BK多瘤病毒microRNA研究进展

BK多瘤病毒(BK polyomavirus,BKV)是一种人群普遍易感的病毒,可导致约10%的肾移植受者进展为病毒性肾病,近年来随着器官移植手术的广泛开展而备受关注。microRNA是一类新近发现的由20~23个核苷酸构成的非编码RNA分子,通过抑制或定向裂解目标mRNA后转录调控基因表达。宿主和病毒都可以编码microRNA,且宿主与病毒间存在microRNA-mRNA相互作用的机制。BKV可表达microRNA,由病毒基因组晚期编码区转录,与病毒早期编码区互补而调控早期基因表达及病毒复制。BKV microRNA在病毒性肾病进程的作用和功能尚不清楚,深入研究BKV microRNA参与宿主和病毒之间的相互作用将对疾病早期诊断、治疗和预防提供新的思路。

中国肾脏移植受者BK多瘤病毒感染临床诊疗指南(2023版)

BK多瘤病毒(BK polyomavirus,BKPyV)感染引起的BK多瘤病毒肾病(BKPyV nephropathy,BKPyVN)是导致移植肾失功的重要原因之一。由于缺乏有效的抗BKPyV药物,目前临床主要通过降低免疫抑制强度来重建机体的抗病毒免疫,但这样亦会增加感染受者发生排斥反应的风险。为了提高肾脏移植受者BKPyV感染相关疾病的临床诊治水平,中华医学会器官移植学分会组织了国内移植、病理、病毒、免疫、检验等相关领域专家,针对BKPyV感染领域相关的病毒生物学、流行病学、临床表现、诊断、预防、治疗、随访、预后等方面的21个临床问题,给出了较为详细的循证推荐意见,以指导临床实践,改善我国肾脏移植受者BKPyV感染相关疾病的临床预后。

学龄后儿童肾移植后BK多瘤病毒感染的影响因素及其预测模型构建

目的分析影响儿童肾移植术后BK多瘤病毒(BKPyV)感染的相关因素,并构建儿童肾移植术后BKPyV感染的预测模型。方法回顾性收集2014年1月至2022年3月在郑州大学第一附属医院接受同种异体肾移植的332例儿童受者的临床资料。依据BKPyV载量水平,分析不同时间点淋巴细胞的动态变化过程。应用Cox回归模型分析筛查BKPyV感染的相关因素,采用受试者工作特征曲线(ROC)评估预测感染模型的灵敏度和特异度。结果332例患儿中,男215例,女117例;移植年龄(12.2±3.9)岁;学龄前(1~5岁)37例,学龄后(6~18岁)295例。对224例患儿尿液与30例患儿血液样本的BKPyV载量检测结果显示,学龄前BKPyV尿症9例,BKPyV血症3例;学龄后BKPyV尿症76例,BKPyV血症14例。多因素Cox回归模型分析显示,较高体质指数(HR=1.105,95%CI:1.020~1.197)、抗人胸腺细胞免疫球蛋白应用(HR=2.196,95%CI:1.335~3.613)、较高他克莫司浓度(HR=2.484,95%CI:1.298~4.753)、较高自然杀伤(NK)细胞计数(HR=1.193,95%CI:1.009~1.411)、较高CD14^(++)CD16^(-)细胞计数(HR=1.096,95%CI:1.024~1.173)是学龄后儿童BKPyV尿症发生的危险因素;移植肾功能延迟恢复(HR=4.993,95%CI:1.555~16.038)、急性排斥反应(HR=6.021,95%CI:1.930~18.787)、较高CD14^(++)CD16^(-)细胞计数(HR=1.227,95%CI:1.081~1.392)是学龄后儿童BKPyV血症发生的危险因素。ROC曲线分析结果显示,联合体质指数、免疫诱导用药、他克莫司浓度、NK细胞计数、CD14^(++)CD16^(-)细胞计数预测学龄后儿童肾移植术后0.5、1、2、5年BKPyV尿症发生的曲线下面积(AUC)分别为0.712(95%CI:0.626~0.798)、0.708(95%CI:0.612~0.804)、0.754(95%CI:0.668~0.840)和0.767(95%CI:0.685~0.849),预测模型的灵敏度和特异度分别为64.9%、61.4%、61.6%、55.8%和70.9%、72.4%、76.0%、84.0%。联合移植肾功能延迟恢复、急性排斥反应、CD14^(++)CD16^(-)细胞计数预测学龄后儿童肾移植术后0.5、1、2、5年BKPyV血症发生的AUC分别为0.791(95%CI:0.631~0.951)、0.744(95%CI:0.547~0.936)、0.786(95%CI:0.629~0.946)和0.812(95%CI:0.672~0.948),预测模型的灵敏度和特异度分别为76.1%、67.1%、75.0%、77.9%和88.9%、89.0%、89.9%、88.0%。结论术后CD14^(++)CD16^(-)细胞水平可作为学龄后儿童肾移植后BKPyV感染的预测因子。联合体质指数、免疫诱导用药、他克莫司浓度、NK细胞计数、CD14^(++)CD16^(-)细胞计数可预测学龄后儿童肾移植术后BKPyV尿症发生;联合移植肾功能延迟恢复、急性排斥反应、CD14^(++)CD16^(-)细胞计数可预测学龄后儿童肾移植术后BKPyV血症发生。

