双歧杆菌C57BL小鼠抗辐射能力的研究

目的探讨双歧杆菌对电离辐射损伤的防护作用。方法选用SPF级C57BL小鼠30只,随机分成3组(每组10只):A组:正常对照组;B组:放射损伤组;C组:双歧处理组,用双歧杆菌菌悬液灌肠28 d后,然后与放射损伤组一同进行60Coγ射线一次性全身照射,形成急性放射损伤。24 h后按不同要求采集标本,对肝组织分别进行SOD和CAT活力及MDA的含量检测;用电镜观察脊神经组织细胞的超微结构;对脾脏组织用RT-PCR检测TLR2 mRNA水平的表达;并对肾脏组织用免疫组化检测bcl-2、NF-κBp65和Cytochrome C的蛋白表达情况。结果双歧杆菌处理组肝组织中SOD和CAT水平明显高于放射损伤组(P<0.01),同时MDA明显低于放射损伤组(P<0.01);电镜结果显示:放射损伤组与双歧处理组的细胞浆、细胞核和线粒体均明显肿胀,双歧处理组同时具有早期凋亡现象;RT-PCR结果显示:双歧处理组TLR2 mRNA的表达明显高于放射损伤组;免疫组化结果显示:双歧处理组Cytochrome C的表达明显优于放射损伤组,而NF-κBp65和bcl-2则相反。结论双歧杆菌可通过清除自由基、抗膜脂质氧化、提高免疫机能和诱导细胞凋亡等方式来降低辐射对小鼠的损伤。双歧杆菌具有一定的抗辐射作用。

C57/BL小鼠TGF-β_1、TNFα在不同照射剂量下的表达及与放射性肺损伤的关系

目的 探讨转化生长因子 β1(TGF β1)及肿瘤坏死因子 α(TNF α)在不同照射剂量下的变动情况及与放射性肺损伤的关系。方法 雄性C5 7/BL小鼠 ,右肺单次照射 15MeV电子线 6Gy或 10Gy ,不同时间处死后取肺组织HE染色 ,同时ELISA法测定血清中TGF β1及TNF α。结果 不同剂量照射后 ,血清TGF β1平均水平 10Gy组较 6Gy组、正常对照组高 ,有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;6Gy组与正常对照组比较无显著性差异 (P >0 .0 5 )。各组间血清TNF α平均水平比较情况同TGF β1。HE染色病理切片不同时段 (照射后 36h～ 4 0d)显示 ,10Gy照射组肺照射区域内出现进行性加重的炎症改变 ,但并不严重 ;6Gy组受照肺组织与正常肺组织基本无差别。结论 放射性肺损伤的原因是多因素的。血清中TGF β1、TNF α的变化情况与照射剂量关系密切。

不同周龄组的C57BL小鼠多巴胺神经元对MPTP敏感性的对比及其机制探讨

目的:观察不同周龄的C57BL小鼠多巴胺神经元对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)的药物敏感性差异,探讨其差异的机制是否与热休克蛋白70(HSP70)不同表达相关。方法:将4～6周龄及15～17周龄的C57BL小鼠给予MPTP造成帕金森病模型,同时设立对照组。采用高效液相法检测纹状体内多巴胺(DA)、3,4-二羟苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA)的含量,免疫组化法观察黑质中酪胺酸羟化酶(TH)阳性细胞及HSP70的表达。结果:15～17周龄小鼠在MPTP造模后纹状体中DA、DOPAC、HVA的含量,黑质中的TH阳性细胞数和HSP70的表达含量均明显低于4～6周龄模型组(P<0.05),而两个周龄的对照组的各项指标均无明显差异。结论:15～17周龄的C57BL小鼠对于MPTP的敏感性明显高于4～6周龄小鼠,HSP70的表达量不同可能是造成敏感性差异的原因之一。

