苦参碱对人膀胱癌BIU-87/ADM细胞多药耐药的影响

目的探讨苦参碱对人膀胱癌BIU-87/ADM细胞多药耐药逆转作用的机制。方法 MTT法检测细胞生长抑制率;荧光分光光度计检测阿霉素(ADM)的蓄积和外排;免疫印迹法检测P-糖蛋白(P-gp)表达;P-gp-GloTMAssay System试剂盒检测P-gp ATP酶活性。结果经ADM作用后,与敏感细胞株BIU-87存活率比较,耐药细胞株BIU-87/ADM存活率明显增加(P<0.001),苦参碱呈剂量依赖地降低BIU-87/ADM细胞存活率(P<0.01),而对敏感细胞株BIU-87细胞存活率无显著影响。苦参碱呈剂量依赖地增加ADM在BIU-87/ADM细胞中蓄积水平,抑制ADM细胞内外排。苦参碱明显抑制P-gp蛋白表达,降低P-gp ATP酶活性。结论苦参碱通过抑制BIU-87/ADM细胞P-gp蛋白和ATP酶活性,减弱P-gp外排功能,增加细胞内ADM蓄积,从而发挥对人膀胱癌BIU-87/ADM细胞多药耐药的逆转作用。

白藜芦醇对膀胱癌耐药细胞株BIU-87/ADM自噬影响的实验研究

目的:探讨白藜芦醇对膀胱癌耐药细胞株BIU-87/ADM自噬的影响。方法:分别建立浓度为12.5μmol/L、25.0μmol/L、50.0μmol/L与100μmol/L的白藜芦醇制备品,并以未加药人膀胱癌BIU-87/ADM细胞作为对照。通过CCK-8法检测对照组及不同浓度梯度白藜芦醇对膀胱癌耐药细胞株BIU-87/ADM增殖的影响,应用RT-PCR法测定白藜芦醇处理前后膀胱癌耐药细胞株BIU-87/ADM LC-3和Beclin 1 mRNA的表达水平,并以Wester blot检测白藜芦醇作用后LC-3Ⅱ蛋白的表达水平。结果:加入白藜芦醇试验组BIU-87/ADM细胞24h与48h生长抑制率均明显高于对照组,其48h生长抑制率明显高于24h生长抑制率,具有统计学意义(P<0.05),白藜芦醇浓度越高其细胞生长抑制率越高。加入白藜芦醇试验组BIU-87/ADM细胞的细胞凋亡率明显高于对照组,具有统计学意义(P<0.05),白藜芦醇浓度越高其细胞凋亡率越高。白藜芦醇干预后LC3-Ⅱ与Beclin 1 mRNA表达明显减弱,而白藜芦醇浓度越高其表达减弱程度越明显。结论:白藜芦醇能够明显减少耐药细胞株BIU-87/ADM保护性自噬,抑制膀胱癌耐药细胞增殖,促进耐药细胞凋亡。

藏红花素对人膀胱移行细胞BIU-87细胞抗增殖作用研究

目的研究藏红花素(crocin)对人膀胱移行细胞株BIU-87增殖的作用及机制。方法MTT法测定crocin抗增殖效应,FCM分析细胞周期分布,RT-PCR技术测定CyclinD1,p27kip1mRNA表达变化,Westernblot检测CyclinD1,p27kip1蛋白表达变化。结果crocin对细胞生长有抑制作用,且呈时间-剂量依赖关系。FCM检测显示,crocin可使细胞阻滞于G0/G1期;3.2mmol/Lcrocin作用于BIU-87细胞后RT-PCR结果显示,CyclinD1mRNA表达明显下调,p27mRNA无显著变化;Westernblot结果表明CyclinD1蛋白明显下调;p27kip1蛋白表达显著增加。结论crocin对细胞有抗增殖作用,可阻滞细胞于G0/G1期,其可影响CyclinD1mRNA转录,但并不影响p27mRNA表达水平,并调控CyclinD1、p27kip1蛋白表达。