HIV感染者尿JC多瘤病毒与肾功能关系5年随访分析

目的探讨HIV感染者尿液中JC多瘤病毒(JC polyomavirus,JCV)和BK多瘤病毒(BK polyomavirus,BKV)的阳性率,评估长期随访尿JCV阳性与肾功能及淋巴细胞计数的关系。方法纳入杭州市西溪医院感染二科门诊随访的HIV-1阳性的感染者共180例。收集其尿液标本,进行JCV和BKV检测。回顾性并持续性随访收集患者抗病毒治疗(antiretroviral therapy,ART)前基线及随访1、2、3、4、5年的肾功能及CD4^(+)细胞计数等。结果180例HIV-1阳性感染者尿液中JCV的检出率为25.55%(46/180),BKV的检出率为1.67%(3/180)。患者ART前基线尿JCV阳性组总淋巴细胞数为1699.62±790.44个/微升,小于尿JCV阴性组总淋巴细胞数(2113.59±832.73个/微升),差异有统计学意义(P=0.022)。在启动ART随访中,尿JCV阳性组血肌酐水平低于尿JCV阴性组。随访第2年时,尿JCV阳性组血肌酐水平为70.00(64.00,77.00)μmol/L,小于尿JCV阴性组[76.00(67.00,85.00)μmol/L],差异有统计学意义(P=0.023)。随访第2年时,尿JCV阳性组肾小球滤过率(glomerular filtration rate,GFR)为118.00(106.25,133.75)ml/min,大于尿JCV阴性组[113.00(97.00,128.00)ml/min],差异有统计学意义(P=0.045)。随访第4年时,尿JCV阳性组血肌酐水平为70.34±14.98μmol/L,小于尿JCV阴性组(76.6±14.45μmol/L),差异有统计学意义(P=0.023)。结论HIV-1感染者中尿液中JCV和JCV的检出率与总淋巴细胞水平呈负相关。在HIV-1感染者中,尿JCV阳性对肾脏有保护性作用,尿JCV阴性可作为早期预判HIV患者肾功能损害的指标。