痹痛灵颗粒对致炎C_(57)BL小鼠血清细胞黏附分子-1表达的影响

目的观察中药复方痹痛灵颗粒对致炎C57BL小鼠血清可溶性细胞黏附分子-1(sICAM-1)表达的影响。方法给正常C57BL小鼠灌胃痹痛灵颗粒7日,末次给药后1 h,右耳正反两面均匀涂抹巴豆油合剂致炎,4 h后摘眼球取血,制备血清,用ELISA法测定sICAM-1水平。结果痹痛灵颗粒对C57BL小鼠血清sICAM-1的升高具有抑制作用,但仅痹痛灵颗粒大剂量组与模型对照组比较有显著性差异(P<0.05)。结论痹痛灵颗粒抑制血清sICAM-1的升高,是其调节免疫功能,治疗类风湿关节炎(RA)的重要机制之一。

血脂异常对C57BL小鼠巩膜顺应性的影响

目的探讨血脂异常对C57BL小鼠巩膜顺应性的影响。方法选用3月和8月龄C57BL雄性小鼠,按体重随机分为3组。3月龄和8月龄普食组各12只,8月龄高脂组18只。3月龄组喂养1周后处死;8月龄组喂养22周后处死;8月龄高脂组喂养4周后随机取6只处死,检测血清胆固醇(TC)和低密度脂蛋白(LDL-C),其余12只喂养至22周处死。各组动物检测血脂,同时取主动脉和眼球标本,经油红“O”、苦味酸天狼腥红等染色,用偏振光显微镜等进行组织学观察。结果造模4周后8月龄高脂组的TC和LDL-C已明显升高,与3月龄普食组比较有极显著性差异(P<0·01),确认血脂异常的动物模型。8月龄高脂组血脂指标高于3月龄、8月龄普食组,比较有显著性差异(P<0·01)。发现8月龄高脂组的主动脉和巩膜油红“O”染色有红色脂滴着染。C57BL小鼠巩膜胶原纤维主要是Ⅰ型和Ⅲ型。对Ⅰ型和Ⅲ胶原纤维的平均光密度、积分光密度、厚度及Ⅲ型/Ⅰ型胶原(ColⅢ/ColⅠ)面积比指标的检测显示,3组间Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维的平均光密度无差异(P>0·05),而积分光密度、厚度及ColⅢ/ColⅠ面积比均有差异(P<0·01或P<0·05)。结论血脂异常引起巩膜发生类似于动脉粥样硬化的胶原纤维Ⅲ型增生,是巩膜顺应性降低的前奏。

经MPTP处理的C57BL小鼠不同脑区多巴胺转运体与甘氨酸受体基因的表达

1 甲基 4 苯基 1,2 ,3,6 四氢吡啶 (MPTP)对C57BL小鼠黑质多巴胺能神经元具有选择性的毒性作用 ,导致小鼠出现类似帕金森病的症状。利用抑制消减杂交技术分析MPTP对小鼠黑质基因表达的影响 ,获得了一系列差异表达基因片段 ,其中包括多巴胺转运体与甘氨酸受体两种与神经递质的功能与周转密切相关的基因。通过Northern杂交发现 ,这两种基因的表达在给药组小鼠的黑质中均下降 ,而在纹状体中多巴胺转运体基因的表达没有明显变化 ,甘氨酸受体基因的表达则有一定程度的增加。

利用消减抑制杂交技术构建MPTP诱导的C57BL小鼠全脑差异表达基因文库

本研究旨在构建 1 甲基 4 苯基 1,2 ,3,6 四氢吡啶 (MPTP)诱导的C5 7BL小鼠全脑差异表达基因文库 ,并获取差异表达的表达序列标签。通过MPTP腹腔注射建立C5 7BL小鼠帕金森病模型。利用消减抑制杂交技术建立对照组与实验组差异表达基因文库。自两文库中各随机挑选 2 0个克隆 ,经反Northern杂交证实其中 7个克隆为阳性。同时对上述 4 0个克隆进行序列测定 ,并与已知序列基因库进行同源性比较 ,其中 2 6个新基因片段向Genbank申请了序列号。