PI3K抑制剂LY294002联合吡柔比星对膀胱癌BIU-87细胞增殖作用的影响

目的:探讨PI3K抑制剂联合吡柔比星对人膀胱癌BIU-87细胞增殖作用的影响。方法:用不同浓度的PI3K抑制剂LY294002联合吡柔比星对BIU-87细胞作用0、12、24、36 h后,通过MTT方法检测抑瘤率;通过Western blotting检测Caspase-3、Bax、Bcl-2及P-gp蛋白的表达。结果:THP能明显抑制BIU-87细胞的增殖,并且具有明显的时间的依赖性(P<0.05)。THP联合应用不同浓度LY294002组与单独使用同剂量的THP组比较,BIU-87细胞的增殖随着药物浓度的增加和时间的延长进一步受到抑制,而且,联合应用LY294002的低浓度THP组对BIU-87细胞抑制作用明显强于高剂量THP组(P<0.05)。此外,PI3K抑制剂LY294002联合应用THP后,BIU-87细胞Bax与Caspase-3表达都明显上升(P<0.05),Bcl-2与P-gp表达量明显降低(P<0.05)。结论:PI3K抑制剂联合THP比单独应用THP对人膀胱癌BIU-87细胞抑制作用效果明显。

苦参碱对人膀胱癌BIU-87细胞增殖的抑制作用及其机制研究

目的：研究苦参碱对人膀胱癌BIU-87细胞增殖的抑制作用及其机制。方法：以0（阴性对照）、0.5、1.0、2.0、4.0 mg/ml苦参碱分别作用于人膀胱癌BIU-87细胞24、48、72 h后,MTT法检测细胞活性并计算细胞增殖抑制率;以0（阴性对照）、0.5、1.0、2.0、4.0 mg/ml苦参碱作用于细胞48 h后,流式细胞术检测细胞周期和凋亡率,Western blot法检测细胞中生存素、天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶（Caspase）-3及Caspase-7蛋白的表达。结果：与阴性对照比较,1.0-4.0 mg/ml苦参碱作用24、48、72 h后均对BIU-87细胞增殖有显著的抑制作用（P〈0.05或P〈0.01）,增殖抑制率呈浓度和时间依赖性升高;作用48 h后,G0/G1期细胞比例升高、S期及G2/M期细胞比例降低、凋亡率升高（P〈0.05或P〈0.01）。0.5-4.0 mg/ml苦参碱作用48 h后,细胞中生存素蛋白表达减弱、Caspase-3及Caspase-7蛋白表达增强（P〈0.05或P〈0.01）。结论：苦参碱可抑制人膀胱癌BIU-87细胞的增殖、阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡,其机制可能与调控细胞中生存素及Caspase-3、Caspase-7的表达有关。

鸦胆子油乳诱导膀胱癌BIU-87细胞凋亡的研究

目的 :研究鸦胆子油乳对膀胱癌细胞的作用 ,探讨其抑制膀胱癌的机制。 方法 :将 5 μl/ml鸦胆子油乳作用于人BIU 87膀胱癌细胞 ,利用流式细胞仪和透射电子显微镜分析和观察作用结果。 结果 :鸦胆子油乳阻止BIU 87膀胱癌细胞由G0 /G1周期进入S期 ,并诱导人BIU 87膀胱癌细胞的凋亡。 结论 :鸦胆子油乳抗癌作用机制之一是诱导人BIU 87膀胱癌细胞的凋亡。

β-榄香烯对人BIU-87细胞诱导凋亡的实验研究

目的:研究β榄香烯对BIU87 细胞的抗癌作用机制。方法:采用细胞培养、电子显微镜、细胞DNA凝胶电泳和荧光探测等技术,探讨β榄香烯抗癌作用机制。结果:①β榄香烯作用瘤细胞后,光镜观察发现瘤细胞外形逐渐变小变圆,同时明显抑制瘤细胞的生长;电镜观察发现瘤细胞的细胞核染色质密度增高,呈半月形,并凝聚在核膜周围。②β榄香烯作用瘤细胞后,提取瘤细胞DNA,经β榄香烯作用后的样品呈现DNA梯带现象,而对照组则为阴性。③β榄香烯作用瘤细胞后,以Fura 2AM 负载,随着药物浓度的升高,瘤细胞内游离Ca2+ 浓度明显升高,呈明显的量效关系( P<0.01)。结论:β榄香烯诱发BIU87 细胞所出现凋亡的早期变化。

联合化疗对膀胱癌细胞株BIU-87及其耐药亚株联合抑制作用的体外实验研究

实验采用微量细胞培养噻唑蓝显色法观察阿霉素 (ADM)、足叶乙甙 (VP- 16 )、丝裂霉素 C(MMC)和羟基喜树碱 (HCPT)等药物联合应用于膀胱癌细胞株 BIU- 87及其耐药亚株 BIU- 87/ A、BIU- 87/ V,结果显示 :HCPT与MMC、 ADM联合应用对亲本及耐药细胞株都能取得较好抑制作用。联合用药能增强化疗药物对 BIU- 87细胞的毒性作用 。