自身淬灭探针荧光定量PCR检测BK多瘤病毒方法的建立与评价

目的利用自身淬灭探针技术建立一种敏感、特异、快速、价廉的BK多瘤病毒（BKV）荧光定量PCR检测方法。方法构建重组质粒pGEM-11Zf-BK作为标准品，自行设计自身淬灭探针，优化定量PCR体系，并进行方法学评价及初步临床应用。结果成功构建了重组质粒pGEM-11Zf-BK，建立自身淬灭探针荧光定量PCR方法，其线性检测范围为10^3～10^9拷贝／ml；灵敏度为1000拷贝／ml；重复性：高拷贝样品的天间CV为3．06％，批内CV为1．49％，批间CV为3．27％；低拷贝样品的天间CV为2．55％，批内CV为0．65％，批间CV为3．36o．4，特异性为100．00％；用该方法检测52例肾移植受者的血、尿标本，结果发现肾移植受者血、尿BKVDNA的阳性率明显高于健康对照者，分别为15．38％、32．69％，尿BKVDNA的载量明显高于血BKVDNA的载量（P〈0．05）。结论首次建立了以自身淬灭探针技术为平台的BKV荧光定量PCR检测方法，该方法灵敏、特异，快速；该研究对应用自身淬灭探针技术开发其他病原体检测试剂有一定的参考价值。

BK多瘤病毒与移植受者新发泌尿系肿瘤相关性的研究现状

BK多瘤病毒(BK polyomavirus,BKV)是潜伏在人体中的一种多瘤病毒,在免疫低下人群尤其是移植受者中,BKV再激活率高,导致移植受者出现BKV尿症/血症、输尿管狭窄、BKV相关性肾病等并发症。近年来,不断出现BKV相关移植后新发泌尿系肿瘤的病例,BKV的潜在致癌性开始得到关注。本文综述了目前BKV感染与移植后新发泌尿系肿瘤的相关性研究及最新进展。

人多瘤病毒BK株VP1的C端阳电荷残基对病毒样颗粒形成的影响

VP1是人多瘤病毒BK株的主要结构蛋白,使用重组杆状病毒表达系统在体外表达 VP1 可以形成病毒样颗粒(VLP)。为了探讨VP1的C末端阳电荷残基R 281, R 285, K 288, R 290, R 292, K 293, R 294,和 K297 对VLP形成和其结合DNA的影响,我们分别改变将阳电荷残基变成丙氨酸,然后表达 VP1 蛋白。结果发现用丙氨酸替代K 288,R 290,R 292,K 293,R 294后仍能形成VLP, 但与野毒株相比,在 VLP分泌以及衣壳蛋白与细胞DNA的结合方面有差异。有趣的是,R 281被丙氨酸取代后仅在细胞中形成少量的 VLP,而 R 285 被丙氨酸取代后不能形成VLP。该研究证实阳电荷氨基酸残基 R 281 和 R 285 是形成 VLP所必须的,K 288、R 290、R 292、K 293、R 294和K 297则影响VLP和DNA的结合。

多瘤病毒BK DNA监测在肾移植中的临床应用

[目的]探索建立一个简单便捷的血浆多瘤病毒Polyomavirus BK(BKV)感染的筛选方法并探讨其在肾移植中的临床应用。[方法]用PCR方法对40例行肾移植术的患者和15个正常人血浆中BKV DNA进行扩增检测和序列分析。[结果]扩增出的目的基因片段长度为181 bp,扩增结果与预期的片段大小一致。BKV的基因序列与GenBank中病毒的保守序列98%同源。15例正常人中BKV检测结果全部阴性;40例肾移植患者中有6例检测结果阳性,阳性率为15.0%,其中临床确诊为多瘤病毒相关性肾病(PAN)1例,发生率为2.5%。[结果]PCR方法检测血浆BKV DNA是反映肾移植患者术后感染多瘤病毒或体内多瘤病毒被激活并复制及评价肾病高危性的一个良好指标。

多瘤病毒BK的监测在肾移植中的应用

目的探讨血浆中多瘤病毒BK(BKV)检测在肾移植后患者发生BKV感染以及多瘤病毒相关性肾病(PAN)中的诊断价值。方法对80例行同种异体肾移植术的患者和20例健康对照血浆中BKV DNA进行聚合酶链反应检测和序列分析,对检测结果进行对比分析。结果扩增出的目的DNA片段长度为181bp,与预期的病毒基因片段大小一致,测序结果与该病毒大T抗原的保守区域完全同源。80例肾移植后患者BKV检测为阳性12例(15.0%),最终发展为PAN的患者2例(2.5%);20例健康人BKV检测结果全部为阴性。结论血浆BKV DNA监测是反映肾移植后患者是否发生病毒复制感染,并评价其患肾病的高危性的一个良好指征。对肾移植后患者发生PAN的确诊,需要结合临床上各种因素来综合分析。