C_(57)BL小鼠survivin基因miRNA表达载体的构建

背景:Survivin在多种肿瘤组织中的高表达,具有调节细胞增殖分裂和强大的抗凋亡功能。目的:利用RNA干扰技术,构建具有特异性阻断C57BL小鼠survivin基因的微小RNA(micro RNA,miRNA)表达载体。设计、时间及地点:单一样本观察,于2008-06/11在重庆医科大学附属第一医院神经内科实验中心完成。材料:环形pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR和BLOCK-iTTM PolII miR RNA干扰Expression Vector Kit with EmGFP为Invitrogen公司产品;DH5a大肠杆菌为实验室保存;xhoI和BamHI酶、壮观霉素均为上海生工生物工程有限公司产品。方法:应用设计软件在C57BL小鼠survivin基因的mRNA上寻找特异性的短核苷酸序列,并设计合成4对寡核苷酸序列,经退火后形成双链DNA片段,采用基因克隆技术,将其克隆到pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR的载体中,转化DH5a大肠杆菌,挑单菌落种于含有壮观霉素LB液体培养基中,提取质粒。主要观察指标:应用测序法和琼脂糖电泳检测对重组体进行鉴定。结果:测序结果显示插入片段与线性载体连接正确,无碱基突变、缺失、插入等异常。双酶切处理pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR重组质粒结果显示片段大小与预期相符。结论:实验结果表明成功构建了C57BL小鼠survivin基因的微小RNA表达载体。

吡格列酮提高C57bl小鼠胆盐肠肝循环相关基因的表达

目的 :观察吡格列酮对小鼠胆盐肠肝循环转运相关基因的表达影响。方法 :将16只小鼠随机分为两组:对照组(normal control,NC)、药物组(medicine,M),分别给予普通饮食、普通饮食加吡格列酮(pioglitazone)灌胃,喂养10周后处死小鼠取血、胆汁、小鼠肝脏、小肠组织,生化分析仪分析小鼠血样代谢指标,q RT-PCR技术检测各组小鼠组织内胆盐肠肝循环相关基因的表达。结果:M组小鼠胆汁中胆盐含量NC组显著升高,肝脏法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)及胆盐合成相关基因胆固醇7羟化酶(cytochrome P450 enzyme7 A1,CYP7A1)、胆固醇27羟化酶(CYP7A1cytochrome P450 enzyme27 A1,CYP27A1)以及胆盐转运基因胆盐输出泵基因(bile salt export pump,BSEP)、牛黄胆酸钠转运基因(sodium/taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP)的表达较NC组也明显升高(P<0.01)。肝脏组织免疫组化证实了M组BSEP在蛋白层面表达升高。M组小肠组织内胆盐转运基因顶膜钠离子依赖性胆汁酸转运体(apical sodium dependent bile acid transporter,ASBT)的表达较NC组明显升高(P<0.01)。结论 :吡格列酮能够诱导胆盐合成相关基因的表达,并上调胆盐在肝脏以及小肠内的转运相关基因的表达,在转录水平参与胆盐肠肝循环的调控。

枸杞多糖对C57BL/6J骨质疏松症小鼠的早期防治

目的探讨枸杞多糖(LBP)对C57BL/6J骨质疏松症小鼠的早期防治作用。方法选用12周C57BL/6J雌鼠,采用双侧卵巢完全切除术制备骨质疏松症模型,假手术组切除卵巢周围脂肪组织,术后1周,选取手术成功的小鼠分为假手术组、模型组和LBP组。LBP组给予灌胃LBP 0.1 g·kg^(-1),1次/d,连续12周,假手术组和模型组灌胃等量蒸馏水。酶联免疫吸附(ELISA)法检测小鼠血清中雌二醇(E_(2))含量;生物化学方法检测血清氧化应激指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量;Micro CT扫描胫骨微观结构,观察骨小梁厚度(Tb·Th)、骨表面积和骨体积之比(BS/BV)、骨小梁分离度(Tb·Sp)、骨密度(BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨体积(BV)的变化。结果与假手术组小鼠比较,模型组小鼠的体质量增长率升高、子宫脏器系数明显减小、血清E_(2)含量下降、血清氧化应激指标MDA含量增高、SOD活力降低(P均<0.01);与模型组小鼠比较,LBP组小鼠子宫脏器系数、血清E_(2)含量差异均无统计学意义(P均>0.05),但体质量增长率下降、血清MDA含量降低、SOD活力增加(P均<0.01),骨组织BMD、BV升高(P均<0.05),Tb·Th及BV/TV均显著升高(P均<0.01)。胫骨三维重建图显示,模型组骨皮质变薄,呈现骨质疏松改变,骨小梁数量减少,排列紊乱,髓腔明显扩大;LBP组较模型组骨小梁数量增加。结论LBP可能通过调控早期骨质疏松症小鼠的氧化应激反应,发挥改善骨质疏松的作用。