表阿霉素-羧甲基葡聚糖磁性纳米颗粒协同外磁场对人膀胱癌BIU-87细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究表阿霉素-羧甲基葡聚糖磁性纳米颗粒pirubicin-carboxymethlydextranmagneticnanoparticles,EPI-CDMN)的制备及其协同恒定外磁场体外对人膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:用氧化还原法制备EPI-CDMN,并检测其理化性质。采用MTT法、流式细胞术分别观察EPI-CDMN及联合恒定外磁场体外对人膀胱癌BIU-87细胞增殖和凋亡效应的影响,并探讨其机制。结果:EPI-CDMN直径为8～10nm,比饱和磁化强度为0.22emu/g。含相同EPI浓度的EPI-CDMN和单纯EPI对BIU-87细胞的生长抑制率及凋亡率均无显著性差异(P>0.05)。EPI-CDMN和恒定外磁场(10mT)均可以抑制BIU-87细胞增殖、诱导细胞凋亡,且EPI-CDMN协同外磁场对细胞的生长抑制作用和诱导肿瘤细胞凋亡的效应均显著增强(P<0.01)。结论:EPI-CDMN联合恒定外磁场可以有效的杀灭人膀胱癌BIU-87细胞,为肿瘤的磁导向靶向治疗提供了实验基础。

三氧化二砷诱导膀胱癌BIU-87细胞凋亡作用的研究

目的 探讨三氧化二砷 (As2 O3 )诱导膀胱癌BIU 87细胞凋亡作用。方法 应用倒置相差显微镜、透射电子显微镜、自动酶标仪、细胞免疫组化法 ,分别对不同浓度加药组及对照组BIU 87细胞的形态学改变 ,细胞的存活及Bcl 2、Bax蛋白的表达进行观察和测定。结果 生长曲线显示 ,18.8μg ml,37.6 μg ml和 94.0 μg mlAs2 O3 均能抑制膀胱癌BIU 87细胞的生长增殖。透射电镜观察 ,膀胱癌细胞表面的突起减少或脱失 ;部分细胞核染色质聚集 ,边移 ;线粒体膜结构模糊不清。细胞免疫组化法测定Bcl 2、Bax蛋白的表达均有变化 ,与对照组细胞相比 ,18.8μg ml,37.6 μg mlAs2 O3 组Bcl 2和Bax蛋白表达率均升高。结论 三氧化二砷不仅抑制膀胱癌BIU 87细胞增殖 ,而且诱导细胞凋亡。

冬凌草甲素对人膀胱癌细胞株BIU-87的生长抑制作用及机制探讨

目的观察冬凌草甲素(ORI)对膀胱癌细胞BIU-87的生长抑制作用并探讨其作用机制。方法用MTT法检测ORI作用后BIU-87的生长抑制情况;用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态;用流式细胞仪检测细胞凋亡;分光光度法检测BIU-87中Caspase-3的活性变化;用端粒酶重复扩增(TRAP)-PCR-银染法检测其端粒酶活性的变化。结果ORI对BIU-87有明显的生长抑制作用,呈时间—效应关系和浓度—效应关系。随着ORI作用时间延长,BIU-87凋亡增加,BIU-87内的Caspase-3活性增加,端粒酶活性逐渐降低。结论ORI对BIU-87有明显的生长抑制作用;其机制可能是通过活化细胞内的Caspase-3和抑制端粒酶活性诱发BIU-87细胞凋亡的。

光动力作用对膀胱癌细胞株BIU-87凋亡发生率的影响

目的 :研究光动力抑癌作用机制。方法 :采用流式细胞仪检测光动力作用后人膀胱癌细胞株BIU -87凋亡发生率。结果 :光动力实验组人膀胱癌细胞株BIU -87凋亡发生率达 2 6.11± 2 .5 9% ,与对照组相比 ,差异非常显著性 (P <0 .0 1)。结论 :光动力作用能有效诱导人膀胱癌细胞株BIU -87的凋亡发生。这可能是其抑癌作用机制之一。

