沉默BIRC7基因的Jurkat稳定细胞系建立

【目的】通过RNA干扰技术(RNAi)建立稳定性BIRC7基因沉默的Jurkat实验细胞模型。【方法】应用pSilencer4.1-CMV neo构建BIRC7 shRNA表达载体,采用脂质体将载体导入Jurkat细胞,利用G418筛选出稳定表达shRNA细胞后,行RT-PCR和Western blot等技术检测细胞BIRC7表达水平。【结果】成功筛选出分别携带二种重组shRNA表达的Jurkat细胞系。与对照组细胞相比,转染BIRC7 shRNA的细胞BIRC7 mRNA表达下降约>70%,BIRC7蛋白表达减少>60%。生长曲线显示生长速度减慢,细胞倍增时间延长,细胞凋亡率增加。【结论】稳定转染重组BIRC7 shRNA表达载体能有效干扰BIRC7基因表达,表明RNAi技术可以成为研究BIRC7基因功能的有效工具。BIRC7有可能成为T-淋巴母细胞性白血病/淋巴瘤治疗的潜在新靶点。

结直肠腺癌KLF4和BIRC7表达及其临床病理意义

目的研究结直肠癌、癌旁组织和腺瘤中KLF4和BIRC7表达水平及其临床病理意义。方法结直肠癌、癌旁组织和腺瘤手术切除标本经4%甲醛固定后常规制作石蜡包埋切片,KLF4和BIRC7染色方法为En Vision免疫组化法。结果结直肠癌KLF4表达阳性率明显低于癌旁组织和腺瘤(P<0.05),结直肠癌BIRC7表达阳性率明显高于癌旁组织和腺瘤(P<0.01);高分化、无淋巴结转移、仅侵犯肌层病例及TNM临床分期Ⅰ+Ⅱ的结直肠癌病例KLF4表达阳性率明显高于低分化、淋巴结转移、侵犯浆膜层或浆膜外及TNM临床分期Ⅲ+Ⅳ的结直肠癌病例(P<0.05或P<0.01);低分化、淋巴结转移、侵犯浆膜层或浆膜外及TNM临床分期Ⅲ+Ⅳ的结直肠癌病例BIRC7阳性表达率明显高于高分化、淋巴结未转移、仅侵犯肌层及TNM临床分期Ⅰ+Ⅱ的结直肠癌病例(P<0.05或P<0.01);结直肠癌中KLF4与BIRC7表达水平呈负相关(P<0.01)。结论 KLF4和BIRC7表达水平反映了结直肠癌发生、进展、生物学行为和预后,两者在结直肠癌发生发展方面可能起到互相协调作用。

结直肠癌、癌旁组织和腺瘤中KLF4和BIRC7表达水平及其临床病理意义分析

目的:探讨结直肠癌、癌旁组织和腺瘤中KLF4和BIRC7表达水平及其临床病理意义.方法:将结直肠癌、癌旁组织和腺瘤手术切除标本按常规制成石蜡包埋切片,对KLF4和BIRC7表达水平进行检测.结果:结直肠癌KLF4表达阳性率较癌旁组织和腺瘤明显偏低,差异具有统计学意义(P<0.05).而结直肠癌BIRC7表达阳性率较癌旁组织和腺瘤明显偏高,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:KLF4和BIRC7表达水平对结直肠癌的病理变化有着重要的指示作用,能够清楚地反映出结直肠癌发生、发展以及预后情况,在临床诊疗过程中有着重要的参考价值.