C57BL/6J小鼠与昆明小鼠NIAAA法酒精性肝病造模效果的比较

为了对比C57BL/6J小鼠和昆明小鼠酒精性肝病模型建造效果及建模完成后续肝脏生化指标变化情况,为酒精性肝病的治疗研究提供基础依据,试验选择雌性C57BL/6J小鼠和昆明小鼠各36只,随机分为对照组(液体饲料+麦芽糊精)、建模16 d组与建模19 d组(液体饲料+酒精,n=12)。利用NIAAA法建造酒精性肝病小鼠模型,并分别于建模第16 d、建模第19 d取其血清及肝组织进行生化指标检测及病理切片观察。结果显示,C57BL/6J小鼠建模16 d组和建模19 d组与昆明小鼠建模16 d组的小鼠血清ALT、AST含量,肝脏MDA、TG含量均分别显著高于其对照组小鼠(P<0.05);而血清ALB含量、肝脏SOD活力显著低于其对照组小鼠(P<0.05)。C57BL/6J建模16 d组和建模19 d组小鼠的肝脏GSH含量和肝脏系数显著高于其对照组小鼠(P<0.05),但昆明小鼠建模19 d组除了肝脏SOD活力显著低于其对照组小鼠(P<0.05),其他指标均与其对照组小鼠无显著差异。病理切片结果表明,与对照组相比,建模16 d组2种小鼠肝细胞排列紊乱,肝细胞索断裂,肝细胞出现炎性浸润和脂肪液滴。C57BL/6J小鼠建模19 d组肝组织仍呈现病变,而昆明小鼠建模19 d组肝细胞已逐渐恢复正常排列。与昆明小鼠相比,C57BL/6J小鼠对于酒精的肝脏氧化应激损伤更严重,酒精性肝病模型更稳定。

C57BL/6J小鼠背景的CD19嵌合抗原受体T细胞的制备及优化

目的:探索C57BL/6J小鼠CD3^(+)T细胞体外刺激条件、最佳培养和感染时间,以期提高CD19嵌合抗原受体T细胞(m CD19 CAR-T)的感染效率。方法:将纯化的C57BL/6J小鼠CD3^(+)T细胞在包被CD3/CD28抗体(anti-CD3/CD28 coated)、包被CD3抗体+可溶性CD28抗体(anti-CD3 coated+soluble anti-CD28)和包被CD3抗体(anti-CD3 coated)3种不同条件下分别刺激12 h和24 h,后续培养24 h、48 h和72 h并记录细胞克隆数。在上述3种条件下分别刺激C57BL/6J小鼠CD3^(+)T细胞12、24和36 h,然后加入白介素(IL)-2(100 U/ml),镜下记录培养24 h、48 h和72 h的细胞克隆数;此条件下取刺激24 h的CD3^(+)T细胞,感染m CD19 CAR-T逆转录病毒,制备m CD19 CAR-T细胞,流式检测48 h时3组中GFP+CAR-T细胞的百分率。结果:利用获得BALB/c小鼠m CD19 CAR-T细胞的最优化条件,制备C57BL/6J小鼠的m CD19 CAR-T细胞感染效率仅5.23%;anti-CD3^(+)soluble anti-CD28 coated刺激C57BL/6J小鼠CD3^(+)T细胞24 h,终止刺激继续培养至48 h时细胞克隆数最高;在上述条件刺激24 h后加入IL-2培养48 h,anti-CD3^(+)soluble anti-CD28 coated组T细胞增殖克隆数量显著增加,且CAR-T细胞感染效率为17.63%±4.17%。结论:C57BL/6J小鼠来源T细胞制备CAR-T细胞的最佳条件与BABL/c小鼠不同;anti-CD3^(+)soluble anti-CD28 coated+IL-2刺激条件下诱导的T细胞感染逆转录病毒后可获得最高效率的m CD19 CAR-T细胞。

