纯合子BIGH3R124H基因突变的角膜临床及免疫病理学表型研究

A family was previously reported as suffering from severe granular dystrophy. The phenotypic picture suggested a mix of homozygous and heterozygous family members. Genetic analysis confirms the homozygousity in the patients most severely affected, but shows the disease state to be one of Avellino corneal dystrophy. The previous case reports are extended immunohistological staining using polyclonal antibodies raised against keratofepithelin. This genotype/phenotype correlation study is consistent with incomplete dominance.

多用途基因捕获C3H/10T1/2细胞阳性克隆库的构建及鉴定

目的：以10T1／2细胞为间充质干细胞模型，构建用于间充质干细胞分化及恶性转化分子机制等研究的基因捕获阳性克隆库．方法：Dra I线性化逆转录病毒基因捕获载体ROSAFARY后，与pIRES2-EGFP用脂质体共转染phoenix细胞，LacZ染色证明转染成功后收集病毒上清感染10T1／2细胞．经潮霉素筛选获得阳性克隆，为排除假阳性克隆用LacZ部分片段PCR进行鉴定．结果：ROSAFARY脂质体转染phoenix细胞后48h，GFP指示的转染效率约为20％～30％，LacZ染色有大约10％的阳性率．150mg／L潮霉素筛选病毒感染的10T1／2细胞，挑取药物抗性克隆，PCR鉴定后获得43个阳性克隆，LacZ染色5个为捕获基因高表达细胞克隆．结论：基因捕获技术建立非胚胎干细胞的克隆是可行的，成功建立的基因捕获阳性克隆库为应用基因捕获技术揭示成体干细胞分化及恶性转化分子机制奠定了基础．

禽流感病毒A/goose/China/24/96(H7N3)分离株NP基因片段的克隆及其序列同源性分析

本文首次以广东禽流感无致病力分离株A/goose/China/24/96（H7N3）核蛋白（NP）基因核酸为模板,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术,扩增出了预计的830 bp左右的片段。将此扩增产物克隆进pGEM-4Z载体,采用限制性内切酶、地高辛标记探针和序列测定对该重组质粒进行了鉴定。测出的NP序列经Blast2.0比较,与GenBank中收录的AIV其它病毒株NP基因相应片段的同源性在91％以上。

组胺H3受体激活剂高通量筛选细胞模型的研究

目的:建立基于报告基因的组胺H3受体(H3R)激活剂的高通量筛选模型,用此模型对收集到的中草药化合物组分进行筛选,以发现新的组胺H3R激活剂。方法将H3R基因质粒(H3R/pCDNA3.1-hygro)与报告基因质粒(3XCRE-LUC)按3∶1的比例共转染入HEK293细胞,建立了稳定的H3R配体的报告基因筛选细胞株。激活剂与细胞表面H3R结合后,激活相应的信号通路,调节Forskolin刺激后的报告基因的表达,通过测定荧光素酶报告基因表达水平的变化,评估激活剂影响H3受体的生物活性。结果通过对筛选条件,如激活剂孵育时间、Forskolin终浓度、化合物溶剂的选择、溶剂DMSO终浓度等的优化,建立了可靠的筛选方法。该模型的Z因子可达到0.5以上,稳定性可保持20代,完全符合高通量筛选需求。利用该细胞模型对多种中草药萃取物进行了筛选,找到了两种对H3R有活性的中药组分。结论建立的细胞模型可以有效的应用于以组胺H3受体为靶点的高通量药物筛选。

儿童快发病性肌张力障碍-帕金森综合征临床和基因分析

目的探讨儿童期起病的快发病性肌张力障碍-帕金森综合征(RDP)的临床特点及基因型-表型相关性。方法回顾分析2例ATP1A3基因R756H变异导致的RDP患儿的临床资料,以“RDP”和“ATP1A3 R756H”为检索词分别在中国知网、万方数据库和PubMed、HGMD和OMIM等数据库中检索文献并进行复习。结果2例男性患儿,分别为7岁和9岁,临床均表现为发热后出现构音困难、肌无力、肌张力障碍伴肢体抖动;全外显子基因测序均发现ATP1A3基因R756H变异。文献检索到8例ATP1A3基因R756H变异导致的儿童期起病的RDP,临床表现相似。结论ATP1A3基因R756H变异导致的RDP临床主要特点为发热诱发的肌无力、构音困难伴有帕金森样肢体抖动。

Avellino角膜营养不良家系的βIGH3基因突变研究

目的研究Avellino角膜营养不良(Avellino corneal dystrophy,ACD)一个家系的临床表现及其βIGH3基因突变类型。设计实验研究。研究对象Avellino角膜营养不良一个中国家系。方法详细采集该家系5代75人病史,进行视力、裂隙灯显微镜、外眼照相、眼底、眼前节光学相干断层扫描(anterior segment optical coherence tomography,AS-OCT)检查,应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)并结合DNA测序技术进行βIGH3基因第4、11和12外显子突变检测。主要指标基因序列。结果本病临床特征为角膜基质层颗粒状及格子状混浊。AS-OCT显示角膜病灶位于角膜上皮层及浅、中基质层。基因检测发现该家系患者βIGH3基因第4外显子370位点碱基C→T,即R124C突变。家系中正常成员无该位点的基因突变。结论R124C突变与Avellino角膜营养不良的发生有关,该基因的突变可导致不同类型角膜营养不良的发生。