广西瑶族与汉族人多瘤病毒感染率的调查研究

目的研究广西瑶族与汉族健康成人外周血白细胞(PBLs)中人多瘤病毒(BKV)感染的发生率。方法采集广西瑶族及汉族健康人外周血标本各500份,提取淋巴细胞基因组DNA,用巢式PCR方法扩增BKV的保守区编码序列,统计分析不同民族、年龄、性别组BKV-DNA检出率。结果 1 000份健康人PBLs样品中BKV感染的发生率为61.3%,不同民族、性别、年龄组之间无显著性差异(P>0.05)。结论 BKV在广西瑶族及汉族健康人PBLs中存在较高的感染率,本研究证实了PBLs是BKV在体内的潜伏细胞及传播载体,应加强对BKV条件致病性的认识,积极防治、减少BKV相关的移植肾病(BKVN)的发生率。

聚合酶链反应检测多瘤病毒性肾病

BK多瘤病毒(BK病毒)的再活化被认为是同种(异体)肾移植患者严重肾功能障碍的起因之一。患者肾移植物标本的活组织检查可显示BK病毒的广泛复制、肾小管和收集管的坏死以及不同程度的间质炎症。

广西苗族健康人外周血淋巴细胞中BKV-DNA的研究

目的了解广西苗族健康人多瘤病毒(BKV)的感染情况,为防治BKV相关性肾病(BKVN)提供理论依据。方法采集广西苗族和汉族健康人外周血标本各500例,提取外周血淋巴细胞(PBLs)基因组DNA,用巢式PCR方法扩增保守区编码序列,统计分析不同民族BKV-DNA检出率。结果苗族健康人群PBLs样品中BKV-DNA序列检出率为62.00%,汉族人群检出率为59.00%,两民族BKV-DNA检出率差异无统计学意义(P>0.05)。结论BKV在广西苗族及汉族健康人群PBLs中均存在较高感染率。正常人PBLs是BKV在人体内的潜伏靶点及传播工具,应加强对BKV条件致病性的认识,积极防治以减少BKVN的发生率。

肾移植术后尿中多瘤病毒BK的检测及意义

目的探讨尿中多瘤病毒BK(BKV)检测在肾移植后BKV感染中的诊断价值。方法采用聚合酶链反应(PCR)结合测序方法检测61例肾移植后患者尿中BKV DNA,并与30例血液透析患者和30例健康志愿者尿液检测结果对照。结果肾移植组BKV DNA检出率为36.1% (22/61),明显高于血液透析组的13.3%(4/30)(P＜0.05),对照组检测均为阴性(P＜0.05)。1例BKV阳性肾移植患者出现输尿管梗阻。移植组发生排斥反应和未发生排斥反应患者的BKV DNA检出率分别为40.9%(9/22)和33.3%(13/39),P＞0.05；肾功能正常和异常者BKV DNA的检出率分别为36.0%(18/50)和36.4%(4/11),P＞0.05。结论肾移植患者是引起BKV尿的高危人群。肾移植后有无排斥反应史及肾功能正常与否与BKV尿无相关性。尿BKV检测可作为肾移植后BKV相关性输尿管梗阻的鉴别诊断和多瘤病毒相关性肾病的筛选方法。