中国人膀胱癌BIU-87细胞导向肽的体外筛选与特异性鉴定

目的:体外差减筛选噬菌体展示环七肽库,获得与中国人膀胱癌BIU-87细胞系高度结合的小分子多肽并鉴定其结合特异性。方法:以中国人膀胱癌BIU-87细胞作为靶细胞,正常人膀胱上皮细胞为吸附细胞,对噬菌体展示环七肽库进行3轮体外差减筛选。ELISA法鉴定与BIU-87细胞呈强阳性结合的噬菌体克隆,对其编码的DNA进行序列测定和同源性分析。化学合成与BIU-87细胞强阳性结合的肽段并制备成FITC标记的荧光探针,流式细胞术、荧光显微镜下鉴定其与BIU-87细胞、正常人膀胱上皮细胞、人前列腺癌PC3M细胞、人肝癌SMMC-7721细胞以及人结肠癌HCT116细胞的特异结合能力。结果:经3轮差减筛选将噬菌体展示环七肽库富集了25倍,阳性率达76%。共获得10个强阳性克隆,DNA共有序列为SISSLTH、MARYMSA、TVRTSAD。BIU-87细胞与小分子荧光探针FITC-SISSLTH的结合率为(80.06±8.78)%,显著高于FITC-MARYMSA的(52.93±7.28)%、FITC-TVRTSAD的(38.04±7.47%)、FITC-EDRKETA的(1.91±1.37)%和FITC的(9.85±2.9)%(均P<0.01)。FITC-SISSLTH与BIU-87细胞的结合率显著高于与正常人膀胱上皮细胞、人前列腺癌PC3M细胞、人肝癌SMMC-7721细胞和结肠癌HCT116细胞的结合率[(80.06±8.78)%vs(13.89±1.97)%,(8.13±2.85)%,(27.00±2.87)%,(2.33±1.75)%;均P<0.01]。结论:噬菌体展示环七肽库经3轮体外差减筛选获得高效结合BIU-87细胞的导向肽SISSLTH,具有良好的结合特异性。

热疗对膀胱癌细胞BIU-87/HCPT耐药相关基因的影响

目的观察热疗对耐羟基喜树碱膀胱癌细胞株BIU-87/HCPT多药耐药的逆转作用,并探讨其逆转肿瘤多药耐药的机制。方法不同温度条件下热疗、化疗、热疗联合化疗处理耐药膀胱癌细胞株BIU-87/HCPT后,用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡、P-gp、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、谷胱甘肽硫-转移酶π(GST-π)和survivin表达的变化。结果热疗对BIU-87/HCPT细胞具有抑制作用,呈温度依赖性且在43℃时最强。热疗可显著增加羟基喜树碱对BIU-87/HCPT细胞的抑制率,作用呈温度依赖性,热疗明显增加化疗的作用。热疗联合化疗明显减少P-gp、MRP1、GST-π和survivin的表达并呈温度依赖性。结论热疗可促进膀胱癌细胞株BIU-87/HCPT凋亡,增强化疗药物作用,部分逆转膀胱癌细胞的耐药性,减少P-gp、MRP1、GST-π和survivin的表达。

三氧化二砷抑制人膀胱癌细胞BIU-87体外生长的实验研究

目的 :观察三氧化二砷 (As2 O3)对人膀胱癌细胞的生长抑制作用 ,并探讨其机制。方法 :采用 MTT法检测不同浓度的 As2 O3对人膀胱癌细胞株 BIU- 87的生长抑制率 ,原位末端转移酶标记技术检测细胞凋亡 ,SABC免疫组织化分析 BIU- 87细胞中 bcl- 2的表达。结果 :As2 O3可有效地抑制 BIU- 87细胞生长 ,具有时间、浓度依赖性特点 ;经药物作用后 ,膀胱癌凋亡细胞明显增多 ,凋亡率随作用时间的延长而增高 ,BIU- 87细胞中的bcl- 2表达显著降低。结论 :As2 O3可显著抑制膀胱癌细胞生长 ;通过下调 bcl- 2基因表达诱导细胞凋亡是其作用机制之一。

胃液、稀盐酸、阿霉素对BIU-87细胞系细胞凋亡的影响

目的 :探讨胃代膀胱术抑制膀胱肿瘤复发的机制。方法 :采用HE染色、荧光染色、DNA电泳、流式细胞术等技术 ,观察了胃液、稀盐酸、阿霉素对膀胱癌细胞系BIU 87细胞凋亡的影响。结果 :发现胃液能诱导体外培养的膀胱癌细胞凋亡 ,细胞形态学观察凋亡细胞数增多 ,DNA电泳出现梯状电泳带 ,流式细胞术可见凋亡峰 ,胃液组细胞凋亡率为 8.0 9% ,与阿霉素组 (4 2 .74% )和无药培养液组 (6 .71% )比较差异有高度显著性 (P <0 .0 1) ,与稀盐酸组 (7.2 6 % )比较差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 :胃液作为一种诱导膀胱癌细胞系细胞凋亡的因子 ,可能在胃代膀胱术中起到抑制膀胱肿瘤复发的作用。

