞色素c释放等许多问题尚未十分明了。为了进一步对Bid蛋白的生物学行为进行研究,特别是在无损伤、活细胞生理条件下,本实验采用了荧光蛋白标记和荧光成像技术对凋亡过程中Bid蛋白在活细胞内分布的动态过程进行了初步研究。

促细胞凋亡因子Bid蛋白的研究进展

Bid蛋白是Bcl -2家族中促凋亡类的蛋白。它具有可被caspase8酶切调控、高效地诱导细胞色素c从线粒体泄漏到胞浆中的功能 ,从而在细胞凋亡中起着重要的作用 ,因而倍受人们的重视。Bid蛋白的功能被发现以来 ,短短几年间 ,人们从分子生物学、细胞学、结构分析以及利用脂质体模型膜体系等各方面对Bid蛋白进行研究 ,取得了很大的进展。

利用FRET技术实时检测Bid蛋白在TNF-α诱导PC12细胞凋亡过程中的作用

】目的在活细胞中实时检测TNF-α诱导PCI2细胞凋亡过程中Bid蛋白的作用并探讨PCI2细胞凋亡的信号通路。方法利用基于荧光共振能量转移（nuoreseence resonance energyt ransfer，FRET）原理设计的荧光探针pFRET-Bid（YFP-Bid-CFP）转染PC12细胞后，在激光共聚焦显微镜下实时检测Bid蛋白的切割情况，并采用专用软件进行数据分析。结果TNF-α诱导细胞凋亡的过程中，在短时间内（3h）就凋亡的细胞中观测不到bid的切割，而在8h后凋亡的细胞中却观测到了bid的切割。结论通过分析实验结果推测不同时间凋亡的细胞经过的信号通路是不同的，一个是不通过线粒体的较快途径，一个是需要通过线粒体的较慢途径。

BID蛋白促细胞凋亡增殖失衡作用与IgA肾病患者病情的关系

目的探讨IgA肾病(IgAN)不同病变程度肾组织中BID蛋白的表达与细胞凋亡、增殖的关系。方法免疫组化法检测肾组织PCNA、BID蛋白和FN,用原位末端标记法(TUNEL)结合光镜形态学检测细胞凋亡情况。结果随IgAN病变程度加重,BID蛋白、PCNA、凋亡细胞及FN表达逐渐增强(P<0.05),Ⅳ级最强(PCNA:Ⅲ、Ⅳ相当);肾小球内BID蛋白与凋亡细胞比值、PCNA、FN表达,肾小球硬化率及尿蛋白排泄量正相关,与eGFR负相关(P<0.01)。结论BID蛋白可通过促进细胞凋亡增殖失平衡促进IgAN病程进展,可能为判断预后的一项重要病理指标。

结肠癌患者细胞凋亡与预后意义的初步研究

目的探讨促凋亡蛋白Bid在大肠癌、大肠腺瘤及正常肠黏膜组织的表达差异,了解其在大肠癌生物治疗中的价值。方法应用免疫组化MaxVisionTM快捷法检测正常肠黏膜18例、结肠腺瘤21例及结肠癌83例的Bid表达。结肠癌Dukes分期为A期22例、B期20例、C期20例及D期21例。表达程度采用半定量积分法。结果Bid在结肠腺瘤中阳性表达为95.2%,高于正常肠黏膜(72.2%)及结肠癌(72.3%),前者与后二者相比,差异显著(P<0.05)。结肠癌DukesD期Bid阳性表达100%与A、B期(40.9%、55.0%)相比有极显著差异(P<0.001),DukesD期且有28.6%高表达。在结肠癌的高表达DukesD级病例,虽Bid表达为强阳性但结肠癌细胞仍不受限制持续增殖。结论结肠癌的早期阶段(结肠腺瘤)中Bid阳性率高于结肠癌,说明细胞凋亡属于结肠癌变的早期现象。结肠癌细胞可能存在使抗瘤的T细胞及NK细胞发生免疫识别困难而致免疫逃逸的途经。