NADPH氧化酶4在1型糖尿病模型小鼠角膜病变中的致病作用及其机制

目的探讨还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶4(Nox4)在1型DM模型小鼠角膜病变中的致病作用及其可能机制。方法选择Nox4基因敲除(Nox4^(-/-))纯合子雄性小鼠40只,以鼠龄、性别匹配的野生型C57BL/6(Nox4^(+/+))小鼠120只作为对照。采用随机数字表法分别将2种小鼠随机分为DM组和非DM组,DM组小鼠采用链脲佐菌素腹腔内注射法构建1型DM模型。采用随机数字表法分别将Nox4^(+/+)小鼠DM组和非DM组分为普通饲料喂养小鼠和添加Nox4抑制剂GKT137831(GKT)饲料喂养小鼠。于DM造模后第16周采用酚红棉线法检测各组小鼠泪液分泌量;采用荧光素钠染色评分法评估角膜上皮完整性;采用激光扫描共聚焦显微镜观察角膜基质层神经纤维密度变化;采用CellROX荧光探针检测角膜上皮中活性氧簇(ROS)含量;采用免疫荧光染色法检测小鼠角膜上皮中E-Cadherin蛋白和核因子-κB(NF-κB)蛋白表达变化;采用角膜铺片TUBB3染色法检测角膜中央区神经纤维密度。结果Nox4^(+/+)小鼠DM组和非DM组泪液分泌量分别为(2.40±1.18)和(5.30±1.02)mm/min,差异有统计学意义(P<0.01);Nox4^(-/-)小鼠DM组泪液分泌量为(4.19±0.63)mm/min,明显多于Nox4^(+/+)小鼠DM组,差异有统计学意义(P<0.05);普通饲料喂养小鼠与GKT添加饲料喂养小鼠DM组泪液分泌量分别为(2.23±0.83)和(4.02±0.71)mm/min,差异有统计学意义(P<0.01)。与Nox4^(+/+)小鼠非DM组比较,Nox4^(+/+)小鼠DM组角膜荧光素染色评分显著升高,角膜神经纤维密度显著降低,角膜上皮中ROS荧光强度明显增强,E-Cadherin蛋白表达荧光强度减弱,NF-κB蛋白表达荧光强度增强。Nox4^(-/-)或GKT添加饲料喂养小鼠DM组与非DM组比较角膜上皮中ROS荧光增强,E-Cadherin蛋白表达荧光减弱。Nox4^(-/-)和GKT添加饲料喂养小鼠DM组角膜上皮细胞中NF-κB蛋白荧光强度均较弱,与非DM组强度一致。角膜铺片免疫荧光染色显示,Nox4^(+/+)小鼠DM组中TUBB3染色的神经纤维密度明显低于非DM组,Nox4^(-/-)或GKT添加饲料喂养小鼠DM组角膜基质层神经纤维与非DM组比较无明显减少。结论Nox4参与了糖尿病角膜病变的致病过程,其机制可能与氧化应激诱导ROS产物聚集,激活NF-κB介导的炎症反应有关。