姜黄挥发油对人恶性黑色素瘤细胞株A375细胞增殖及凋亡的影响

目的姜黄挥发油（ tumienc volatile oil,TV0 ） 对多种肿瘤细胞具有抑制作用,能显著减少肿瘤数目,缩小瘤体体积.文中研究TV0 对人表皮黑色素瘤A3 7 5细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法观察不同浓度TV0在体外对A375细胞的作用,CCK8 法测不同浓度TVO（2.5-160mg/ L）在不同时间段（24、48、7211）对人375细胞的增殖抑制率;根据CCK8 结果选取有效最低药物浓度进行实验.吉姆萨染色,倒置显微镜观察细胞凋亡形态;D N A片段化检测细胞凋亡;流式细胞术测细胞凋亡率; Western blot检测Caspase-3及BIRC7 蛋白表达.结果 CCK-8检测显示TV0 浓度为0 - 160mg/L ,抑制率达0 - 4 0 %,并呈时间依赖关系;TV0 诱导A375细胞凋亡,吉姆萨染色下可见药物诱导后细胞增殖变慢,贴壁性降低,细胞间隙增大,形态变得不规则,有核固缩、核碎裂及核溶解,提取DNA凝胶电泳药物作48 h 后,可见凋亡典型的DNA梯状条带,并随药物浓度增加细胞核碎裂越明显;浓度为2.5、5、10mg/ L 的TVO,A3 7 5凋亡率分别为12.7%、13.6%、15.4%,死亡率仅为 0.1% ;与 0mg/L TV0 作用 48 h 后 Caspase-3 表达量（0.412±0.060）比较,2.5、5、1 0 mg/L TV0 作用后表达量（1.021 土0.02、1.238±0.07、1.484±0.09）逐渐增加（P 〈0.05）;与 0 mg/L TV0 作用 4 8 h 后 BIRC7 蛋白表达量（1.538± 0.060）比较,2.5、5、10mg/L TVO作用表达量（1.298±0.02、1.136±0.07、0.54 1±0.09）逐渐下降（P 〈0.05）. 结论TVO对人恶性黑色素瘤细胞株A375细胞有抑制增殖作用,同时有促其凋亡作用,具有抗肿瘤细胞功效,可能与通过下调细胞凋亡抑制蛋白BIRC7表达,激活细胞凋亡途径关键酶Caspase-3,进而抑制肿瘤细胞分化、增殖与促进凋亡有关.

姜黄素对人黑色素瘤细胞凋亡机制探讨

目的:观察姜黄素对人恶性黑色素瘤细胞系A375凋亡的影响作用,探讨姜黄素抗癌的作用机制。方法:将人恶性黑色素瘤细胞系A375等分为4组,分别用0、5、10和20μmol/L的不同浓度姜黄素对该细胞株作用48h后,通过MTT法测定细胞增殖能力;利用流式细胞仪检测细胞凋亡;采用RT-PCR方法检测细胞BIRC mRNA的表达;蛋白质印迹法检测细胞BIRC7蛋白及Caspase-3蛋白的表达。结果:5μmol/L姜黄素对A375细胞增殖抑制率为(13.28±5.28)%,10μmol/L为(19.24±4.15)%,20μmol/L为(36.93±4.78)%,各组间差异有统计学意义,F=65.68,P<0.01。5μmol/L姜黄素作用于A375细胞48h后凋亡率为(15.88±7.21)%,10μmol/L为(22.31±5.63)%,20μmol/L为(31.61±4.82)%,对照组为(3.36±1.54)%,各组间差异有统计学意义,F=25.78,P<0.01。0μmol/L姜黄素作用A375细胞48h后BIRC7基因mRNA表达相对倍率为6.15±1.11,5μmol/L为4.54±1.23,10μmol/L为3.36±0.66,20μmol/L为2.54±0.65,各组间差异有统计学意义,F=4.743,P=0.015。0μmol/L姜黄素分别作用A375细胞48h后细胞BIRC7蛋白表达相对比值为0.88±0.36,5μmol/L为0.71±0.28,10μmol/L为0.56±0.14,20μmol/L为0.43±0.15,各组之间差异均有统计学意义,F=3.36,P=0.037。伴随姜黄素作用浓度的升高,A375细胞的生长呈显著抑制状态,呈剂量依赖性。肿瘤细胞生长、BIRC7mRNA和BIRC7蛋白表达水平均显著下调,呈剂量依赖性。结论:姜黄素可以抑制人恶性黑色素瘤细胞系A375的增殖,也可以促进其凋亡,具有抗癌作用,其作用机制之一可能通过下调BIRC7基因的表达促使黑色素瘤细胞凋亡。