Bid蛋白在内质网和线粒体相关的凋亡过程中的作用

目的研究 Bid 蛋白在内质网和线粒体相关的凋亡过程中的作用。方法以高三尖杉酯碱(HHT)诱导人骨髓增生异常综合征(MDS)细胞系 MUTZ-1细胞凋亡,用流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR 及 Western blot 法检测线粒体和内质网凋亡途径的相关基因及蛋白表达,激光共聚焦显微镜观察用药前后钙离子浓度和线粒体膜电位的改变以及凋亡相关蛋白 Bid 的转位。结果 0.05μg/ml HHT 作用后4 h胞质内 Ca^(2+)浓度增高,12 h达高峰,其后开始下降。HHT 作用后线粒体膜电位持续下降。内质网应激相关因子基因及蛋白表达增强,12 h达到高峰,其后开始下降。激光共聚焦显微镜观察发现 Bid 蛋白用药前位于内质网,用药12 h后转位至线粒体。结论 HHT 可以诱导 MDS 细胞凋亡,内质网和线粒体相关的凋亡途径在其中发挥了重要的作用,Bid 蛋白可能是两种凋亡途径的交叉点。

丙泊酚后处理对大鼠原代皮质神经元氧糖剥夺．复糖复氧后P38蛋白激酶和促凋亡因子Bid、Bim、Puma表达的影响

目的探讨丙泊酚后处理对大鼠原代皮质神经元氧糖剥夺-复糖复氧后P38蛋白激酶（P38MAPK）和促凋亡因子Bid、Bim、Puma表达的影响。 方法体外培养出生24 h内的SD大鼠的皮质神经元并接种于6孔板或96孔板培养皿，分为对照组（C组，正常培养）、氧糖剥夺-复糖复氧组（O组）、氧糖剥夺-复糖复氧＋丙泊酚后处理组（OP组）、氧糖剥夺-复糖复氧＋丙泊酚后处理组＋P38MAPK阻断处理组（OPS组）、P38MAPK阻断处理组（S组）、氧糖剥夺-复糖复氧＋P38MAPK阻断处理组（OS组）。氧糖剥夺-复糖复氧处理是将神经元氧糖剥夺90 min并复糖复氧24 h；丙泊酚后处理为向培养基中加入丙泊酚原液（50 μmol/L）处理2 h；P38MAPK阻断处理为提前1 h向培养皿中加入P38MAPK抑制剂SB202190（50 μmol/L）。收集各组处理好的神经元，采用Annexin V-FITC/PI双染色法测定神经元凋亡率，MTT法测定细胞生存率，乳酸脱氢酶法测定细胞损伤率，JC-1荧光法测定线粒体膜电位水平，荧光素-荧光素酶试剂盒测定ATP含量，Western blotting测定P38MAPK和促凋亡因子Bid、Bim、Puma表达水平。结果与C组比较，O组神经元磷酸化P38MAPK表达升高，凋亡率升高，存活率降低，损伤率升高，线粒体膜电位水平和ATP含量降低，促凋亡因子Bid、Bim、Puma表达水平增加，差异均有统计学意义（P〈0.05）。与O组比较，OP组神经元磷酸化P38MAPK表达升高，凋亡率降低，存活率升高，损伤率降低，线粒体膜电位水平和ATP含量升高，促凋亡因子Bid、Bim、Puma表达水平降低，差异均有统计学意义（P〈 0.05）。与OP组比较，OPS组神经元凋亡率升高，存活率降低，损伤率升高，线粒体膜电位水平和ATP含量降低，促凋亡因子Bid、Bim、Puma表达水平增加，差异均有统计学意义（P〈0.05）。与O组比较，OS组神经元凋亡率升高，存活率降低，损伤率升高，线粒体膜电位水平和ATP含量降低，促凋亡因子Bid、Bim、Puma表达水平增加，差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论丙泊酚后处理降低氧糖剥夺-复糖复氧后大鼠原代皮质神经元凋亡的机制可能与增加P38MAPK磷酸化后抑制促凋亡因子Bid、Bim、Puma表达相关。