小鼠白癜风疾病模型的构建及初步研究

目的比较氢醌乳膏和莫诺苯宗乳膏诱导野生型C57BL/6J小鼠产生白癜风样表型的作用,构建组织病理学相似度高、脱色效果持久稳定且成本低、易操作的白癜风样小鼠模型,为选择白癜风疾病动物模型以研究人类白癜风疾病的发病机制以及药物治疗效果、药物作用机制提供依据。方法将30只C57BL/6J小鼠随机分为3组,每组10只。3组小鼠于背部相同部位去毛后,对照组涂抹乳膏基质,莫诺苯宗组涂抹40%莫诺苯宗乳膏,氢醌组涂抹2.5%氢醌乳膏,均1次/d,建模周期为50 d。肉眼观察造模部位皮肤变化;建模结束后处死各组小鼠,取病变部位皮肤组织,进行酪氨酸酶(TYR)免疫荧光染色观察;摘眼球取血,ELISA法检测血清中TYR、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平。结果莫诺苯宗组和氢醌组小鼠均出现明显皮肤脱色,TYR表达平均光密度值明显降低。莫诺苯宗组和氢醌组小鼠血清TYR水平均明显低于对照组(P均<0.05),莫诺苯宗组和氢醌组比较差异无统计学意义(P>0.05);氢醌组小鼠血清IFN-γ、MMP-9水平均明显高于对照组和莫诺苯宗组(P均<0.05),血清TNF-α水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);莫诺苯宗组小鼠血清TNF-α水平明显高于对照组(P均<0.05),血清IFN-γ、MMP-9水平与对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论2.5%氢醌乳膏和40%莫诺苯宗乳膏涂抹法均可成功建立野生型C57BL/6J小鼠白癜风模型,其中2.5%氢醌乳膏更易诱导建立白癜风表观模型。

枸杞多糖对去势C57BL/6J小鼠小脑的神经保护作用

目的观察枸杞多糖对去势C57BL/6J小鼠小脑的神经保护和认知功能改善作用。方法选用12周龄C57BL/6J雌鼠,随机分为假手术组、模型组和枸杞多糖(LBP)干预组。12周龄雌鼠去势后1周,LBP干预组给予灌胃枸杞多糖0.1 g·kg^(-1),每天1次,连续12周,假手术组和模型组灌胃服用等量蒸馏水。应用旷场实验、新物体识别实验、Morris水迷宫实验检测小鼠焦虑及学习记忆能力;酶联免疫吸附(ELISA)法检测小鼠血清中雌二醇(E2)含量;生物化学方法检测血清及小脑半球氧化应激指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量;蛋白免疫印迹法检测小脑半球胆碱乙酰转移酶(ChAT)及炎性因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的相对表达量。结果去势小鼠LBP干预12周后,与假手术组小鼠比较,模型组小鼠的体质量增加、子宫系数下降、学习记忆能力减弱、血清E2含量下降、血清及小脑半球氧化应激指标MDA含量增高,SOD和GSH-Px活力降低,小脑半球ChAT的表达量下调以及炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达量上调(P均<0.05)。与模型组小鼠比较,LBP干预组小鼠的体质量、子宫系数及血清E2含量差异无统计学意义(P均>0.05),学习记忆能力、氧化应激指标MDA含量,SOD和GSH-Px活力、小脑半球ChAT及炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α的相对表达量均有所改善(P均<0.05)。结论LBP干预可以改善去势C57BL/6J小鼠的认知功能,可能与其对小脑的抗氧化、抗炎及提高ChAT的表达有关。