温热与冬凌草液对人膀胱癌BIU-87细胞体外凋亡的影响

目的:探讨温热和冬凌草液对体外培养的人膀胱癌BIU-87细胞体外凋亡的影响。方法:通过对体外培养的BIU-87细胞进行加温(37℃、41.5℃、43.5℃)和冬凌草液(0g/L、0.15g/L、0.3g/L、0.6g/L、1.2g/L、2.4g/L)处理,采用形态学和流式细胞术观察温热和冬凌草液诱导的细胞凋亡效应,采用MTT法检测冬凌草作用后细胞的生长抑制率。结果:冬凌草液对BIU-87细胞具有明显的抑制生长作用。形态学观察到实验组中大量具有凋亡特征的细胞。流式细胞仪定量分析显示,随着冬凌草液浓度的增加和温度的升高,BIU-87细胞凋亡率亦呈升高趋势(P<0.05)。结论:温热和冬凌草液具有协同诱导人膀胱癌BIU-87细胞凋亡的作用。

膜联蛋白Ⅱ反义寡核苷酸对人膀胱癌BIU-87细胞膜联蛋白Ⅱ表达及细胞侵袭力的影响

目的探讨膜联蛋白Ⅱ(AnnexinⅡ)反义寡核苷酸(ASODN)对膀胱癌BIU-87细胞AnnexinⅡ基因表达及侵袭力的影响。方法设计合成AnnexinⅡASODN,采用脂质体将低、中及高浓度(6、12及18μmol/L)的AnnexinⅡASODNs分别转染BIU-87细胞24、48及72 h,同时设空白对照组(不转染)。采用免疫细胞化学与原位杂交法分别检测各组细胞中AnnexinⅡ蛋白与m RNA的表达;采用MTT法检测细胞增殖情况,计算细胞生长抑制率,采用Boyden chamber侵袭实验检测高浓度转染72 h细胞侵袭力情况。结果与空白对照组相比,各转染组细胞AnnexinⅡ蛋白和m RNA的表达均减弱,且差异均有统计学意义(P<0.05),且AnnexinⅡ蛋白及m RNA的表达随AnnexinⅡASODN浓度的增加及转染时间的延而减弱(P<0.05);AnnexinⅡASODN转染组细胞生长抑制率明显增加(P<0.05);细胞穿越Matrigel的细胞数交空白组减少,且差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 AnnexinⅡASODN可有效抑制膀胱癌BIU-87细胞AnnexinⅡ蛋白及m RNA的表达,抑制BIU-87细胞的生长及侵袭力。

PBK/TOPK表达对膀胱癌BIU-87细胞增殖及迁移能力的影响

目的探讨PDZ连接激酶/T-LAK细胞源蛋白激酶(PDZ-binding kinase/T-LAK cell-originated protein kinase,PBK/TOPK)在膀胱癌中的表达及其表达对BIU-87细胞增殖及迁移能力的影响。方法采用实时定量PCR及免疫印迹试验检测40例配对膀胱癌及癌旁正常组织中PBK/TOPK的表达,随后,分别干扰及过表达PBK/TOPK在BIU-87细胞中的表达,检测PBK/TOPK表达对细胞增殖及迁移能力的影响。结果实时定量PCR及免疫印迹试验检测结果一致表明PBK/TOPK在膀胱癌中的表达明显高于癌旁正常组织(P<0. 05)。干扰PBK/TOPK表达后,BIU-87细胞的增殖及迁移能力明显下降(P<0. 05);而PBK/TOPK过表达后,BIU-87细胞的增殖及迁移能力明显增强(P<0. 05)。结论 PBK/TOPK在膀胱癌组织中,其表达有助于膀胱癌细胞的增殖及迁移。

三氧化二砷对膀胱癌BIU-87细胞增殖及生存素表达的影响

目的:探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对膀胱癌BIU-87细胞增殖及生存素表达的影响。方法:用As2O3处理膀胱移行细胞癌株BIU-87后,用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞增殖;用细胞流式仪检测细胞周期及凋亡,生存素(Survivin)表达的变化。结果:三氧化二砷作用BIU-87细胞后,细胞生长受到明显的抑制,Survivin的表达明显减少,凋亡细胞百分比较对照组明显增多,且均具有浓度依赖性。结论:As2O3对人膀胱癌细胞株BIU-87有抑制其生长、增殖和诱导凋亡的作用,且呈现浓度依赖性。