尿BK病毒载量与干细胞移植后出血性膀胱炎的关系

目的分析BK病毒尿与造血干细胞移植（HSCT）术后迟发性出血性膀胱炎（LOHC）的相关性，探讨BK病毒载量与LOHC发病的关系。方法收集2006年8月至2008年4月113例HSCT患者的晨尿标本，提取病毒DNA，用PCR方法扩增多瘤病毒DNA，以40名健康成人为对照。用实时定量PCR方法检测尿BK病毒阳性患者在LOHC不同时期的尿标本中BK病毒DNA拷贝数。结果113例HSCT患者中22例（19．5％）发生HC，中位发生时间为＋44（＋13～＋114）d，包括1级7例，2级11例，3级3例，4级1例。其中21例（95．5％）LOHC患者尿标本经PCR检出BK病毒，检出率明显高于非LOHC组（31．9％）（P=0．000）。健康对照组均未检出BK病毒。定量PCR检测结果显示，LOHC患者尿BK病毒DNA拷贝数在HC发病前1周的平均水平较初次阳性时有明显上升（10^3拷贝数／μl比10^4拷贝数／μl），在HC发病当周及缓解后1周无明显改变。不同级别LOHC患者在发病前和发病时尿BK病毒DNA拷贝数差异无统计学意义。非LOHC患者尿中BK病毒DNA拷贝数平均水平为10^3～10^4拷贝数／μl，低于LOHC患者。结论BK病毒尿是HSCT后LOHC的重要致病原因。如HSCT患者尿中BK病毒DNA拷贝数呈动态上升并超过10^5拷贝数／μl时可能预示LOHC的发生。

多瘤病毒及其相关的移植肾病

多瘤病毒(polyoma virus)属乳多空病毒科,目前已知13种,其中与人类相关的主要有BK多瘤病毒(BKV)、JC病毒(JCV)和SV 40病毒.多瘤病毒相关的移植肾病(PVN),多数由BKV感染引起,因此常被称为BKV相关的移植肾病(BKVN).BKV于1971年从1例肾移植术后输尿管狭窄的患者体内分离而得.

广西瑶、侗、苗、壮等民族外周血白细胞中BK病毒的研究

目的了解广西瑶、侗、苗、壮等少数民族外周血白细胞中多瘤病毒BKV的感染情况,掌握该区人群BKV的携带情况,阐明BKV在人体内的传播方式。方法于2006年1月-2008年5月采集广西瑶、侗、苗、壮等少数民族及汉族健康人外周血标本各2500份,提取淋巴细胞基因组DNA,用巢式PCR方法扩增BKV的保守区编码序列,统计分析不同少数民族、年龄、性别组BKV-DNA检出率。结果2500份健康人外周血白细胞(PBLs)样品中BKV-DNA序列检出率为60.6%,不同民族、性别、年龄组之间无显著性差异(P>0.05)。结论BKV在广西瑶、侗、苗、壮等少数民族及汉族健康人PBLs中存在较高的感染率,本研究证实了PBLs是BKV在体内的潜伏细胞及传播载体,应加强对BKV条件致病性的认识,积极防治、减少BKV相关性肾病(BKVN)的发生率。

免疫抑制剂咪唑立宾的体外抗BK病毒作用研究

目的:在体外水平上研究咪唑立宾的抗BK多瘤病毒(BKV)功能并初步分析其抑制病毒复制的阶段。方法:本研究采用咪唑立宾的溶剂作为阴性对照,已知具有体外抗BKV活性的西罗莫司作为阳性对照。首先,在不同细胞系中分析咪唑立宾和西罗莫司的半致死浓度。然后,以此为依据设置药物浓度梯度处理细胞,感染BKV后在不同时间点上收集细胞上清液进行荧光定量PCR检测BKV的复制曲线,对细胞做免疫荧光检测BKV感染率。最后,用BKV单循环假病毒感染不同药物浓度处理的293FT细胞,通过流式细胞仪分析假病毒感染效率,以此判断咪唑立宾对BKV感染早期的影响。结果:咪唑立宾与西罗莫司都具有体外抑制BKV感染的作用。与对照组相比,细胞免疫荧光显示BKV的感染率随着咪唑立宾浓度的增加而降低,细胞上清病毒DNA定量检测表明咪唑立宾处理组病毒复制曲线受到明显抑制。西罗莫司对BKV感染水平和复制水平的抑制作用与咪唑立宾类似,本研究中两种药物对BKV感染早期都没有显著影响。结论:咪唑立宾在细胞水平上具有抗BKV活性,且抑制作用并未发生在病毒感染早期阶段。