奥贝胆酸对高脂喂养的C57BL/6J小鼠糖脂稳态的影响

目的研究奥贝胆酸(OCA)对高脂喂养C57BL/6J小鼠糖脂代谢的影响。方法给C57BL/6J小鼠喂高脂饮食(HFD)12周后,将其随机分为模型组(model)和OCA干预组(10 mg/kg,连续灌胃6周),每组10只。喂12周正常饲料的C57BL/6J小鼠作为对照组(control),模型组和对照组灌胃给予0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)。实验期间开展口服葡萄糖耐量和胰岛素耐量实验。实验结束后,测定血清中肝功能相关指标,记录肝脏质量,测定肝脏中脂质相关指标,并对肝脏进行苏木精-伊红(HE)染色;RT-qPCR检测肝脏中脂质代谢相关基因表达。结果糖负荷和注射胰岛素后,模型组各个时间点血糖和曲线下面积(AUC)明显高于对照组(P<0.01),OCA干预组能缓解模型组小鼠糖耐量异常(P<0.05),提高胰岛素敏感性(P<0.05);模型组血清中三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、游离脂肪酸(FFA)、低密度脂蛋白总胆固醇(LDL-C)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平明显高于对照组(P<0.01),高密度脂蛋白总胆固醇(HDL-C)水平显著低于对照组(P<0.01),OCA干预组能显著降低模型组血清中TG、TC、FFA、LDL-C、ALT和AST水平(P<0.01),增加模型组血清中HDL-C含量(P<0.01);模型组肝脏中TG、TC、FFA含量明显高于对照组(P<0.01),OCA干预组能缓解模型组小鼠肝脏脂肪变性(P<0.05);模型组法尼醇X核受体(FXR)/固醇调节元件结合蛋白(SREBP)途径相关基因与对照组相比表达异常(P<0.01),OCA干预组逆转模型组FXR/SREBP途径相关基因表达异常(P<0.05)。结论OCA可能通过调节FXR/SREBP途径改善HFD小鼠肝脏脂质代谢紊乱,进而改善HFD小鼠糖耐量异常和胰岛素抵抗。

联合足底振动对废用性肌肉萎缩康复治疗的小鼠模型研究

目的临床发现长期固定、卧床和失重等可诱发废用性肌肉萎缩,且其康复治疗周期长、疗效差。局部振动具有针对性强,起效快等优势。本研究拟通过建立小鼠下肢废用性肌肉萎缩模型,分别施加足底振动、运动干预及联合干预,探究足底振动对肌肉萎缩的治疗效果,为临床康复治疗提供参考依据。方法30只6周龄C57BL/6J小鼠随机分为5组:对照组(Ⅰ),萎缩组(Ⅱ),足底振动组(Ⅲ)、运动干预组(Ⅳ)、联合干预组(Ⅴ)。除Ⅰ组外,所有小鼠后肢进行2周后肢固定。解除固定后分别对Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组进行为期3周的足底振动治疗(4900 r/min,15 min/d)、运动训练及联合干预治疗。在不同时间点对各组小鼠分别进行平衡木、步态测量。取腓肠肌检测肌湿重,后进行HE染色,PCR检测信号通路分子表达情况。结果与Ⅰ相比,Ⅱ组小鼠肌湿重及肌横截面积显著下降。Ⅴ组与Ⅲ、Ⅳ组相比,通过平衡木的时间分别缩短21.8%、11.3%,步长分别增加5.8%、3.2%,肌湿重分别增加11.8%、10%;Ⅴ组HE染色发现其肌肉横截面积增加最显著;同时IGF-1、AKT、PI3K等蛋白质合成相关分子表达量也显著升高。结论联合足底振动可以显著提高废用性肌肉萎缩的康复治疗效果,对其平衡能力和肌肉萎缩的恢复比单一治疗效果更显著。

部分胆管结扎致胆汁淤积小鼠模型的构建方法学研究

目的 观察不同结扎位点和禁食方法对部分胆管结扎(partial bile duct ligation, pBDL)致胆汁淤积C57BL/6J小鼠模型的影响,研究成模率高、症状典型、稳定性好的pBDL造模方法。方法 分别采用选择性结扎左肝胆管(L-pBDL法)和左侧与正中胆管汇合处(ML-pBDL法)进行造模,观察不同pBDL结扎法对C57BL/6J小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)、总胆红素、总胆汁酸和肝组织病理学的影响。同时,通过术前分别禁食12 h和禁食16 h、术后均禁食禁水4 h,观察不同禁食方法对ML-pBDL模型体症和肝损伤的影响。结果 (1)ML-pBDL组黄疸出现率52.94%、术后3周内存活率64.71%,而L-pBDL组黄疸出现率11.76%、术后3周内存活率82.35%;与假手术组比较,L-pBDL组和ML-pBDL组血清肝功能指标均显著升高(P<0.01),且ML-pBDL组ALP活性明显高于L-pBDL组(P<0.05);相对于L-pBDL组,ML-pBDL组术后3周的肝纤维化更严重(P<0.01);(2)禁食16 h组黄疸出现率93.33%、术后3周内存活率73.77%,而禁食12 h组黄疸出现率42.86%、术后3周内存活率71.42%;与假手术组比较,禁食16 h组和禁食12 h组ALP活性、谷草转氨酶/谷草转氨酶比值、总胆汁酸水平与胶原纤维面积占比均显著升高(P<0.05)。禁食16 h组各观察指标均高于禁食12 h组,但无显著性差异(P>0.05),禁食12 h和禁食16 h组均出现明显的胆管增生与肝纤维化(P<0.01),且禁食16 h组纤维化更严重(P<0.01)。结论 L-pBDL和ML-pBDL结扎法均可建立小鼠胆汁淤积模型,但L-pBDL模型症状仅表现为一过性的损伤特征,而ML-pBDL模型的肝病变典型、症状稳定,且适当延长术前禁食时间可提高ML-pBDL模型的成模率和稳定性,且病理症状更典型。

中医寒气对高脂饮食诱导肥胖模型小鼠脂肪组织TRPM8通路的影响

目的通过观察中医寒气对高脂饮食诱导肥胖型小鼠脂肪组织TRPM8的影响,探讨寒气减肥效应的作用机制。方法30只6~8周龄的雄性C57BL/6J野生型小鼠和TRPM8^(-/-)小鼠随机分为3组,分别为C57BL/6J 30℃组、C57BL/6J 4℃组、TRPM8^(-/-)4℃组。采用高脂饲养的方法复制肥胖型小鼠模型。所有小鼠首先饲养在温度为30℃、相对湿度为(55±15)%、室内风速0.1~0.2 m/s、光照周期12 h的笼子中4周,然后将C57BL/6J 4℃组、TRPM8^(-/-)4℃组小鼠转移至18℃的温度下适应性饲养1周,接着转移至4℃的低温饲养箱中饲养4周。作为对照组,C57BL/6J 30℃组小鼠始终在30℃环境下饲喂。9周后,取各组小鼠肩胛、附睾、腹膜脂肪组织并用HE染色法、免疫组织化学染色及Western blot法检测其TRPM8蛋白的表达。结果与C57BL/6J 4℃比较,TRPM8^(-/-)4℃组和C57BL/6J 30℃组肩胛和腹膜脂肪细胞数量显著减少(P<0.001),TRPM8蛋白的表达明显减少。结论中医寒气可诱导肥胖小鼠脂肪细胞TRPM8蛋白的高表达,影响脂肪代谢,有望成为减肥药物研发的新策略,TRPM8有望成为减肥药物研发的新靶点。

持续高速旋转载荷下的小鼠耐受阈值及脑损伤研究

目的在航空航天领域中,特技飞行、舰载机飞行员弹射逃生以及飞船着陆过程始终伴随持续的高速旋转运动,而高速旋转载荷是导致颅脑损伤的主要原因之一。本实验将探究持续的高速旋转载荷,即高转速-持续时间下,小鼠的耐受阈值以及脑损伤情况,以期为航天员训练以及相关防护措施的制定提供理论依据。方法将C57BL/6J小鼠的头部固定于旋转轴中央,在不同转速下进行全身高速持续旋转。记录7 d内小鼠死亡率;于旋转后1 h~7 d进行神经损伤严重程度评分(NSS);取材脑组织并进行HE染色分析。结果本实验确定并拟合了引起C57BL/6J小鼠50%死亡可能性的不同旋转速度-持续时间的阈值曲线;创伤后1 h各组小鼠的NSS评分显示轻-中度损伤,并于7 d内逐步恢复;未见明显的脑实质出血,HE染色观察到致伤组切片细胞核通透性增大,提示创伤后小鼠可能出现脑水肿。结论持续旋转载荷下,转速越高,引起动物死亡所需的持续时间越短;未引起明显脑实质出血,但可能引起脑水肿。持续高旋转载荷对于脑组织的影响仍需进一步探讨。